本文選題：RBP2 + CagA�。� 參考：《山東大學》2016年博士論文

【摘要】：研究背景胃癌是嚴重影響人們健康的重大疾病,揭示其發(fā)生發(fā)展的規(guī)律,尋找到其發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵節(jié)點分子,進行早期防控和靶向性治療,已經(jīng)成為胃癌研究中的重要科學問題。幽門螺桿菌感染引起的胃粘膜上皮的慢性炎癥跟胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。慢性炎癥經(jīng)久不愈變?yōu)榉强煽匦匝装Y,就為胃癌的發(fā)生奠定了基礎(chǔ),提供了有利于癌癥發(fā)生的微環(huán)境。表觀遺傳學調(diào)控在癌癥的發(fā)生發(fā)展中的作用越來越受到人們的重視。癌癥的發(fā)生某種程度上可以說是異�；虮磉_累積的結(jié)果,因此表觀遺傳學調(diào)控的失調(diào)也會促進癌癥的發(fā)生。而這種調(diào)控失調(diào)的累積也會促進癌癥的惡性進展,即賦予了癌癥局部侵襲和遠處轉(zhuǎn)移的能力。癌癥的惡性進展,即侵襲和轉(zhuǎn)移,是癌癥生存率低預后差和容易復發(fā)的主要原因。在這個過程中,上皮間質(zhì)化(EMT)扮演了重要角色。揭示癌癥惡性進展的規(guī)律,發(fā)現(xiàn)在其中起關(guān)鍵作用的節(jié)點分子,開發(fā)更有效的靶向治療藥物,成為了癌癥研究的熱點。綜上所述,在感染與炎癥、胃癌的發(fā)生和胃癌的惡性進展中找到關(guān)鍵的調(diào)控方式使之聯(lián)系起來是胃癌研究中的關(guān)鍵科學問題,表觀遺傳學調(diào)控給了我們很大的啟示,經(jīng)過我們的初步研究證明這種調(diào)控方式可以有效地聯(lián)系胃粘膜慢性炎癥和胃癌發(fā)生以及胃癌進展,從而讓我們更清楚地了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展規(guī)律,最終會為腫瘤的早期防控和靶向治療提供有益借鑒。研究目的(一)探討組蛋白去甲基化酶RBP2在幽門螺桿菌誘導的胃粘膜上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用及其分子機制,為胃癌的早期防控尋找有效靶標。(二)進一步揭示組蛋白去甲基化酶RBP2在胃癌的惡性進展中的作用及其分子機制,為胃癌的治療提供理論參考。方法和結(jié)果(一)研究證實組蛋白去甲基化酶RBP2可以通過CagA-AKT-Sp1-RBP2-CyclinD1軸促進幽門螺桿菌誘導的胃粘膜上皮細胞的惡性轉(zhuǎn)化1.幽門螺桿菌的毒力因子CagA可以誘導RBP2的表達：把CagA的表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)入胃癌細胞后,RBP2被可以明顯誘導表達。2. CagA誘導RBP2的表達是依賴于轉(zhuǎn)錄因子Sp1的：在胃癌細胞中,敲低Spl的表達后,CagA對于RBP2的誘導作用也會得到逆轉(zhuǎn)。我們用EMSA和ChIP實驗證明了Spl對RBP2啟動子的直接結(jié)合作用。3. PI3K/AKT信號通路介導了Spl依賴性的CagA對RBP2的誘導表達：用AKT信號的特異性抑制劑LY294002處理胃癌細胞后,Spl的激活程度會降低,CagA對于RBP2的誘導作用就會得到逆轉(zhuǎn),同時也會逆轉(zhuǎn)CagA對胃癌細胞增殖的促進作用。4. CagA誘導的RBP2可以靶向作用于Cyclin D1,從而促進胃癌細胞的不可控增殖：我們用PCR和western blot的方法證明了Cyclin D1是RBP2下游的一個靶分子。隨著RBP2的表達下降,Cyclin D1的表達也降低。5.在慢性胃炎向胃癌演變過程中,RBP2和Spl表達呈正相關(guān)：我們在胃病變組織進行了RBP2和Spl的免疫組織化學染色,發(fā)現(xiàn)了RBP2和Spl的表達都隨著疾病的進展而不斷增高,且RBP2和Spl在病變組織中有共表達的現(xiàn)象。(二)進一步研究證實組蛋白去甲基化酶RBP2可以通過TGF-β1-p-Smad3-RBP2-E-cadherin-Smad3反饋環(huán)路促進胃癌的惡性進展1.RBP2在胃癌的惡性進展中發(fā)揮了重要作用,其對于胃癌細胞EMT發(fā)生是必要的：我們在胃癌細胞中敲低RBP2的表達后,發(fā)現(xiàn)細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力都顯著降低；同時胃癌細胞的干性樣特征也顯著下降。用穩(wěn)定敲低RBP2的胃癌細胞尾靜脈注射裸鼠后,和對照組相比,胃癌細胞轉(zhuǎn)移到遠處臟器的能力明顯下降。相應地,我們在胃癌細胞中轉(zhuǎn)入RBP2的高表達質(zhì)粒后,細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力顯著增強。2.RBP2可以被TGF-β誘導表達,且對于TGF-β誘導的EMT發(fā)生是必需的：TGF-β可以以一種時間依賴性的方式來誘導RBP2的表達。TGF-β信號活化的磷酸化的Smad3可以結(jié)合到RBP2啟動子上促進其轉(zhuǎn)錄表達。敲低RBP2的表達可以逆轉(zhuǎn)TGF-β對細胞侵襲轉(zhuǎn)移的促進作用,同時TGF-β對癌癥細胞干性樣特征的增強作用也被逆轉(zhuǎn)。TGF-β對間質(zhì)標志物的上調(diào)作用以及對上皮標志物的下調(diào)作用都會因為RBP2的敲低而得到部分逆轉(zhuǎn)。3.RBP2通過直接抑制E-cadherin的表達來參與胃癌惡性進展的調(diào)控：敲低RBP2表達后,E-cadherin的表達明顯被誘導。ChIP實驗發(fā)現(xiàn)RBP2可以直接結(jié)合到E-cadherin的啟動子上,抑制其表達。同時敲低RBP2和E-cadherin的表達,則RBP2敲低對胃癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的抑制作用都會得到逆轉(zhuǎn)；同時RBP2敲低對胃癌細胞干細胞樣特征的抑制作用也會得到逆轉(zhuǎn),說明RBP2是通過調(diào)控E-cadherin的表達來參與胃癌惡性進展的。4.RBP2可以和p-Smad3相結(jié)合并被其招募到E-cadherin的啟動子上增強對E-cadherin的抑制作用：免疫共沉淀實驗證明RBP2和p-Smad3能夠相互結(jié)合,且p-Smad3可能招募了RBP2到E-cadherin的啟動子上,抑制其表達。5. E-cadherin可以通過抑制Smad3的磷酸化反饋調(diào)控RBP2的表達：E-cadherin在胃癌細胞中表達降低后,可以增強Smad3的磷酸化,從而促進了其對RBP2表達的促進作用,同時細胞的遷移能力也會加強。6.RBP2在進展期的胃癌組織中和Snail1共表達,且和E-cadherin表達呈負相關(guān)：我們選取了130例原發(fā)性進展性胃癌組織標本,進行了RBP2、 Snail1和E-cadherin的免疫組織化學染色,發(fā)現(xiàn)RBP2和Snail1的共表達。而且RBP2的表達和陽性對照Snail1一樣,同E-cadherin的表達呈負相關(guān)關(guān)系。研究結(jié)論(一)RBP2可以通過CagA-AKT-Sp1-RBP2-Cyclin D1軸促進幽門螺桿菌誘導的胃粘膜上皮細胞的惡性轉(zhuǎn)化,本部分研究揭示了胃炎向胃癌跨越過程中新的調(diào)控機制,即RBP2介導了感染向癌癥的轉(zhuǎn)化。因此RBP2可以作為胃癌早期防控的靶點分子。(二)RBP2可以通過TGF-β1-p-Smad3-RBP2-E-cadherin-Smad3反饋環(huán)路促進胃癌的惡性進展,本部分研究揭示了胃癌惡性進展中的表觀遺傳學調(diào)控新機制,豐富了我們對于癌癥侵襲轉(zhuǎn)移過程中生物學調(diào)控機制的認識。因此RBP2可以作為胃癌治療的潛在靶點分子。
[Abstract]:Objective : To study the role of histone demethylase RBP2 in the malignant transformation of gastric cancer and the progression of gastric cancer . The expression of RBP2 is dependent on the transcription factor Sp1 : in gastric cancer cells , the induction of RBP2 is reversed after the expression of low Spl , and the direct binding effect of Spl on RBP2 promoter is demonstrated by EMSA and ChIP experiments . After treatment of gastric cancer cells , the activation degree of Spl was decreased after treatment of gastric cancer cells with the specific inhibitor LY294004 , and the induction effect on RBP2 could be reversed , and the enhancement of the proliferation of gastric cancer cells was also reversed . The expression of RBP2 and Spl was positively correlated with the progression of gastric cancer . The expression of RBP2 and Spl was positively correlated with the progression of gastric cancer .
The expression of TGF - 尾 induced by TGF - 尾 could be reversed . The expression of TGF - 尾 induced by TGF - 尾 could be reversed .
RBP2 can be combined with p - Smad3 and can be recruited into E - cadherin promoter to enhance the inhibitory effect on E - cadherin . The results of the immune codeposition show that RBP2 and p - Smad3 can bind to each other , and the p - Smad3 may recruit RBP2 to E - cadherin promoter to inhibit the expression of E - cadherin . The expression of RBP2 and the expression of E - cadherin in gastric cancer tissues of 130 patients with advanced gastric cancer were studied . The results showed that RBP2 could be used as a target molecule for early gastric cancer .

【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
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本文編號：1795048