本文選題：非小細(xì)胞肺癌 + 侵襲轉(zhuǎn)移　； 參考：《山東大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：肺癌尤其是非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)具有高發(fā)病率、高轉(zhuǎn)移性、易復(fù)發(fā)和易耐藥等特性,已成為全球范圍內(nèi)致死性最高的癌癥。絕大多數(shù)患者會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移,而且約30%的手術(shù)切除后患者發(fā)生復(fù)發(fā)甚至死亡,所以針對(duì)非小細(xì)胞肺癌的預(yù)防轉(zhuǎn)移治療及藥物研發(fā)成為亟待解決的難題。研究表明超過(guò)60%的非小細(xì)胞肺癌患者癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)EGFR,而使用酪氨酸激酶抑制劑(TKIs)是最佳治療方案,然而至今仍沒(méi)有藥物能有效提高總存活率。其中最大的挑戰(zhàn)是過(guò)表達(dá)受體酪氨酸激酶(RTK)的癌細(xì)胞會(huì)通過(guò)PI3K信號(hào)通路抵抗TKIs的作用。大量研究表明PI3K/Ak t信號(hào)網(wǎng)絡(luò)在NSCLC誘發(fā)及轉(zhuǎn)移中具有重要作用。許多NSCLC早期患者的原發(fā)癌組織和轉(zhuǎn)移前沿中發(fā)現(xiàn)有PIK3CA基因的擴(kuò)增、PI3K蛋白的高表達(dá)以及信號(hào)通路下游因子Akt、mTOR、PTEN的異常表達(dá),靶向該信號(hào)通路中關(guān)鍵酶的抗癌藥物開(kāi)發(fā)已成為腫瘤預(yù)防和治療的突破點(diǎn)。目前,雖已有PI3K通路抑制劑進(jìn)入臨床應(yīng)用于部分患者,但針對(duì)這一通路的靶向小分子抑制劑的開(kāi)發(fā)依舊是藥物研發(fā)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。小分子化合物S14161 (8-乙氧基-2-(4-氟苯基)-3-硝基-2氫-苯并吡喃)是3-硝基苯并吡喃類外消旋化合物,是一種PI3K抑制劑,但由于其手性結(jié)構(gòu)和較差的溶解性能抑制了其進(jìn)一步的應(yīng)用。為獲得活性更優(yōu)的化合物,我院藥化研究所劉兆鵬教授對(duì)S14161的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了簡(jiǎn)化,去除2位的4-氟苯基,發(fā)現(xiàn)了活性更好的3-硝基-2H-苯并吡喃類抗腫瘤衍生物BENC-511(6-溴-8-乙氧基-3-硝基-2氫-苯并吡喃)。前期實(shí)驗(yàn)顯示BENC-511主要作用于PI3K/Akt通路,能顯著抑制腫瘤細(xì)胞中Akt的磷酸化程度及下游信號(hào)蛋白的表達(dá),具有良好的抗白血病和多發(fā)性骨髓瘤活性和較低毒性,但對(duì)非小細(xì)胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用未見(jiàn)報(bào)道。本課題主要從體外及體內(nèi)水平考察BENC-511在抑制非小細(xì)胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移方面的作用,并進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)PI3K相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)以及蛋白間相互作用闡明其作用機(jī)制。通過(guò)考察該化合物在抑制肺癌轉(zhuǎn)移方面的作用,進(jìn)一步完善其抗腫瘤活性研究,并為尋找新的作用靶點(diǎn)、研發(fā)新型抗肺癌轉(zhuǎn)移藥物提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果體外試驗(yàn)：應(yīng)用人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株HUVEC,采用劃痕試驗(yàn)觀察化合物BENC-511(5和10μmol/L) 和S14161對(duì)細(xì)胞遷移的抑制作用；用Transwell小室試驗(yàn)檢測(cè)BENC-511(10、5、2.5、1.25μmol/L)和S14161 (10μmol/L)對(duì)A549細(xì)胞侵襲的抑制作用。結(jié)果顯示,BENC-511可抑制HUVEC細(xì)胞遷移能力；可抑制A549細(xì)胞遷移及侵襲能力。體內(nèi)試驗(yàn)：采用C57BL/6J、鼠尾靜脈注射B16BL6黑色素瘤細(xì)胞從而構(gòu)建癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型,持續(xù)灌胃給藥BENC-511(20和40mg/kg)兩周,取小鼠雙肺,計(jì)數(shù)黑色轉(zhuǎn)移瘤結(jié)節(jié)；采用A549-luc-GFP細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)構(gòu)建實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型,連續(xù)灌胃給藥2周,期間在第10天及14天用生物發(fā)光小動(dòng)物活體成像儀觀察瘤體積變化及轉(zhuǎn)移情況。另外采用裸鼠移植瘤試驗(yàn),小鼠腋下接種A549-luc-GFP細(xì)胞構(gòu)建小鼠荷瘤模型,連續(xù)給藥20天觀察BENC-511對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制情況。結(jié)果顯示,BENC-511可抑制B16B L6及A549細(xì)胞實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移,且抑制A549細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)。為研究BENC-511抑制肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制,采用瓊脂糖凝膠酶譜檢測(cè)化合物BENC-511對(duì)A549細(xì)胞培養(yǎng)液中的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2. MMP-9)活性的影響；并用Western Blotting檢測(cè)兩種酶及相關(guān)信號(hào)通路蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示,BENC-511可抑制MMP-9的酶活性及蛋白表達(dá),降低PI3K, Akt、 mTOR及其磷酸化形式蛋白表達(dá),降低磷酸化EGFR蛋白表達(dá),升高GSK3P表達(dá)從而降低細(xì)胞核內(nèi)、外β-catenin表達(dá)量以及其靶基因ZEB1的轉(zhuǎn)錄。為進(jìn)一步探討化合物BENC-511抑制肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制是否與ZEB1相關(guān),使用劃痕試驗(yàn)檢測(cè)到H460、A549、H1299三種NSCLC細(xì)胞具有不同的侵襲特性,呈遞增趨勢(shì)。BENC-511對(duì)H1299細(xì)胞中ZEB1蛋白表達(dá)抑制率最高,且作用72h后的IC50值最低。隨后,使用shRNA干擾細(xì)胞中ZEB1表達(dá),發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中的MMP-9、VEGF、β-catenin表達(dá)降低,E-cadherin、PTEN、P53表達(dá)增高,且BENC-511對(duì)細(xì)胞增殖及侵襲的抑制率提高。結(jié)論化合物BENC-511能抑制鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞及肺癌A549細(xì)胞體內(nèi)、外侵襲轉(zhuǎn)移；其作用主要是通過(guò)直接抑制EGFR磷酸化,以及抑制PI3K/mTOR/β-catenin信號(hào)通路從而下調(diào)MMP-9實(shí)現(xiàn)的。BENC-511對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移能力的抑制與ZEB1、β-catenin表達(dá)高低相關(guān)；shRNA降低ZEB1表達(dá)后可提高BENC-511對(duì)A549細(xì)胞活力和侵襲能力的抑制效果。
[Abstract]:Non - small cell lung cancer ( NSCLC ) , especially non - small cell lung cancer ( NSCLC ) , has the characteristics of high morbidity , high metastatic ability , easy recurrence and drug resistance , and has become the most fatal cancer in the world .
The inhibitory effect of BENC - 511 ( 10 , 5 , 2.5 , 1.25 渭mol / L ) and S14161 ( 10 渭mol / L ) on the invasion of A549 cells was investigated by Transwell chamber assay .
In vivo experiment : B16BL6 melanoma cells were injected intravenously with C57BL / 6 J mice , and B16BL6 melanoma cells were injected intravenously to construct the experimental lung metastasis model of cancer cells . Two weeks after administration of BENC - 511 ( 20 and 40mg / kg ) , mice were given double lung and counted the nodules of black metastatic tumor ;
The experimental lung metastasis model was constructed in nude mice by A549 - luc - GFP cells . The tumor volume changes and metastasis were observed in vivo on the 10th day and the 14th day . The results showed that BENC - 511 inhibited the experimental lung metastasis of B16B L6 and A549 cells and inhibited the growth of tumor growth in A549 cells . The results showed that BENC - 511 inhibited the growth of B16B L6 and A549 cells . MMP - 9 activity ;
The results showed that BENC - 511 inhibited the expression of MMP - 9 , reduced its expression , decreased the expression of phosphorylated EGFR protein , increased the expression of phosphorylated EGFR protein , increased the expression of extracellular 尾 - catenin and the transcription of its target gene . The results showed that the expression of MMP - 9 , VEGF , 尾 - catenin in the cells decreased , E - cadherin , PTEN and P53 increased , and BENC - 511 inhibited the proliferation and invasion of human lung cancer cells .
The effect of BENC - 511 on the proliferation and invasion and metastasis of non - small cell lung cancer cells is related to the expression of zeB1 and 尾 - catenin .
The inhibitory effect of BENC - 511 on the viability and invasion ability of A549 cells can be improved after the shRNA has been reduced by the shRNA .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 許運(yùn)龍,郭昭揚(yáng),張?jiān)婆d,許賢榮;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在人非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床研究[J];中華腫瘤雜志;2000年05期

2 王繼營(yíng),高珊,崔黎,黃麗春,宋立友;“雙異”聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌37例[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年02期

3 田靜,李蓓蘭;老年晚期非小細(xì)胞肺癌的化療:一種新趨勢(shì)[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年05期

4 張世雯,周清華;不同的分割方案與化療聯(lián)合治療非小細(xì)胞肺癌[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年05期

5 胡發(fā)明,華波;血清白介素-10水平是晚期非小細(xì)胞肺癌病人的一項(xiàng)預(yù)后因素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2000年11期

6 于亮,王梅,張燦灼;微血管在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

7 朱建英;預(yù)計(jì)2009年非小細(xì)胞肺癌藥物市場(chǎng)將達(dá)20億美元[J];國(guó)外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊(cè));2001年02期

8 張利偉,劉樹(shù)秋,陳海英,萬(wàn)錦華;立體定向適形放療配合常規(guī)放療治療非小細(xì)胞肺癌近期療效分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2001年05期

9 王肇炎;晚期非小細(xì)胞肺癌的解救化療[J];腫瘤研究與臨床;2001年01期

10 朱堯武,楊宇飛;非小細(xì)胞肺癌的術(shù)后輔助治療[J];中國(guó)臨床醫(yī)生;2001年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張新民;唐蜜;李代強(qiáng);;磷酸化酪氨酸蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 胡旭東;楊國(guó)仁;霍宗偉;方永存;陳鳴陸;;~(99m)Tc-MIBI SPECT顯像觀察非小細(xì)胞肺癌多藥耐藥的研究[A];首屆全國(guó)腫瘤核醫(yī)學(xué)新技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

3 秦慶亮;熊海健;王愛(ài);邊海蓉;盧振國(guó);楊培英;朱斌耀;王蕓;;立體定向放射治療放療后復(fù)發(fā)非小細(xì)胞肺癌[A];2007第六屆全國(guó)放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

4 馮耘;萬(wàn)歡英;高蓓莉;項(xiàng)軼;劉嘉琳;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶二在非小細(xì)胞肺癌腫瘤生長(zhǎng)和血管生成中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

5 ;非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助治療及一線治療[A];天津市抗癌協(xié)會(huì)肺癌專業(yè)委員會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

6 蔣峰;許林;史美祺;;1560例非小細(xì)胞肺癌患者多因素預(yù)后分析[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

7 張華;;術(shù)前中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞比值對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

8 王子平;;老年晚期非小細(xì)胞肺癌治療思考[A];第三屆中國(guó)腫瘤內(nèi)科大會(huì)教育集暨論文集[C];2009年

9 張沂平;;非小細(xì)胞肺癌個(gè)體化化療[A];2009年浙江省腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

10 劉嘉湘;施志明;李和根;徐振曄;朱晏偉;趙麗紅;高虹;劉苓霜;朱惠蓉;張暉;;益肺抗瘤飲治療271例非小細(xì)胞肺癌臨床觀察[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（下）[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 李穎;特羅凱對(duì)中國(guó)非小細(xì)胞肺癌患者效果佳[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 曉白;非小細(xì)胞肺癌研究獲重大進(jìn)展[N];人民日?qǐng)?bào);2008年

3 記者 張文天;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)藥綜合醫(yī)療方案研究進(jìn)展順利[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 辛勇　張先穩(wěn);早期非小細(xì)胞肺癌的治療進(jìn)展[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

5 記者高新軍;專家提出 建非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)臨床指南[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2009年

6 上海長(zhǎng)海醫(yī)院呼吸科 夏陽(yáng) 整理 邱志濤;非小細(xì)胞肺癌放虎歸山還是乘勝追擊[N];健康報(bào);2013年

7 記者 王丹;新研究揭示炎癥促非小細(xì)胞肺癌發(fā)生機(jī)制[N];健康報(bào);2014年

8 記者 李穎;凱美納成晚期非小細(xì)胞肺癌治療優(yōu)選方案[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

9 白京麗;非小細(xì)胞肺癌最佳治療方案[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

10 ;表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑在治療非小細(xì)胞肺癌中的作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 白艷（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR檢測(cè)用于非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 王筱恬;PLZF和DACH1的異常表達(dá)影響非小細(xì)胞肺癌發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 洪專;木犀草素治療EGF受體繼發(fā)性突變的非小細(xì)胞肺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京大學(xué);2014年

4 張沛;ILT4在非小細(xì)胞肺癌中的作用及分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 王世坤;RBP2誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌和食管鱗癌表皮間質(zhì)化[D];山東大學(xué);2015年

6 趙世俊;~(18)F-FDG PET/CT在非小細(xì)胞肺癌預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 邱晨;影響非小細(xì)胞肺癌手術(shù)后遠(yuǎn)期生存的相關(guān)因素分析[D];山東大學(xué);2015年

8 姜遠(yuǎn)矚;術(shù)前血液學(xué)指標(biāo)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

9 朱良明;STAT3及其靶基因?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌生物學(xué)行為調(diào)控機(jī)制的初步實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

10 周菊;HPV-16感染對(duì)非小細(xì)胞肺癌和A549細(xì)胞的影響及miRNAs表達(dá)改變的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王勇;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床意義[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

2 王靜;Eg5、Ki-67在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 覃建穎;IL-21和Tc1細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌患者外周血及癌灶中的變化及相互作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

4 張瑞;ⅢA-N2期非小細(xì)胞肺癌手術(shù)治療和放射治療的療效對(duì)比及相關(guān)預(yù)后因素的分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 石姣姣;基于多肽構(gòu)建抗腫瘤靶向藥物的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

6 胡世霖;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)辨證分型與Napsin A、TTF-1在肺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 王婷婷;細(xì)胞因子活化殺傷細(xì)胞治療非小細(xì)胞肺癌臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李曉霞;非小細(xì)胞肺癌ERCC1、RRM1和TUBB3表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 史曉熠;PTP4A1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 張旭;LncRNA h19在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1833576