本文選題：宮頸癌 + FOXO1�。� 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率雖僅次于乳腺癌居全球第二位,但死亡率卻高居首位。近些年來調(diào)查研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌發(fā)病率呈現(xiàn)明顯上升且有年輕化趨勢,嚴(yán)重威脅著廣大婦女的健康和生命安全。因此,開展針對宮頸癌的防治研究意義深遠(yuǎn)。以往人們對宮頸癌發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識一直停留在患者伴有人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染的認(rèn)識水平,近期研究發(fā)現(xiàn),HPV感染并不能夠獨(dú)立導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生,僅是一種高危因素。隨著原癌基因、抑癌基因不斷相繼被發(fā)現(xiàn),人們從基因的角度、視野來理解、認(rèn)識腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移過程。到目前為止,大量的研究已經(jīng)證實(shí),腫瘤的演變進(jìn)程必然伴有原癌基因的激活、抑癌基因的失活或是參與細(xì)胞增殖分化、凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑失調(diào)。因此,原癌基因的失活或抑癌基因的激活成為宮頸癌治療研究的新熱點(diǎn)。本試驗(yàn)研究選取FOXO1(Subfamily O1 of Forkhead transcription factors,FOXO1)作為研究切入點(diǎn),探討其在宮頸癌的演變過程中所發(fā)揮的作用。同時(shí),在轉(zhuǎn)錄水平上初步分析腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)與FOXO1間的相互作用關(guān)系以及潛在的調(diào)控作用,試圖揭示TNF-α/FOXO1途徑誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡的可能機(jī)制,為TNF-α聯(lián)合FOXO1用于宮頸癌的治療提供理論依據(jù)和試驗(yàn)基礎(chǔ)。本試驗(yàn)主要研究結(jié)果如下:(1)FOXO1蛋白在不同類型宮頸組織中的表達(dá)存在明顯差異(P0.05)。其中,在正常宮頸和上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)組織中,FOXO1蛋白呈現(xiàn)陽性表達(dá),而在宮頸癌組織中呈現(xiàn)表達(dá)下調(diào)或缺失狀態(tài)。結(jié)果揭示,FOXO1蛋白的異常表達(dá)反映宮頸組織出現(xiàn)惡性病變的傾向,有助于臨床上宮頸癌的早期診斷及風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測。(2)FOXO1蛋白的異常表達(dá)與宮頸癌患者的年齡、組織病理學(xué)類型無相關(guān)性(P0.05),卻與FIGO分期、細(xì)胞分化程度和盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性(P0.05),FOXO1蛋白表達(dá)下調(diào)愈明顯,臨床預(yù)后越不佳。結(jié)果表明,FOXO1蛋白可作為宮頸癌患者臨床預(yù)后的分子標(biāo)志物,并對治療效果的判定具有參考價(jià)值。(3)不同HPV感染狀態(tài)、相同HPV感染狀態(tài)的人宮頸癌細(xì)胞中,FOXO1蛋白的表達(dá)均存在明顯差異(P0.05)。其中,FOXO1在宮頸癌C-33A細(xì)胞的mRNA水平表達(dá)最高(P0.05),且相應(yīng)蛋白表達(dá)水平也最高(P0.05),而在宮頸癌SiHa細(xì)胞的表達(dá)水平均最低(P0.05)。由此認(rèn)為,FOXO1的表達(dá)下調(diào)或缺失與宮頸癌患者伴有HPV感染不具有相關(guān)性,是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。(4)將FOXO1超表達(dá)載體(pCMV6-ENTRY-FOXO1重組質(zhì)粒)轉(zhuǎn)染至宮頸癌SiHa細(xì)胞,觀察到腫瘤細(xì)胞的增殖速度減緩(P0.05),細(xì)胞周期阻滯(P0.05),細(xì)胞凋亡率增加(P0.05),凋亡蛋白Caspase-3、8、9的表達(dá)上調(diào)(P0.05)。結(jié)果證實(shí),FOXO1在宮頸癌是一種抑癌基因,可以作為潛在的基因治療靶向位點(diǎn)。(5)不同作用濃度的TNF-α、在相同的作用時(shí)間點(diǎn)以及同一作用濃度、在不同的作用時(shí)間點(diǎn)處理宮頸癌C-33A細(xì)胞后,檢測目標(biāo)基因FOXO1mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示,TNF-α能夠上調(diào)FOXO1的表達(dá)(P0.05),且呈現(xiàn)時(shí)間、劑量依賴性(P0.05)。結(jié)果揭示,細(xì)胞因子TNF-α和抑癌基因FOXO1之間的作用關(guān)系,TNF-α/FOXO1的潛在調(diào)控作用。(6)轉(zhuǎn)染pCMV6-ENTRY-FOXO1重組質(zhì)粒和添加外源性TNF-α作用于宮頸癌C-33A細(xì)胞,觀察到腫瘤細(xì)胞活力降低(P0.05),細(xì)胞周期阻滯(P0.05),細(xì)胞凋亡率以及凋亡蛋白Caspase-3、8、9表達(dá)上調(diào)(P0.05)。轉(zhuǎn)染FOXO1siRNA干擾片段至宮頸癌C-33A細(xì)胞,即使后續(xù)給予TNF-α刺激,對宮頸癌細(xì)胞致癌潛能的影響作用低于TNF-α處理組(P0.05)。結(jié)果再次證實(shí),細(xì)胞因子TNF-α對抑癌基因FOXO1存在調(diào)控作用,同時(shí),揭示TNF-α/FOXO1途徑誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡的可能機(jī)制,TNF-α通過上調(diào)FOXO1的表達(dá)并提高其轉(zhuǎn)錄活性,抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡,從而發(fā)揮抗瘤作用。綜上所述,TNF-α和FOXO1這兩個(gè)腫瘤相關(guān)基因聯(lián)合運(yùn)用于宮頸癌治療,不僅能充分發(fā)揮細(xì)胞因子TNF-α的強(qiáng)大殺傷腫瘤細(xì)胞作用,還能上調(diào)FOXO1的腫瘤抑制因子作用,彼此協(xié)同,增強(qiáng)效應(yīng),可能成為今后宮頸癌治療的突破點(diǎn)。
[Abstract]:Cervical cancer is a common malignant tumor in female reproductive system . The incidence of cervical cancer is second only after breast cancer , but the mortality rate is high . In recent years , it has been found that the expression of tumor necrosis factor - 偽 ( TNF - 偽 ) in cervical cancer has a significant difference ( P0.05 ) . ( 4 ) The expression of FoxO1 was higher than that of cervical cancer patients ( P0.05 ) . The results showed that the expression of FoxO1 was higher than that of cervical cancer patients ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33

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本文編號：1854603