本文選題：FBXO31 + Snaill��； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景:胃癌(GC)是世界常見的惡性腫瘤之一,在癌癥相關(guān)死亡中位居第三位,我國是胃癌高發(fā)區(qū)。胃癌患者生存期短、易復(fù)發(fā),腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是造成胃癌預(yù)后差的重要原因。目前認(rèn)為上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(EMT)在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用,過程中有多種轉(zhuǎn)錄因子(EMT-TFs)的參與,這些EMT-TFs是高度不穩(wěn)定的蛋白,易被蛋白酶體途徑泛素化降解。FBXO31 是 F-box 蛋白家族成員,參與 Skp1-Cullin-F-box(SCF)泛素 E3連接酶復(fù)合物的形成,能夠介導(dǎo)泛素依賴性蛋白酶體降解途徑和調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。我們前期研究發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中FBXO31的mRNA和蛋白水平明顯降低,且低表達(dá)與胃癌患者預(yù)后差、存活期限短等密切相關(guān)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),FBX031高表達(dá)能夠顯著抑制人胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力,但具體的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。研究目的:1.探究FBXO31對胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的調(diào)控機(jī)制;2.探討FBXO31能否通過泛素化依賴性途徑降解EMT-TFs,并確定FBXO31與EMT-TFs間相互作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域及分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法:1.分子及細(xì)胞水平的研究1.1人胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染FBXO31 siRNA,觀察細(xì)胞表型變化。然后,將FBXO31 siRNA及高表達(dá)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞,細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測FBXO31干擾和高表達(dá)對胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。1.2 FBXO31 siRNA和高表達(dá)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞,qRT-PCR和Western blot檢測細(xì)胞中不同EMT-TFs在mRNA和蛋白水平的變化。1.3將FBXO1表達(dá)載體Myc-FBXO31及F-box結(jié)構(gòu)域缺失的載體Myc-△FBXO31分別與EMT-TF Snail1的表達(dá)載體Flag-Snail1共轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞,Western blot和Co-IP檢測FBXO31與Snail1的相互作用,并通過泛素化實(shí)驗(yàn)檢測FBX031能否引起Snail1的泛素化降解。1.4 Myc-FBXO31高表達(dá)載體分別與Flag-Snail1的野生型和磷酸化位點(diǎn)突變的載體共轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞,Co-IP檢測Snail1的降解是否需要發(fā)生磷酸化。2.動(dòng)物水平的研究構(gòu)建篩選FBXO31高表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系(BGC-FBXO31),對裸鼠尾靜脈注射,6周后觀察并分析裸鼠體內(nèi)肺轉(zhuǎn)移的情況。3.臨床標(biāo)本的研究收集77例人胃癌及對應(yīng)癌旁組織,Western blot檢測組織中FBXO31與Snail1的表達(dá)并分析二者的相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.分子及細(xì)胞水平1.1胃癌細(xì)胞FBXO31干擾后細(xì)胞呈現(xiàn)長梭形,細(xì)胞間粘著性降低。細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,FBXO31沉默能促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移,FBX031高表達(dá)能抑制胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。1.2 FBXO31 siRNA和高表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞,EMT-TF Snail1在mRNA水平?jīng)]有變化,在蛋白水平可被FBX031下調(diào)。1.3 Co-IP結(jié)果顯示FBXO31能與Snail1相互結(jié)合,且F-box結(jié)構(gòu)域?qū)τ诙叩南嗷プ饔檬潜匦璧?體內(nèi)泛素化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明FBXO31能引起Snail1的泛素化,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)FBXO31與Snail1的相互作用依賴于Snail1的磷酸化。2.動(dòng)物水平的研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明高表達(dá)的FBX031能顯著抑制裸鼠體內(nèi)胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。3.臨床標(biāo)本的研究Western blot結(jié)果顯示:與癌旁組織相比,胃癌組織中FBXO31顯著低表達(dá),而Snail1顯著高表達(dá),二者在胃癌組織中的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:研究結(jié)果表明,FBXO31能夠泛素化降解EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail1,進(jìn)而抑制胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。在二者的相互作用中,FBXO31的F-box結(jié)構(gòu)域和Snail1的GSK-3β磷酸化基序是不可或缺的。該研究闡明了 FBXO31抑制胃癌進(jìn)展的分子機(jī)制,并確定了 EMT轉(zhuǎn)錄因子Snail1作為FBXO31調(diào)節(jié)胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的新靶點(diǎn),為以FBXO31途徑為靶點(diǎn)的抗腫瘤治療提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of FBXO31 on the invasion and metastasis of gastric cancer cells . The results showed that FBXO31 could significantly inhibit the invasion and metastasis of gastric cancer cells . The results showed that FBXO31 could significantly inhibit the invasion and metastasis of gastric cancer cells in nude mice . The results showed that FBXO31 could significantly inhibit the invasion and metastasis of gastric cancer cells in nude mice .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.2

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1 鄒水燕;FBXO31介導(dǎo)Snaill泛素化降解抑制胃癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究[D];山東大學(xué);2017年

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本文編號(hào)：1792792