本文選題：肝癌 + 果糖-1��； 參考：《蘇州大學》2016年博士論文

【摘要】：目的:檢測果糖-1,6-二磷酸酶(FBP1)在肝癌中的表達,分析其與患者預后的關系。探討組蛋白去乙�；�(HDAC)對FBP1缺失的調控機制,及FBP1對肝臟腫瘤細胞生物學行為的影響。方法:通過免疫組織化學染色法檢測90例肝癌患者腫瘤組織及相應的癌旁組織中FBP1的表達。采用配對秩和檢驗比較肝癌組織與癌旁組織中FBP1的表達水平,Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗分析FBP1表達水平與患者生存期的關系。為進一步探討肝癌中FBP1的調控機制采用HDAC抑制劑NaBu、SAHA、LBH按濃度梯度處理HepG2及SK-Hep1細胞,western blot及real-time PCR檢測FBP1蛋白及mRNA水平的變化。利用siRNA轉染實驗敲除肝癌細胞株中HDAC1及HDAC2,并檢測其對FBP1表達的影響。染色質免疫共沉淀實驗檢測HDAC與FBP1的結合位點。90例臨床組織標本同時經免疫組化檢測FBP1、HDAC1及HDAC2,并分析其相關性。HepG2及SK-Hep1細胞經病毒感染,分別構建穩(wěn)轉pcDNA3.1,pLenti6.3/FBP1,NS shRNA,FBP1 shRNA的穩(wěn)轉細胞株。葡萄糖檢測試劑盒檢測轉染后細胞對葡萄糖消耗的變化。MTS檢測肝癌細胞株過表達FBP1對細胞增殖的影響。免疫缺陷小鼠荷瘤實驗檢測FBP1過表達對腫瘤增殖的影響。結果:FBP1在肝癌組織中的表達明顯低于相應的癌旁組織,差異有統(tǒng)計學意義(Z=7.952,P0.001)。小肝癌中FBP1的表達水平高于非小肝癌(P=0.005)。AJCC分期越高,FBP1表達越低(P=0.001)。FBP1高表達組患者平均生存期為50.17個月,低表達組患者平均生存期為34.88個月,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.034)。肝癌細胞株經HDAC抑制劑NaBu、SAHA、LBH處理后,FBP1蛋白及mRNA水平明顯升高,并且具有藥物濃度依賴性。單獨干擾肝癌細胞株中HDAC1及HDAC2后可上調FBP1的蛋白及mRNA水平,共同敲除HDAC1及HDAC2后FBP1上調更顯著。HDAC通過與FBP1增強子區(qū)AcH3K27位點結合,影響FBP1的轉錄。90例臨床標本免疫組化檢測結果也提示FBP1與HDAC1及HDAC2的表達均呈負相關(r=-0.64,P0.05;r=-0.61,P0.05)�；謴透伟┘毎蠪BP1的表達,可減低腫瘤細胞對葡萄糖的消耗,抑制腫瘤細胞增殖,抑制腫瘤細胞在免疫缺陷小鼠皮下成瘤。結論:FBP1在肝癌中功能缺失,是判斷患者預后的因素。HDAC1及HDAC2協同抑制FBP1增強子區(qū)H3K27位點的乙酰化,調控FBP1的表達。FBP1干擾肝臟腫瘤細胞糖酵解過程,降低葡萄糖消耗,減低腫瘤細胞供能,抑制腫瘤細胞增殖。
[Abstract]:Aim: to detect the expression of fructose 6 diphosphatase (FBP1) in hepatocellular carcinoma (HCC) and to analyze the relationship between FBP1 and prognosis. To investigate the regulatory mechanism of histone deacetylase (HDAC) on FBP1 deletion and the effect of FBP1 on the biological behavior of liver tumor cells. Methods: immunohistochemical staining was used to detect the expression of FBP1 in tumor tissues and adjacent tissues of 90 patients with liver cancer. The expression level of FBP1 in HCC and para-cancerous tissues was compared by paired rank sum test. Kaplan-Meier method and Log-rank test were used to analyze the relationship between FBP1 expression and survival. In order to further investigate the regulatory mechanism of FBP1 in hepatocellular carcinoma, the changes of FBP1 protein and mRNA levels in HepG2 and SK-Hep1 cells were detected by HDAC inhibitor NaBU SAHAA LBH and SK-Hep1 cells treated with western blot and real-time PCR according to the concentration gradient. SiRNA transfection assay was used to knockout the expression of HDAC1 and HDAC2 in hepatoma cells and the effect of HDAC2 on the expression of FBP1 was detected. The binding sites of HDAC and FBP1 were detected by chromatin coprecipitation assay. FBP1HDAC1 and HDAC2 were detected by immunohistochemistry, and the correlation between HDAC1 and HDAC2 was analyzed. HepG2 and SK-Hep1 cells were infected with virus to construct the stable transformed cell line of pcDNA3.1pLenti6.3 / FBP1NSshRNAFBP1 shRNA. Glucose detection kit was used to detect the change of glucose consumption after transfection. MTS was used to detect the effect of overexpression of FBP1 on cell proliferation. The effect of overexpression of FBP1 on tumor proliferation in immunodeficient mice was detected by tumor-bearing assay. Results the expression of FBP1 in HCC was significantly lower than that in adjacent tissues, and the difference was statistically significant (P 0.001). The expression of FBP1 in small hepatocellular carcinoma was significantly higher than that in P0. 005. AJCC stage. The lower the expression of FBP1 was, the lower the expression of FBP1 was. The average survival time was 50. 17 months in the high expression group and 34. 88 months in the low expression group. The difference was statistically significant (P 0. 034 4). The levels of FBP1 protein and mRNA in hepatoma cells treated with HDAC inhibitor NaBu-SAHAL LBH were significantly increased in a concentration-dependent manner. Interfering with HDAC1 and HDAC2 alone could up-regulate the level of FBP1 protein and mRNA in hepatoma cell lines, and after knockout HDAC1 and HDAC2, FBP1 upregulated more significantly. HDAC could bind to AcH3K27 site of FBP1 enhancer region. The expression of FBP1 and HDAC1 and HDAC2 were negatively correlated with the expression of HDAC1 and HDAC2 in 90 clinical specimens. The results showed that the expression of FBP1 was negatively correlated with the expression of HDAC1 and HDAC2. Restoring the expression of FBP1 in hepatoma cells can reduce the glucose consumption of tumor cells, inhibit the proliferation of tumor cells, and inhibit tumor cells subcutaneous tumorigenesis in immunodeficient mice. Conclusion the loss of function of FBP1 in hepatocellular carcinoma is a prognostic factor. HDAC1 and HDAC2 synergistically inhibit the acetylation of H3K27 site in FBP1 enhancer region, and regulate the expression of FBP1. FBP1 interferes with the glycolysis process of liver tumor cells and reduces glucose consumption. Reduce the energy supply of tumor cells and inhibit the proliferation of tumor cells.
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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本文編號：1812202