本文選題：宮頸鱗癌 + 肽基脯氨酰同分異構酶(Pin1)��； 參考：《新疆醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:本研究以維吾爾族婦女宮頸癌為對象,從腫瘤組織和細胞水平上,明確宮頸癌發(fā)生、擴散及轉移與肽基脯氨酰同分異構酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,Pinl)可能誘導上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及調節(jié)上皮和間質組織屬性基因表達水平的關系,探討基于EMT的宮頸癌發(fā)病機制、早期預警和臨床治療檢控指標。方法:(1)收集宮頸標本組織標本共189例,其中宮頸鱗癌(CSCC)16例、宮頸上皮內瘤變(CINⅡ-Ⅲ)32例和正常對照41例,采用免疫組織化學方法檢測 Pin1、E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Snail1及Vimentin)蛋白質表達水平,分析腫瘤臨床參數(shù)與上述指標變化的關系。(2)實時熒光定量PCR技術檢測宮頸癌HeLa,SiHa,C33a細胞中Pin1 mRNA本底表達;針對Pin1的cDNA序列,構建短發(fā)夾RNA干擾載體(shRNA),轉染SiHa細胞,建立RNAi表達細胞模型,運用實時熒光定量PCR和Western blot技術驗證轉染后Pin1 mRNA和蛋白水平的變化;同時檢測轉染Pin1-siRNA后,SiHa宮頸癌細胞內EMT 相關蛋白 E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Snail1 和 Vimentin mRNA 和蛋白水平情況;(3)應用MTT(四甲基偶氮唑鹽)法、細胞劃痕實驗及流式細胞儀技術,分別分析Pin1特異性sh-RNA轉染后,宮頸癌細胞增殖活性,遷移率和細胞凋亡率的細胞生物學指標。結果:(1)免疫組織化學分析結果顯示,隨著宮頸癌及癌前病變發(fā)生,Pin1蛋白質表達水平顯著上升(P0.05),N-cadherin和Snail1等間質組織屬性蛋白質表達水平顯著上調(P0.05),而E-cadherin和β-catenin等上皮組織屬性蛋白質表達水平顯著下調(P0.05),而且宮頸癌的較高臨床分期、中低組織分化和淋巴結轉移也伴有上述5種蛋白質表達水平的顯著變化(P0.05),可能呈現(xiàn)一種Pin1誘導的宮頸癌上皮-間質轉化(EMT)、惡性轉化和轉移趨勢。(2)HeLa、SiHa和C33a宮頸癌細胞均有Pin1 mRNA表達,其中SiHa宮頸癌細胞內表達水平較高;Pin1特異性sh-RNA轉染后,Pin1轉錄和蛋白表達水平顯著下調,伴有E-cadherin和β-catenin等上皮組織屬性基因表達水平顯著上調,而N-cadherin、Snail1和Vimentin等間質組織屬性基因表達水平顯著上調(P0.05),呈現(xiàn)Pin1誘導的EMT相關基因表達調控趨勢;根據(jù)細胞生物學指標分析,Pin1特異性sh-RNA轉染后,SiHa宮頸癌細胞增殖活性顯著下降(P0.05),細胞遷移能力降低,細胞凋亡率增加,呈現(xiàn)典型的EMT相關細胞表型。結論:(1)臨床基礎研究顯示,宮頸癌發(fā)生、惡性轉化、中低分化和轉移可能伴有Pin1和間質組織屬性基因表達水平上調,上皮組織屬性基因表達下調,存在典型的EMT發(fā)展過程;(2)根據(jù)RNAi細胞模型研究,抑制宮頸癌細胞內Pin1表達,引起上皮組織屬性基因下調,間質組織屬性基因表達上調,在一定程度上逆轉EMT相關基因表達調控和細胞表型變化,推測Pin1可能調節(jié)上皮和間質組織屬性基因表達調控,從而誘導宮頸上皮組織的EMT過程。
[Abstract]:Objective: to identify the occurrence of cervical cancer in Uygur women from tumor tissue and cell level. The relationship between proliferation and metastasis and peptidyl-prolyl cis-trans isomerasePinl) may induce epithelial-mesenchymal transition (EMT) and regulate the expression of epithelial and interstitial tissue attribute genes, and explore the pathogenesis of cervical cancer based on EMT. Early warning and clinical treatment prosecution indicators. Methods A total of 189 cervical tissue specimens were collected, including 16 cases of cervical squamous cell carcinoma, 32 cases of cin 鈪，

本文編號：1822924