本文選題：雌激素受體alpha + 乳腺癌��； 參考：《山東大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,已經(jīng)成為女性癌癥死亡的首要原因。近幾十年來,全球乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢,僅2012年就有約170萬女性被診斷患上乳腺癌,52.2萬名患者死于此癥。我國的乳腺癌發(fā)病率也逐年增長,以每年3%的增幅成為我國近10年增長速度最快的腫瘤,預(yù)計到2021年乳腺癌發(fā)病率能夠達到250萬,不僅嚴(yán)重影響女性的身體健康,還給家庭、社會帶來了巨大的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。雌激素受體(ER)的表達水平與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。雌激素結(jié)合ER,激活ER與雌激素應(yīng)答元件(ERE)結(jié)合,起始多重基因轉(zhuǎn)錄,這些基因參與了乳腺癌細胞的增殖和分化。根據(jù)ER表達水平可將乳腺癌分為ER陽性和ER陰性,ER陽性乳腺癌約占65%,ERa表達水平?jīng)Q定著內(nèi)分泌治療甚至化療效果。他莫昔芬作為內(nèi)分泌治療的經(jīng)典藥物,能夠競爭性阻斷雌激素與ER的結(jié)合,抑制ER陽性乳腺癌細胞的增殖。ER陰性乳腺癌由于ER表達缺失或低表達,對他莫昔芬治療不敏感。此外,隨著治療的深入,部分ER陽性乳腺癌可能轉(zhuǎn)為陰性,他莫昔芬失去療效。因此,如何增加ER陰性乳腺癌他莫昔芬敏感性是乳腺癌治療領(lǐng)域的研究熱點。姜黃素是一種從姜科植物姜黃等根莖中提取的多酚類化合物,姜黃素具有抗凝血、降脂、利膽、抗氧化、抗腫瘤等作用。近年來,姜黃素在乳腺癌治療中的應(yīng)用研究得到廣泛關(guān)注,例如,姜黃素激活自噬依賴性的Akt降解從而抑制ERa陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞的增殖和遷移；姜黃素抑制脂肪酸合酶活性誘導(dǎo)MDA-MB-231細胞凋亡；姜黃素與PARP抑制劑聯(lián)合應(yīng)用抑制MDA-MB-231細胞增殖;姜黃素通過降低NF-κB/AP-1轉(zhuǎn)錄活性從而抑制MDA-MB-231細胞增殖和侵襲,體內(nèi)試驗表明姜黃素有效地減少了乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移；此外,姜黃素還能夠抑制其他轉(zhuǎn)錄因子的活性,包括TNFα、IL、STAT3和PPARy,它們由于調(diào)節(jié)著多重基因轉(zhuǎn)錄在乳腺癌發(fā)生過程中起著關(guān)鍵作用。SLUG又名Snai2,是一種鋅指轉(zhuǎn)錄因子,通過與基因啟動子區(qū)域的E-box (CANNTG)結(jié)合抑制基因轉(zhuǎn)錄。SLUG的表達水平與結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌等的不良預(yù)后密切相關(guān)。與其他亞型的乳腺癌相比,三陰性乳腺癌中SLUG表達最高。在ERa陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞中過表達ERa,結(jié)合雌二醇作用,明顯抑制SLUG的表達,相反,ERa陽性乳腺癌MCF7和T47D細胞中敲除ERa明顯增加了SLUG的表達。近期,SLUG被發(fā)現(xiàn)參與了ERa的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,但SLUG是否與ERa陰性乳腺癌他莫昔芬敏感性有關(guān)需要進一步證實。此外,姜黃素能否靶向SLUG有待于進一步研究。研究方法與結(jié)果本文旨在研究姜黃素在ERa陰性乳腺癌他莫昔芬敏感性及相關(guān)作用機制,主要包括以下研究內(nèi)容：1、姜黃素對ERa陰性乳腺癌他莫昔芬敏感性的影響1.1、研究方法我們首先分析了姜黃素對ERa陽性和陰性乳腺癌的劑量效應(yīng)與時間效應(yīng),隨后,檢測了4-羥基他莫昔芬對ERa陽性和陰性乳腺癌的劑量效應(yīng)與時間效應(yīng),通過CCK8細胞增殖實驗、乳酸脫氫酶(LDH)釋放實驗及流式細胞分析分別檢測細胞活性、細胞毒性及細胞凋亡,從而確定姜黃素和4-羥基他莫昔芬的準(zhǔn)確作用濃度和作用時間,分析一定濃度的姜黃素和4-羥基他莫昔芬聯(lián)合作用一定時間,明確姜黃素對ERa陰性乳腺癌他莫昔芬敏感性的影響。1.2、研究結(jié)果CCK8實驗結(jié)果顯示,姜黃素對ERa陰性乳腺癌的抑制作用相對于ERa陽性乳腺癌更加明顯,相反,4-羥基他莫昔芬對ERa陽性乳腺癌的抑制作用具有明顯的劑量依賴性和時間依賴性。我們分別選擇5μM的姜黃素和10μM的4-羥基他莫昔芬作為后續(xù)作用濃度,LDH釋放實驗和流式細胞分析均證明姜黃素能夠增加ERa陰性乳腺癌細胞對4-羥基他莫昔芬的敏感性。2、姜黃素促進ERa陰性乳腺癌細胞他莫昔芬敏感性的機制研究2.1研究方法我們通過western blot法檢測分析了SLUG在ERa陽性和陰性乳腺癌細胞中的差異表達。隨后,western blot分析了姜黃素和4-羥基他莫昔芬對SLUG表達的影響。通過熒光素酶報告實驗和染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)檢測了SLUG對己糖激酶2(HK2)啟動子的結(jié)合能力及轉(zhuǎn)錄活性。在ERa陰性乳腺癌細胞中通過小干擾RNA (siRNA)抑制SLUG表達,確定SLUG抑制在ERa陰性乳腺癌細胞他莫昔芬敏感性中的作用及對HK2蛋白表達的影響。在ERa陽性乳腺癌細胞中通過SLUG過表達,確定SLUG表達上調(diào)對ERa陽性乳腺癌細胞他莫昔芬敏感性的影響。通過分析姜黃素、4-羥基他莫昔芬對線粒體介導(dǎo)凋亡通路的關(guān)鍵蛋白mTOR磷酸化、細胞色素C的釋放以及Caspase3的激活的影響,確定姜黃素聯(lián)合4-羥基他莫昔芬是如何促進ERa陰性乳腺癌細胞凋亡的。2.2研究結(jié)果我們的結(jié)果顯示,SLUG在ERa陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231中的表達明顯高于ERa陰性乳腺癌細胞MCF7。姜黃素處理MDA-MB-231細胞劑量依賴式的抑制SLUG的表達,而4-羥基他莫昔芬卻劑量依賴式的促進SLUG的表達,5μM的姜黃素和10μM的4-羥基他莫昔芬聯(lián)合作用證實,姜黃素能夠阻斷4-羥基他莫昔芬對SLUG的促進作用。為了闡明SLUG在ERa陰性乳腺癌細胞中如何發(fā)揮作用,我們通過熒光素酶報告實驗來分析SLUG對HK2的轉(zhuǎn)錄活性,結(jié)果顯示SLUG能夠識別HK2的啟動子促進熒光素酶的表達。ChIP實驗進一步證實SLUG能夠與HK2啟動子結(jié)合,說明SLUG直接參與了HK2的轉(zhuǎn)錄。RT-PCR結(jié)果顯示姜黃素降低了HK2的mRNA水平,4-羥基他莫昔芬提升了HK2的mRNA水平,可能是由于它們對SLUG表達的作用差異所致。Western blot及流式細胞分析結(jié)果顯示HK2在MDA-MB-231細胞中的表達明顯高于MCF7細胞。在MDA-MB-231細胞中干擾SLUG的表達抑制了HK2的表達,同時也增加了細胞他莫昔芬敏感性。有意思的是,姜黃素和4-羥基他莫昔芬作用干擾SLUG的MDA-MB-231細胞或SLUG低表達的MCF7細胞對HK2的表達沒有明顯影響。相反,在MCF7細胞中過表達SLUG促進了HK2的表達,同時降低了細胞他莫昔芬敏感性。姜黃素和4-羥基他莫昔芬作用MDA-MB-231細胞或SLUG過表達的MCF7細胞分別抑制和提升了HK2的表達。這些結(jié)果說明,姜黃素對低表達SLUG細胞不敏感,但對高表達SLUG細胞抑制作用明顯,而SLUG過表達有助于乳腺癌細胞對4-羥基他莫昔芬產(chǎn)生抗性,推測姜黃素可能靶向SLUG從而抑制HK2的表達,促進ERa陰性乳腺癌細胞對他莫昔芬的敏感性。姜黃素與4-羥基他莫昔芬聯(lián)合作用MDA-MB-231細胞能夠有效抑制mTOR的磷酸化,促進細胞色素C從線粒體釋放到胞質(zhì),激活Caspase3,這些結(jié)果說明,姜黃素與4-羥基他莫昔芬聯(lián)合作用促進了線粒體介導(dǎo)的細胞凋亡,表明姜黃素促進了MDA-MB-231細胞對4-羥基他莫昔芬的敏感性。3、SLUG和HK2在ERa陽性和陰性乳腺癌組織中差異表達分析3.1研究方法我們通過熒光定量PCR驗證了SLUG和HK2在ERa陽性和陰性乳腺癌組織中的表達情況,并通過Western blot和免疫組織化學(xué)染色進行進一步確認(rèn)。3.2研究結(jié)果我們選取了ERa陽性和陰性乳腺癌組織各34例,首先通過熒光定量PCR分析了SLUG的差異表達。結(jié)果顯示SLUG在ERa陰性乳腺癌組織中的表達明顯高于ERα陽性乳腺癌組織。免疫組化法和Western blot結(jié)果也證實SLUG在ERa陰性乳腺癌組織中表達更高。我們進一步檢測了HK2在所選ERa陽性和陰性乳腺癌組織中的差異表達。熒光定量PCR結(jié)果顯示,HK2在ERa陰性乳腺癌中的表達高于ERa陽性乳腺癌,免疫組化法進一步證實這一結(jié)果。Western blot結(jié)果顯示,在所選組織中,HK2在ERa陰性乳腺癌中的表達確實高于ERa陽性乳腺癌。將所得SLUG和HK2表達數(shù)據(jù)結(jié)合臨床標(biāo)本的詳細信息,我們發(fā)現(xiàn),ERa陽性乳腺癌中SLUG的表達率達到76.47%,SLUG的表達與Era呈負(fù)相關(guān)。無論Era的表達是陽性還是陰性,SLUG的表達與腫瘤大小、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移都呈正相關(guān),由此,Slug的表達可能促進腫瘤的生長和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,是乳腺癌治療的潛在靶點。結(jié)論：1、姜黃素對ERa陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞的抑制效率明顯高于ERa陽性乳腺癌MCF7細胞。2、姜黃素能夠增加ERa陰性乳腺癌細胞對4-羥基他莫昔芬的敏感性。3、姜黃素能夠抑制SLUG/己糖激酶2通路,從而促進ERa陰性乳腺癌細胞對4-羥基他莫昔芬敏感。4、SLUG能夠直接與己糖激酶2的啟動子區(qū)結(jié)合,激活己糖激酶2的轉(zhuǎn)錄。5、SLUG有助于削弱ERa陰性乳腺癌細胞的4-羥基他莫昔芬敏感性,姜黃素靶向SLUG增加ERa陰性乳腺癌細胞對4-羥基他莫昔芬敏感性。6、SLUG和己糖激酶2在ERa陰性乳腺癌組織中的表達明顯高于ERa陽性乳腺癌組織。意義：1、證實姜黃素能夠增加ERα陰性乳腺癌細胞對4-羥基他莫昔芬的敏感性,提示姜黃素具有作為他莫昔芬聯(lián)合輔助因子在臨床中的應(yīng)用潛力。2、發(fā)現(xiàn)了姜黃素促進ERα陰性乳腺癌細胞對4-羥基他莫昔芬敏感的新機制。3.揭示了姜黃素新的作用靶點。
[Abstract]:In recent decades , the incidence of breast cancer has been increasing year by year . In recent decades , some 1.7 million women have been diagnosed with breast cancer .
curcumin inhibits the activity of fatty acid synthase to induce apoptosis of MDA - MB - 231 cells ;
In vivo , curcumin inhibited the proliferation and invasion of MDA - MB - 231 cells by inhibiting the proliferation and invasion of MDA - MB - 231 cells .
The effect of curcumin on ERa - negative breast cancer was studied . The results showed that curcumin and 4 - hydroxytamoxifen inhibited the expression of HK2 . The results showed that curcumin and 4 - hydroxytamoxifen inhibited the expression of HK2 . The results showed that curcumin and 4 - hydroxytamoxifen inhibited the expression of HK2 . The results showed that curcumin and 4 - hydroxytamoxifen inhibited the expression of HK2 . The results showed that curcumin could increase the sensitivity of ERa negative breast cancer cells to 4 - hydroxytamoxifen .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 WisemanH,徐積恩;他莫昔芬:膜介作用新機制和治療進展[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;1994年05期

2 郭利;慎用他莫昔芬[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;2001年02期

3 ;新基因位點可預(yù)測他莫昔芬的療效[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2004年04期

4 林旭豐;;中藥結(jié)合他莫昔芬治療男性乳房異常發(fā)育癥15例療效觀察[J];浙江臨床醫(yī)學(xué);2008年03期

5 朱余兵;張倩;于翠霞;鄒建軍;盧_";肖大偉;;離線紫外照射和高效液相熒光法測定他莫昔芬及代謝物在人血漿中的濃度[J];中國藥學(xué)雜志;2009年21期

6 劉朋;王芙榮;紀(jì)立偉;李可欣;;212例他莫昔芬不良反應(yīng)回顧性分析[J];中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測;2011年06期

7 張燕青;王連生;;基因多態(tài)對他莫昔芬療效影響研究進展[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2012年03期

8 溫蔭芬;;他莫昔芬用鈀催化交叉偶合一步合成法[J];國外醫(yī)藥.合成藥.生化藥.制劑分冊;1988年03期

9 孫衛(wèi)華;他莫昔芬的慢性不良反應(yīng)[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;1993年03期

10 徐積恩;他莫昔芬的新作用[J];國外醫(yī)藥.合成藥.生化藥.制劑分冊;1995年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張燕青;王連生;;基因多態(tài)對他莫昔芬療效影響研究進展[A];第十五屆中國神經(jīng)精神藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2012年

2 卞衛(wèi)和;李琳;楊靜;;辨證治療乳腺癌患者口服他莫昔芬不良反應(yīng)[A];第十二次全國中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合乳房病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

3 王愛華;唐惠林;馮欣;;他莫昔芬治療多囊卵巢綜合征的系統(tǒng)評價[A];2012年全國醫(yī)院藥學(xué)學(xué)術(shù)年會暨第72屆世界藥學(xué)大會衛(wèi)星會論文集[C];2012年

4 焦莉;杜怡峰;郭守剛;;他莫昔芬在大鼠大腦中動脈缺血再灌注海馬遲發(fā)性神經(jīng)元死亡和遠期記憶功能中的作用及其機制的研究[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國神經(jīng)免疫大會2013論文匯編[C];2013年

5 郭人花;王同杉;孫靖;金時代;束永前;;他莫昔芬抑制肝癌細胞HepG2增殖和誘導(dǎo)凋亡的機制研究[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會教育集暨論文集[C];2009年

6 毛曉丹;孫蓬明;林芬;董濱華;宋一一;;他莫昔芬,雷洛昔芬,XCT790作用于內(nèi)膜癌細胞的流式分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科腫瘤會場（婦科腫瘤學(xué)組、婦科病理學(xué)組）論文匯編[C];2012年

7 高德宗;唐魯兵;李亮;余之剛;;γ-干擾素增強他莫昔芬抗乳腺癌作用的體外實驗研究[A];山東抗癌協(xié)會普外腫瘤專業(yè)委員會第三次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

8 杜貴強;周瓏;陳曉悅;賀銀燕;萬小平;;G蛋白偶聯(lián)受體GPR30介導(dǎo)了4羥基他莫昔芬誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜癌細[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科腫瘤會場（婦科腫瘤學(xué)組、婦科病理學(xué)組）論文匯編[C];2012年

9 卞衛(wèi)和;李琳;楊靜;;調(diào)理陰陽——乳腺癌他莫昔芬毒副反應(yīng)的中醫(yī)治療思路[A];第十二次全國中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合乳房病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

10 薛靜;田軍偉;張文;徐東;;原發(fā)性腹膜后纖維化九例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會全國風(fēng)濕病學(xué)年會論文匯編[C];2003年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 黃燕;英揭示他莫昔芬耐藥原因[N];中國醫(yī)藥報;2009年

2 本報特約撰稿人 徐錚奎;他莫昔芬涅i肹N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2008年

3 王寶龍；王宏杰;上海華聯(lián)制藥攻克他莫昔芬制備難題[N];中國醫(yī)藥報;2005年

4 麥迪信;他莫昔芬功不可沒！[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

5 方留民;他莫昔芬可減少乳腺良性病變[N];中國醫(yī)藥報;2004年

6 王伯秋;他莫昔芬副作用引起業(yè)內(nèi)關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報;2004年

7 ;治療早期乳腺癌他莫昔芬和放療同時使用與序貫治療的療效均理想[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

8 ;挑戰(zhàn)治療“金標(biāo)準(zhǔn)”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

9 ;他莫昔芬預(yù)防乳腺癌存在風(fēng)險[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

10 ;他莫昔芬預(yù)防乳腺癌有講究[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王強;他莫昔芬激活ERα36增強乳腺癌轉(zhuǎn)移及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 周賢孝;基于基因表達相對秩序預(yù)測ER+乳腺癌對他莫昔芬的敏感性[D];電子科技大學(xué);2014年

3 耿沖;姜黃素促進ER alpha陰性乳腺癌他莫昔芬敏感的機制研究[D];山東大學(xué);2016年

4 王龍強;他莫昔芬對雌激素受體陰性乳腺癌細胞的殺傷能力的研究[D];華中科技大學(xué);2014年

5 陳多;選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑對小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的損傷作用及機理研究[D];沈陽藥科大學(xué);2001年

6 孫雪波;他莫昔芬在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的神經(jīng)保護作用及機制研究[D];蘇州大學(xué);2013年

7 王帥;SHG-44人膠質(zhì)瘤細胞的離子通道特性及他莫昔芬抗膠質(zhì)瘤作用的機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

8 周艷;乳腺癌ERβ表達的臨床意義及其與他莫昔芬治療耐藥相關(guān)意義的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

9 袁霞;應(yīng)用基因芯片（Microarray）和實時監(jiān)測聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）技術(shù)檢測他莫昔芬和雌二醇對人類乳腺癌細胞基因表達的調(diào)控[D];吉林大學(xué);2005年

10 徐春園;Metadherin介導(dǎo)MCF-7乳腺癌細胞雌激素非依賴性生長和他莫昔芬耐藥機制的研究[D];山東大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙明智;他莫昔芬對SK-BR-3乳腺癌細胞株荷瘤裸鼠血管生成的作用及機制研究[D];河北大學(xué);2015年

2 楊墨琳;PAX2、AIB1在人乳腺癌細胞生長及他莫昔芬治療作用的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 胡夢裳;~(18)F-FDG評價PI3K信號通路抑制劑聯(lián)合他莫昔芬治療乳腺癌的早期療效[D];蘇州大學(xué);2015年

4 駱廣濤;EZH2蛋白在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細胞系的表達及對其細胞增殖的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 石統(tǒng)偉;利用基因表達的秩次關(guān)系預(yù)測他莫昔芬的治療效果[D];電子科技大學(xué);2014年

6 袁杰;探討ITGB1在GPER介導(dǎo)的乳腺癌他莫昔芬耐受中的作用機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 嚴(yán)玉釗;GPER介導(dǎo)他莫昔芬對人乳腺癌相關(guān)成纖維細胞的增殖、遷移及凋亡作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 張雪峰;OATP1B1與CYP2D6*10基因多態(tài)性對他莫昔芬治療乳腺癌療效的相關(guān)性研究[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2015年

9 盛文;加味地黃湯治療他莫昔芬所致子宮內(nèi)膜增生的臨床研究[D];云南中醫(yī)學(xué)院;2014年

10 楊靜;調(diào)理陰陽法對乳腺癌患者他莫昔芬治療毒副作用的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

，

本文編號：1863835