本文選題：RBP2 + CagA��； 參考：《山東大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景胃癌是嚴(yán)重影響人們健康的重大疾病,揭示其發(fā)生發(fā)展的規(guī)律,尋找到其發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)分子,進(jìn)行早期防控和靶向性治療,已經(jīng)成為胃癌研究中的重要科學(xué)問題。幽門螺桿菌感染引起的胃粘膜上皮的慢性炎癥跟胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。慢性炎癥經(jīng)久不愈變?yōu)榉强煽匦匝装Y,就為胃癌的發(fā)生奠定了基礎(chǔ),提供了有利于癌癥發(fā)生的微環(huán)境。表觀遺傳學(xué)調(diào)控在癌癥的發(fā)生發(fā)展中的作用越來越受到人們的重視。癌癥的發(fā)生某種程度上可以說是異�；虮磉_(dá)累積的結(jié)果,因此表觀遺傳學(xué)調(diào)控的失調(diào)也會促進(jìn)癌癥的發(fā)生。而這種調(diào)控失調(diào)的累積也會促進(jìn)癌癥的惡性進(jìn)展,即賦予了癌癥局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力。癌癥的惡性進(jìn)展,即侵襲和轉(zhuǎn)移,是癌癥生存率低預(yù)后差和容易復(fù)發(fā)的主要原因。在這個(gè)過程中,上皮間質(zhì)化(EMT)扮演了重要角色。揭示癌癥惡性進(jìn)展的規(guī)律,發(fā)現(xiàn)在其中起關(guān)鍵作用的節(jié)點(diǎn)分子,開發(fā)更有效的靶向治療藥物,成為了癌癥研究的熱點(diǎn)。綜上所述,在感染與炎癥、胃癌的發(fā)生和胃癌的惡性進(jìn)展中找到關(guān)鍵的調(diào)控方式使之聯(lián)系起來是胃癌研究中的關(guān)鍵科學(xué)問題,表觀遺傳學(xué)調(diào)控給了我們很大的啟示,經(jīng)過我們的初步研究證明這種調(diào)控方式可以有效地聯(lián)系胃粘膜慢性炎癥和胃癌發(fā)生以及胃癌進(jìn)展,從而讓我們更清楚地了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展規(guī)律,最終會為腫瘤的早期防控和靶向治療提供有益借鑒。研究目的(一)探討組蛋白去甲基化酶RBP2在幽門螺桿菌誘導(dǎo)的胃粘膜上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用及其分子機(jī)制,為胃癌的早期防控尋找有效靶標(biāo)。(二)進(jìn)一步揭示組蛋白去甲基化酶RBP2在胃癌的惡性進(jìn)展中的作用及其分子機(jī)制,為胃癌的治療提供理論參考。方法和結(jié)果(一)研究證實(shí)組蛋白去甲基化酶RBP2可以通過CagA-AKT-Sp1-RBP2-CyclinD1軸促進(jìn)幽門螺桿菌誘導(dǎo)的胃粘膜上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化1.幽門螺桿菌的毒力因子CagA可以誘導(dǎo)RBP2的表達(dá)：把CagA的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入胃癌細(xì)胞后,RBP2被可以明顯誘導(dǎo)表達(dá)。2. CagA誘導(dǎo)RBP2的表達(dá)是依賴于轉(zhuǎn)錄因子Sp1的：在胃癌細(xì)胞中,敲低Spl的表達(dá)后,CagA對于RBP2的誘導(dǎo)作用也會得到逆轉(zhuǎn)。我們用EMSA和ChIP實(shí)驗(yàn)證明了Spl對RBP2啟動(dòng)子的直接結(jié)合作用。3. PI3K/AKT信號通路介導(dǎo)了Spl依賴性的CagA對RBP2的誘導(dǎo)表達(dá)：用AKT信號的特異性抑制劑LY294002處理胃癌細(xì)胞后,Spl的激活程度會降低,CagA對于RBP2的誘導(dǎo)作用就會得到逆轉(zhuǎn),同時(shí)也會逆轉(zhuǎn)CagA對胃癌細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。4. CagA誘導(dǎo)的RBP2可以靶向作用于Cyclin D1,從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的不可控增殖：我們用PCR和western blot的方法證明了Cyclin D1是RBP2下游的一個(gè)靶分子。隨著RBP2的表達(dá)下降,Cyclin D1的表達(dá)也降低。5.在慢性胃炎向胃癌演變過程中,RBP2和Spl表達(dá)呈正相關(guān)：我們在胃病變組織進(jìn)行了RBP2和Spl的免疫組織化學(xué)染色,發(fā)現(xiàn)了RBP2和Spl的表達(dá)都隨著疾病的進(jìn)展而不斷增高,且RBP2和Spl在病變組織中有共表達(dá)的現(xiàn)象。(二)進(jìn)一步研究證實(shí)組蛋白去甲基化酶RBP2可以通過TGF-β1-p-Smad3-RBP2-E-cadherin-Smad3反饋環(huán)路促進(jìn)胃癌的惡性進(jìn)展1.RBP2在胃癌的惡性進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用,其對于胃癌細(xì)胞EMT發(fā)生是必要的：我們在胃癌細(xì)胞中敲低RBP2的表達(dá)后,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力都顯著降低；同時(shí)胃癌細(xì)胞的干性樣特征也顯著下降。用穩(wěn)定敲低RBP2的胃癌細(xì)胞尾靜脈注射裸鼠后,和對照組相比,胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處臟器的能力明顯下降。相應(yīng)地,我們在胃癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)入RBP2的高表達(dá)質(zhì)粒后,細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力顯著增強(qiáng)。2.RBP2可以被TGF-β誘導(dǎo)表達(dá),且對于TGF-β誘導(dǎo)的EMT發(fā)生是必需的：TGF-β可以以一種時(shí)間依賴性的方式來誘導(dǎo)RBP2的表達(dá)。TGF-β信號活化的磷酸化的Smad3可以結(jié)合到RBP2啟動(dòng)子上促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄表達(dá)。敲低RBP2的表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)TGF-β對細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的促進(jìn)作用,同時(shí)TGF-β對癌癥細(xì)胞干性樣特征的增強(qiáng)作用也被逆轉(zhuǎn)。TGF-β對間質(zhì)標(biāo)志物的上調(diào)作用以及對上皮標(biāo)志物的下調(diào)作用都會因?yàn)镽BP2的敲低而得到部分逆轉(zhuǎn)。3.RBP2通過直接抑制E-cadherin的表達(dá)來參與胃癌惡性進(jìn)展的調(diào)控：敲低RBP2表達(dá)后,E-cadherin的表達(dá)明顯被誘導(dǎo)。ChIP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)RBP2可以直接結(jié)合到E-cadherin的啟動(dòng)子上,抑制其表達(dá)。同時(shí)敲低RBP2和E-cadherin的表達(dá),則RBP2敲低對胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的抑制作用都會得到逆轉(zhuǎn)；同時(shí)RBP2敲低對胃癌細(xì)胞干細(xì)胞樣特征的抑制作用也會得到逆轉(zhuǎn),說明RBP2是通過調(diào)控E-cadherin的表達(dá)來參與胃癌惡性進(jìn)展的。4.RBP2可以和p-Smad3相結(jié)合并被其招募到E-cadherin的啟動(dòng)子上增強(qiáng)對E-cadherin的抑制作用：免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明RBP2和p-Smad3能夠相互結(jié)合,且p-Smad3可能招募了RBP2到E-cadherin的啟動(dòng)子上,抑制其表達(dá)。5. E-cadherin可以通過抑制Smad3的磷酸化反饋調(diào)控RBP2的表達(dá)：E-cadherin在胃癌細(xì)胞中表達(dá)降低后,可以增強(qiáng)Smad3的磷酸化,從而促進(jìn)了其對RBP2表達(dá)的促進(jìn)作用,同時(shí)細(xì)胞的遷移能力也會加強(qiáng)。6.RBP2在進(jìn)展期的胃癌組織中和Snail1共表達(dá),且和E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)：我們選取了130例原發(fā)性進(jìn)展性胃癌組織標(biāo)本,進(jìn)行了RBP2、 Snail1和E-cadherin的免疫組織化學(xué)染色,發(fā)現(xiàn)RBP2和Snail1的共表達(dá)。而且RBP2的表達(dá)和陽性對照Snail1一樣,同E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。研究結(jié)論(一)RBP2可以通過CagA-AKT-Sp1-RBP2-Cyclin D1軸促進(jìn)幽門螺桿菌誘導(dǎo)的胃粘膜上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化,本部分研究揭示了胃炎向胃癌跨越過程中新的調(diào)控機(jī)制,即RBP2介導(dǎo)了感染向癌癥的轉(zhuǎn)化。因此RBP2可以作為胃癌早期防控的靶點(diǎn)分子。(二)RBP2可以通過TGF-β1-p-Smad3-RBP2-E-cadherin-Smad3反饋環(huán)路促進(jìn)胃癌的惡性進(jìn)展,本部分研究揭示了胃癌惡性進(jìn)展中的表觀遺傳學(xué)調(diào)控新機(jī)制,豐富了我們對于癌癥侵襲轉(zhuǎn)移過程中生物學(xué)調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識。因此RBP2可以作為胃癌治療的潛在靶點(diǎn)分子。
[Abstract]:Objective : To study the role of histone demethylase RBP2 in the malignant transformation of gastric cancer and the progression of gastric cancer . The expression of RBP2 is dependent on the transcription factor Sp1 : in gastric cancer cells , the induction of RBP2 is reversed after the expression of low Spl , and the direct binding effect of Spl on RBP2 promoter is demonstrated by EMSA and ChIP experiments . After treatment of gastric cancer cells , the activation degree of Spl was decreased after treatment of gastric cancer cells with the specific inhibitor LY294004 , and the induction effect on RBP2 could be reversed , and the enhancement of the proliferation of gastric cancer cells was also reversed . The expression of RBP2 and Spl was positively correlated with the progression of gastric cancer . The expression of RBP2 and Spl was positively correlated with the progression of gastric cancer .
The expression of TGF - 尾 induced by TGF - 尾 could be reversed . The expression of TGF - 尾 induced by TGF - 尾 could be reversed .
RBP2 can be combined with p - Smad3 and can be recruited into E - cadherin promoter to enhance the inhibitory effect on E - cadherin . The results of the immune codeposition show that RBP2 and p - Smad3 can bind to each other , and the p - Smad3 may recruit RBP2 to E - cadherin promoter to inhibit the expression of E - cadherin . The expression of RBP2 and the expression of E - cadherin in gastric cancer tissues of 130 patients with advanced gastric cancer were studied . The results showed that RBP2 could be used as a target molecule for early gastric cancer .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
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本文編號：1795048