本文選題：乳腺癌 + genistein��； 參考：《鄭州大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：乳腺癌是最常見(jiàn)的威脅女性的癌癥之一,并且它的全球發(fā)生率還在不斷增加。重要的是,乳腺癌是女性癌性相關(guān)死亡中第二大死亡原因,在美國(guó)約占所有女性癌癥相關(guān)死亡的15%。有效治療和預(yù)防這種病態(tài)的疾病仍然是個(gè)重大的挑戰(zhàn)。運(yùn)用天然化合物對(duì)乳腺癌的預(yù)防和治療仍然是乳腺癌研究的主要工作之一。CIP2A是蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A),是在2007年最新發(fā)現(xiàn)的致癌基因。CIP2A能夠抑制PP2A,通過(guò)活化AKT并抑制PP2A誘導(dǎo)的對(duì)癌性蛋白c-Myc的去磷酸化作用,從而穩(wěn)定c-Myc蛋白的水平,并參與促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)化和細(xì)胞周期的調(diào)控過(guò)程,抑制放化療所誘導(dǎo)的癌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。CIP2A在人的多種良性組織樣本中是呈現(xiàn)低表達(dá)的,而在乳腺癌、前列腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤組織中卻呈現(xiàn)高表達(dá)。研究表明CIP2A與臨床病理參數(shù)和預(yù)后有一定關(guān)系。那么CIP2A能否成為乳腺癌的潛在治療靶點(diǎn)以及其與抗乳腺癌藥物之間的相互調(diào)節(jié)與作用機(jī)制等方面還有待進(jìn)一步研究。Genistein(染料木素)是大豆異黃酮的主要成分之一,是一種天然的化合物,其活性強(qiáng),具有植物雌激素和酪氨酸激酶抑制劑的特性。已有研究證明,高攝入量的大豆與降低乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)率相關(guān)聯(lián)。盡管genistein介導(dǎo)的抗腫瘤研究取得了一些進(jìn)展,但其作用機(jī)理仍不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)中,我們研究了genistein在用于抗乳腺癌治療時(shí)對(duì)CIP2A的調(diào)節(jié)作用。首先,通過(guò)MTT和western blot的結(jié)果提示CIP2A對(duì)genistein誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制和凋亡有功能性的影響,進(jìn)一步證實(shí)了genistein可以誘導(dǎo)CIP2A在乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D中表達(dá)下調(diào),并與genistein誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑和凋亡活動(dòng)有關(guān)。我們研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌細(xì)胞中CIP2A過(guò)表達(dá)可以減弱genistein誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡活動(dòng);反之,當(dāng)CIP2A的表達(dá)沉默后,則增加其對(duì)genistein誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡的敏感性。我們進(jìn)一步驗(yàn)證了genistein誘導(dǎo)的CIP2A下調(diào)機(jī)制既包含了轉(zhuǎn)錄水平抑制又包含了蛋白酶體降解過(guò)程。特別的是,高濃度的genistein可以一并誘導(dǎo)E2F1和CIP2A的下調(diào)。且高表達(dá)的E2F1減弱了genistein誘導(dǎo)的CIP2A在m RNA水平的下調(diào),這表明E2F1從轉(zhuǎn)錄水平上抑制了genistein誘導(dǎo)的CIP2A下調(diào)。綜上所述,在這部分實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了CIP2A可以作為genistein的功能作用靶點(diǎn),且E2F1介導(dǎo)的CIP2A轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)導(dǎo)致了CIP2A在蛋白水平的下調(diào)。我們的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提高了對(duì)genistein誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制和凋亡活動(dòng)的理解,提示CIP2A在乳腺癌抗癌相關(guān)試劑研究方面可以作為一個(gè)藥物作用靶點(diǎn)。ErbB2為表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)家族成員之一,約1/3左右的乳腺癌患者被檢測(cè)到體內(nèi)癌細(xì)胞中ErbB2基因的過(guò)量表達(dá)。Lapatinib(拉帕替尼)是ErbB2和EGFR的小分子抑制劑,已被用于ErbB2過(guò)度表達(dá)的乳腺癌治療,然而lapatinib的耐藥性已成為臨床應(yīng)用難題。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)沉默乳腺癌耐藥細(xì)胞(lapatinib resistent,LR)BT474/LR中的CIP2A之后,對(duì)lapatinib所誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制和凋亡的敏感性增加。表明CIP2A是lapatinib的一個(gè)關(guān)鍵性抑制因子,有助于臨床上對(duì)lapatinib所誘導(dǎo)的抗腫瘤活性和耐藥性的研究,以進(jìn)一步證明CIP2A調(diào)節(jié)可以作為抗乳腺癌試劑方面研究的一個(gè)有效藥物作用靶點(diǎn)。第一部分Genistein作用乳腺癌細(xì)胞后CIP2A表達(dá)變化目的檢測(cè)genistein作用于乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MCF-7-C3和T47D后CIP2A的蛋白水平表達(dá),以及genistein對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制和凋亡活動(dòng)的影響。方法1.選用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的Caspase3穩(wěn)定表達(dá)的MCF-7/Caspase3(MCF-7-C3)細(xì)胞株,Western blot檢測(cè)經(jīng)不同濃度genistein處理后乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MCF-7-C3和T47D中的CIP2A、PARP/cleaved PARP、caspase-3、cleaved caspase-3的表達(dá)水平變化。2.采用MTT比色分析法檢測(cè)不同濃度genistein(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM,60μM)對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D增殖的影響。3.用流式細(xì)胞儀分析genistein處理乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D前后對(duì)細(xì)胞周期分布的影響。結(jié)果1.Genistein對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MCF-7-C3和T47D中的CIP2A蛋白表達(dá)有下調(diào)的作用,且隨著genistein濃度的升高,對(duì)CIP2A蛋白的下調(diào)作用增強(qiáng);通過(guò)western blot檢測(cè)凋亡蛋白表達(dá)水平顯示,genistein可以引起明顯的凋亡活動(dòng),減少總caspase-3蛋白水平的表達(dá),增加caspase-3和PARP的切割帶產(chǎn)生。提示genistein誘導(dǎo)的CIP2A下調(diào)與總caspase-3水平的下降、caspase-3和PARP的切割帶升高有關(guān),即genistein介導(dǎo)的CIP2A蛋白水平的下調(diào)與其誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞凋亡活動(dòng)有關(guān)。2.MTT結(jié)果顯示,genisten(?10μM)對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D有生長(zhǎng)抑制作用,且呈濃度依賴性。3.流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布顯示,與各對(duì)應(yīng)細(xì)胞株的對(duì)照組相比,genistein可以使乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D在G0/G1期發(fā)生阻滯。結(jié)論Genistein可以下調(diào)癌基因CIP2A的蛋白表達(dá),其介導(dǎo)的CIP2A下調(diào)活動(dòng)可能與genistein誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡活動(dòng)發(fā)生有關(guān)。第二部分CIP2A過(guò)表達(dá)減弱乳腺癌細(xì)胞對(duì)genistein的敏感性目的為了研究CIP2A過(guò)表達(dá)是否減弱乳腺癌細(xì)胞對(duì)genistein的藥物敏感性,即CIP2A過(guò)表達(dá)減弱genistein誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制活動(dòng)和凋亡的發(fā)生。方法1.用CIP2A過(guò)表達(dá)編碼的慢病毒分別感染乳腺癌細(xì)胞株MCF-7-C3和T47D,對(duì)照組感染空載質(zhì)粒。經(jīng)篩選后獲得穩(wěn)定混合克隆細(xì)胞株,經(jīng)Western blot檢測(cè),對(duì)各個(gè)穩(wěn)定克隆細(xì)胞株CIP2A蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行鑒定。2.MTT檢測(cè)genistein對(duì)穩(wěn)定克隆細(xì)胞株MCF-7-C3/CIP2A、T47D/CIP2A和各對(duì)照組細(xì)胞增殖的影響。3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)genistein對(duì)穩(wěn)定克隆細(xì)胞株MCF-7-C3/CIP2A、T47D/CIP2A和各對(duì)照組細(xì)胞的細(xì)胞周期分布的影響。4.ELISA檢測(cè)genistein對(duì)穩(wěn)定克隆細(xì)胞株MCF-7-C3/CIP2A、T47D/CIP2A和各對(duì)照組細(xì)胞的凋亡影響。5.Western blot檢測(cè)genistein對(duì)穩(wěn)定克隆細(xì)胞株MCF-7-C3/CIP2A、T47D/CIP2A和各對(duì)照組細(xì)胞CIP2A蛋白水平表達(dá)和凋亡蛋白PARP的影響。結(jié)果1.經(jīng)過(guò)篩選和Western blot鑒定,獲得穩(wěn)定CIP2A過(guò)表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株MCF-7-C3和T47D,分別命名為MCF-7-C3/CIP2A和T47D/CIP2A細(xì)胞。2.MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,穩(wěn)定克隆細(xì)胞株MCF-7-C3/CIP2A和T47D/CIP2A經(jīng)過(guò)genistein不同濃度(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM,60μM)處理5天后,與各自的對(duì)照組細(xì)胞相比,genistein對(duì)CIP2A過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3/CIP2A和T47D/CIP2A的生長(zhǎng)抑制作用明顯減弱。3.流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布結(jié)果顯示,在CIP2A過(guò)表達(dá)細(xì)胞株MCF-7-C3/CIP2A和T47D/CIP2A中,與對(duì)照組細(xì)胞相比,CIP2A過(guò)表達(dá)減緩了genistein誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞在G0/G1期的阻滯情況。4.ELISA凋亡分析數(shù)據(jù)顯示,與各自對(duì)照組相比,CIP2A過(guò)表達(dá)減緩了genistein誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。5.Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞的CIP2A蛋白和凋亡蛋白水平表達(dá)變化結(jié)果顯示,與相應(yīng)的對(duì)照組相比,genistein對(duì)CIP2A過(guò)表達(dá)細(xì)胞株MCF-7-C3/CIP2A和T47D/CIP2A中的CIP2A蛋白水平的下調(diào)作用減弱,即genistein對(duì)CIP2A過(guò)表達(dá)的細(xì)胞株MCF-7-C3/CIP2A和T47D/CIP2A的敏感性降低;相應(yīng)地,genistein對(duì)它們的凋亡蛋白PARP切割帶的產(chǎn)生也隨之減少,提示genistein誘導(dǎo)CIP2A過(guò)表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株的凋亡活動(dòng)減弱。結(jié)論CIP2A過(guò)表達(dá)減弱genistein介導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡活動(dòng)的發(fā)生。第三部分CIP2A沉默促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞對(duì)genistein的敏感性目的為了研究CIP2A沉默是否增加genistein的藥物敏感性,即CIP2A沉默增強(qiáng)genistein誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡的發(fā)生。方法1.實(shí)驗(yàn)中采用CIP2Ash RNA編碼的慢病毒感染MCF-7-C3和T47D細(xì)胞,對(duì)照組感染空載質(zhì)粒。Western blot檢測(cè)篩選后的穩(wěn)定克隆細(xì)胞株在CIP2A蛋白水平的表達(dá)。2.MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,穩(wěn)定克隆細(xì)胞株MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A經(jīng)過(guò)genistein不同濃度處理5天后,與各自對(duì)應(yīng)的對(duì)照組相比,genistein對(duì)MCF-7-C3/si CIP2A、T47D/si CIP2A乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用增加。3.流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布情況顯示,在MCF-7-C3/si CIP2A、T47D/si CIP2A細(xì)胞株中,與對(duì)照組相比genistein增加了CIP2A沉默的乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A在G0/G1期的阻滯情況。4.ELISA分析細(xì)胞凋亡數(shù)據(jù)顯示,與各自相應(yīng)的對(duì)照組相比,genistein增加了CIP2A沉默的乳腺癌細(xì)胞株MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A細(xì)胞凋亡的發(fā)生。5.Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞的CIP2A蛋白和凋亡蛋白水平表達(dá)變化結(jié)果顯示,與相應(yīng)的對(duì)照組相比,genistein對(duì)CIP2A沉默細(xì)胞株MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A中的CIP2A蛋白水平的下調(diào)作用增加,即genistein對(duì)CIP2A沉默細(xì)胞株MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A的敏感性增強(qiáng);genistein促進(jìn)了CIP2A沉默細(xì)胞株MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A中的PARP的切割帶的產(chǎn)生,提示genistein介導(dǎo)的CIP2A沉默的乳腺癌細(xì)胞的凋亡活動(dòng)加強(qiáng)。結(jié)果1.經(jīng)過(guò)puromycin篩選和Western blot鑒定,獲得穩(wěn)定CIP2A沉默細(xì)胞株MCF-7-C3和T47D,分別命名為MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A。2.MTT比色分析結(jié)果顯示,穩(wěn)定克隆細(xì)胞MCF-7-C3/si CIP2A、T47D/si CIP2A經(jīng)genistein處理5天后,與對(duì)應(yīng)的對(duì)照組相比,genistein促進(jìn)了CIP2A沉默細(xì)胞株MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A的生長(zhǎng)抑制。3.流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布情況顯示,在CIP2A沉默細(xì)胞株MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A中,genistein增加了乳腺癌細(xì)胞G0/G1期的阻滯。4.ELISA分析細(xì)胞凋亡數(shù)據(jù)顯示,與相應(yīng)的對(duì)照組相比,genistein促進(jìn)了CIP2A沉默細(xì)胞株MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A的凋亡發(fā)生。5.Western blot結(jié)果顯示,與相應(yīng)的對(duì)照組相比,genistein促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3/si CIP2A和T47D/si CIP2A中CIP2A蛋白水平的下調(diào),且PARP的切割帶也隨之增加。即genistein對(duì)CIP2A沉默的乳腺癌細(xì)胞株敏感性增加。結(jié)論CIP2A沉默的乳腺癌細(xì)胞增加了genistein介導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡活動(dòng)的發(fā)生。第四部分Genistein誘導(dǎo)CIP2A下調(diào)的分子機(jī)制目的從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白酶體通路水平探討genistein下調(diào)CIP2A的作用機(jī)制。方法1.Genistein處理乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D后,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析genistein對(duì)乳腺癌細(xì)胞的CIP2A m RNA水平的調(diào)節(jié)。2.Genistein處理乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D細(xì)胞后,合并或不合并蛋白酶體抑制劑MG132繼續(xù)培養(yǎng)24h,然后采用Western blot分析對(duì)CIP2A蛋白表達(dá)水平的影響。3.由于CIP2A蛋白的穩(wěn)定性受到Akt活性的調(diào)節(jié),我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中用genistein處理乳腺癌細(xì)胞后,采用Western blot檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D在p-Akt的蛋白水平變化;E2F1是調(diào)控CIP2A轉(zhuǎn)錄水平變化的一個(gè)重要轉(zhuǎn)錄因子,在實(shí)驗(yàn)中我們用genistein處理乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D后,用Western blot檢測(cè)了E2F1的蛋白表達(dá)水平變化,旨在研究E2F1在genistein介導(dǎo)的CIP2A轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中的作用。4.擴(kuò)增、收取重組E2F1腺病毒,用重組腺病毒E2F1感染MCF-7-C3和T47D細(xì)胞后,再用genistein處理各組乳腺癌細(xì)胞,經(jīng)Western blot檢測(cè)感染腺病毒E2F1后,genistein對(duì)乳腺癌細(xì)胞中E2F1、CIP2A和c-Myc的蛋白水平調(diào)節(jié)。5.采用腺病毒E2F1感染MCF-7-C3和T47D細(xì)胞,我們將不同的E2F1表達(dá)水平的乳腺癌細(xì)胞經(jīng)genistein處理后,檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞CIP2A在m RNA水平表達(dá)變化。結(jié)果1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,在乳腺癌細(xì)胞MCF-7-C3和T47D中用25μM或50μM genistein處理過(guò)后的CIP2A的m RNA水平明顯下降;且在低濃度的genistein處理后的乳腺癌細(xì)胞中CIP2A的m RNA水平有了輕度的升高。這種劑量依賴式模式變化與我們前面研究的genistein對(duì)CIP2A在蛋白水平變化相一致。2.Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)用蛋白酶抑制劑MG132處理后的細(xì)胞可以明顯逆轉(zhuǎn)genistein所誘導(dǎo)的CIP2A在蛋白水平的下調(diào)。3.Western blot顯示在genistein處理后的乳腺癌細(xì)胞中Akt的活性受到抑制;轉(zhuǎn)錄因子E2F1也隨著CIP2A在蛋白水平的下調(diào)而也呈劑量依賴式下調(diào)。4.Western blot分析顯示,乳腺癌細(xì)胞中E2F1過(guò)表達(dá)可以減弱genistein誘導(dǎo)的CIP2A蛋白水平的下調(diào)和c-Myc蛋白下調(diào)的表達(dá)。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析提示,乳腺癌細(xì)胞中E2F1過(guò)表達(dá)可以引起CIP2A在m RNA水平顯著升高,經(jīng)genistein處理之后又隨之下降。提示E2F1在這兩種乳腺癌細(xì)胞系中的過(guò)表達(dá)可以減弱genistein誘導(dǎo)的CIP2A在m RNA水平的下調(diào)。結(jié)論Genistein誘導(dǎo)的CIP2A轉(zhuǎn)錄水平的抑制與CIP2A的蛋白水平下調(diào)有關(guān)且受到蛋白酶體通路的調(diào)節(jié);genistein誘導(dǎo)的CIP2A在蛋白水平發(fā)生的下調(diào)導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞中Akt的活性受到抑制;轉(zhuǎn)錄因子E2F1在genistein誘導(dǎo)的CIP2A m RNA水平下調(diào)中起關(guān)鍵作用,這一變化導(dǎo)致了整個(gè)CIP2A在蛋白水平的下調(diào)。第五部分CIP2A調(diào)節(jié)在lapatinib耐藥細(xì)胞中的作用目的檢測(cè)CIP2A沉默后BT474/LR細(xì)胞對(duì)lapatinib的敏感性變化,探討CIP2A在lapatinib耐藥性(LR)乳腺癌細(xì)胞中的作用,方法1.采用本實(shí)驗(yàn)室已建好的lapatinib耐藥細(xì)胞株BT474/LR,用MTT比色分析驗(yàn)證BT474和BT474/LR乳腺癌細(xì)胞對(duì)lapatinib的不同敏感性。2.分析lapatinib對(duì)乳腺癌細(xì)胞BT474和BT474/LR中CIP2A蛋白表達(dá)水平的影響。3.以CIP2Ash RNA編碼的慢病毒感染BT47/LR細(xì)胞,篩選和建立有效CIP2A沉默的穩(wěn)定克隆細(xì)胞株BT474/LR/si CIP2A。4.以MTT比色分析檢測(cè)BT474/LR中CIP2A沉默對(duì)lapatinib敏感性作用。5.ELISA分析lapatinib對(duì)BT474/LR和BT474/LR/si CIP2A細(xì)胞凋亡的影響。6.Lapatinib處理BT474/LR和BT474/LR/si CIP2A細(xì)胞后,Western blot分析各組細(xì)胞在CIP2A、PARP、caspase-3和cleaved caspase-3(c-caspase-3)蛋白水平的表達(dá)。7.Lapatinib處理BT474/LR和BT474/LR/si CIP2A細(xì)胞后,Westernblot分析lapatinib對(duì)各組細(xì)胞CIP2A、p-Akt和Akt蛋白水平的影響。結(jié)果1.用lapatinib處理乳腺癌細(xì)胞BT474和BT474/LR后,MTT比色分析結(jié)果顯示BT474/LR細(xì)胞對(duì)抗lapatinib誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制。2.Western blot結(jié)果顯示,BT474和BT474/LR細(xì)胞經(jīng)lapatinib處理后,BT474/LR細(xì)胞對(duì)抗lapatinib誘導(dǎo)CIP2A下調(diào)。3.Western blot檢測(cè)CIP2Ash RNA編碼的慢病毒感染BT474/LR后的穩(wěn)定克隆細(xì)胞株在CIP2A蛋白水平上的表達(dá),CIP2A表達(dá)得到有效沉默。4.MTT結(jié)果提示,相對(duì)于BT474/LR中l(wèi)apatinib所誘導(dǎo)的近乎忽略的增長(zhǎng)抑制,CIP2A在BT474/LR細(xì)胞中沉默后,顯著增強(qiáng)這些細(xì)胞對(duì)lapatinib的敏感性。5.ELISA分析lapatinib對(duì)BT474/LR和BT474/LR/si CIP2A細(xì)胞凋亡的結(jié)果提示,lapatinib對(duì)BT474/LR細(xì)胞的凋亡幾乎沒(méi)有影響;而CIP2A在BT474/LR細(xì)胞中沉默后,lapatinib對(duì)其凋亡作用明顯增強(qiáng)。提示CIP2A沉默后,增強(qiáng)了BT474/LR對(duì)lapatinib誘導(dǎo)的凋亡活動(dòng)。6.Lapatinib處理BT474/LR和BT474/LR/si CIP2A細(xì)胞后,Western blot分析結(jié)果顯示,CIP2A在BT474/LR細(xì)胞中沉默后,lapatinib誘導(dǎo)的PARP和caspase-3的cleavage剪切片段都協(xié)同增加。7.CIP2A沉默后BT474/LR對(duì)lapatinib引起的p-Akt的抑制作用增強(qiáng)。提示CIP2A沉默后BT474/LR對(duì)lapatinib誘導(dǎo)的BT474/LR細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制和凋亡可能與其引起的p-Akt的抑制作用相關(guān)。結(jié)論CIP2A沉默增強(qiáng)BT474/LR細(xì)胞株對(duì)lapatinib的敏感性,也增加lapatinib誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制和凋亡活動(dòng),其誘導(dǎo)機(jī)制可能與CIP2A沉默后增加lapatinib對(duì)BT474/LR細(xì)胞中Akt活性的抑制相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李晶;李忠;莫寶慶;;ERK5MAPK在genistein對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖抑制中的作用[J];衛(wèi)生研究;2006年02期

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本文編號(hào)：1795728