本文選題：乳腺癌 + TET1��； 參考：《河北醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：第一部分構建低表達TET1的MCF-7細胞株目的:乳腺癌近些年來的發(fā)病率逐年升高,其治療形成了以手術、化療、內分泌治療、放療、靶向治療及生物治療為主的綜合治療。然而,乳腺癌的致死率依舊高居女性惡性腫瘤死亡率的第三位。這其中,有超過90%的死亡是由于腫瘤的復發(fā)轉移引起的。因此,探索腫瘤發(fā)生發(fā)展、浸潤及轉移機制一直是研究熱點。有研究表明,10-11異位蛋白(ten-eleven translocation1,TET1)作為促DNA去甲基化過程中的重要蛋白,可以催化5-甲基胞嘧啶(5m C)轉化為5-羥甲基胞嘧啶(5hm C),實現(xiàn)DNA去甲基化和基因表達的調控。因此,本研究以人乳腺癌MCF-7細胞株為模型,通過沉默TET1基因表達,研究TET1對MCF-7細胞生物學行為的影響,以期為腫瘤的臨床診治提供新的靶點。材料與方法:應用慢病毒轉染方法,構建TET1低表達的穩(wěn)轉細胞株(MCF-7-si TET1)以及攜帶e GFP的陰性對照穩(wěn)轉細胞株(MCF-7-negative control,MCF-7-NC),運用SYBR Green法實時熒光定量PCR檢測TET1在轉錄水平的表達,Western blot法檢測TET1在蛋白水平的表達。結果:成功建立低表達TET1的MCF-7細胞模型(MCF-7-si TET1),用SYBR Green法實時定量PCR檢測TET1的表達,結果示,在MCF-7-si TET1中,與MCF-7-NC組相比,MCF-7-si TET1細胞中TET1表達下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001);Western blot法檢測TET1表達,應用Image J掃描其灰度值,結果表明,與MCF-7-NC組相比,MCF-7-siTET1細胞中TET1表達下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結論:成功構建沉默TET1的MCF-7-si TET1穩(wěn)轉細胞株模型。第二部分TET1對乳腺癌MCF-7細胞系生物學行為的影響目的:10-11異位蛋白(ten-eleven translocation1,TET1)在DNA去甲基化過程中發(fā)揮重要作用,可通過催化5m C轉化為5hm C實現(xiàn)DNA去甲基化和基因表達的調控。有研究指出,TET1基因的突變與多種實體瘤的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉移密切相關,但其作用機制有待進一步研究。因此,本研究探究TET1對MCF-7細胞增殖、遷移、侵襲等生物學行為的影響,并通過實驗初步探究TET1影響的相關分子機制,以期為腫瘤的臨床診治提供新的思路。材料與方法:1倒置顯微鏡下觀察轉染細胞形態(tài),以MCF7-NC作為陰性對照組,以MCF-7作為空白對照組,運用CCK-8法檢測沉默TET1對MCF-7細胞增殖的影響,利用細胞劃痕實驗、TranswellTM檢測TET1對細胞遷移、侵襲能力的作用,最后應用Western blot檢測TET1與EMT相關蛋白(E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin)分子的表達。2應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行實驗數(shù)據(jù)分析,兩獨立樣本的比較應用成組t檢驗分析,多組間均數(shù)的比較應用單因素方差分析,多樣本均數(shù)間的多重比較應用Tukey檢驗分析,數(shù)據(jù)運用mean±SD表示,每組實驗不少于3個獨立樣本的重復,以P0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。結果:1 CCK-8法檢測細胞的增殖能力,MCF-7組與MCF-7-NC組相比,細胞增殖未見明顯差異,而MCF-7-si TET1組細胞增殖能力相較前兩組明顯升高(P0.001)。平板克隆形成實驗檢測細胞增殖能力,MCF-7組與MCF-7-NC組相比,細胞增殖未見明顯差異,而MCF-7-si RNA組細胞增殖能力高于MCF-7-NC組和MCF-7組(P0.0001)。2細胞劃痕實驗檢測細胞的遷移能力,與MCF-7組及MCF-7-NC組相比,MCF-7-si TET1組細胞的遷移能力顯著增強(P0.01)。3 TranswellTM小室檢測細胞的侵襲能力,與MCF-7組和MCF-7-NC組相比,MCF-7-si TET1組細胞的侵襲能力顯著上升(P0.0001)。4選用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),MCF-7-NC組和MCF-7-si TET1組細胞形態(tài)無明顯變化,進一步運用Western blot法檢測EMT相關標志物:與MCF-7組和MCF-7-NC組細胞相比,MCF-7-si TET1組細胞的E-cadherin表達降低(P0.0001),N-cadherin表達升高(P0.0001)、Vimentin表達升高(P0.01),β-catenin表達升高(P0.01)。結論:TET1可以抑制MCF-7細胞的增殖、遷移、侵襲能力,其可能與通過Wnt/β-catenin通路抑制EMT的發(fā)生有關。
[Abstract]:The expression of TET1 in MCF - 7 - si TET1 cell line MCF - 7 - si TET1 was detected by SYBR Green method . The effects of TET1 on proliferation , migration and invasion of breast cancer MCF - 7 cells were investigated . Compared with MCF - 7 and MCF - 7 - NC groups , the expression of E - cadherin in MCF - 7 - si TET1 group increased significantly ( P0.01 ) .

【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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1 Binhua P.Zhou;;Epithelial-mesenchymal transition in breast cancer progression and metastasis[J];癌癥;2011年09期

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本文編號：1848578