本文選題：EML-ALK融合基因 + Alectinib�。� 參考：《中國(guó)病理生理雜志》2017年05期

【摘要】：目的:本研究旨在探討肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)是否以旁路激活的方式誘導(dǎo)EML4-ALK融合基因陽(yáng)性肺癌細(xì)胞株H3122對(duì)alectinib的耐藥,并進(jìn)一步探討旁路信號(hào)激活在alectinib耐藥中的作用。方法:用不同濃度的alectinib、克唑替尼(crizotinib)、17-DMAG或(和)HGF(50μg/L)、EGF(100μg/L)、TGF-α(100μg/L)處理EML4-ALK陽(yáng)性肺癌細(xì)胞株H3122,采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中ALK、c-Met、EGFR及相應(yīng)磷酸化蛋白的表達(dá),觀察其下游通路關(guān)鍵蛋白AKT、ERK、p-AKT和p-ERK水平。結(jié)果:Alectinib作用72 h后,H3122細(xì)胞株的活力隨著alectinib藥物濃度的增加而逐漸下降,呈劑量依賴性。HGF、EGF和TGF-α誘導(dǎo)后,alectinib抑制H3122細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線往右移,HGF、EGF和TGF-α處理能夠降低alectinib對(duì)肺癌細(xì)胞活力的抑制作用。0.05μmol/L alectinib作用H3122細(xì)胞株48 h后的凋亡率為(20.12±1.36)%,而alectinib聯(lián)合HGF、EGF和TGF-α后的凋亡率分別為(7.85±1.03)%、(5.60±0.79)%和(4.58±1.00)%,顯著低于alectinib單藥處理(P0.05)。Alectinib單藥成功抑制p-ALK及其下游信號(hào)通路,HGF明顯增加細(xì)胞中p-Met及其下游p-AKT、p-ERK的蛋白水平,EGF和TGF-α明顯增加細(xì)胞中p-EGFR及其下游p-AKT、p-ERK的表達(dá),alectinib抑制p-ALK,但不能抑制HGF、EGF和TGF-α誘導(dǎo)的pAKT和p-ERK的蛋白表達(dá)。此外,聯(lián)合應(yīng)用crizotinib和17-DMAG可以抑制因HGF和EGFR配體而導(dǎo)致的H3122耐藥細(xì)胞的活力。結(jié)論:HGF、EGF和TGF-α可通過(guò)旁路激活的方式誘導(dǎo)EML4-ALK陽(yáng)性肺癌細(xì)胞H3122對(duì)alectinib耐藥,其機(jī)制可能與HGF激活c-Met磷酸化、EGF和TGF-α激活EGFR磷酸化有關(guān)。
[Abstract]:Objective: to investigate whether EML4-ALK fusion gene positive lung cancer cell line H3122 can be induced to be resistant to alectinib by bypass activation of hepatocyte growth factor (HGF), epidermal growth factor (EGF) and transforming growth factor 偽 (TGF- 偽). The role of bypass signal activation in drug resistance of alectinib was further investigated. Methods: EML4-ALK positive lung cancer cell line H3122 was treated with different concentrations of alectinib, crizotinib, 17-DMAG or (and HGF50 渭 g / L). The activity of H3122 was detected by CCK-8 assay, apoptosis was detected by flow cytometry, and the expression of ALKFc-Metagro EGFR and phosphorylated protein in H3122 cells was detected by Western blot technique. The levels of p-AKT and p-ERK were observed. Results the activity of H3122 cell line was decreased with the increase of alectinib concentration after 72 h treatment with 1: Alectinib. HGF-EGF and TGF- 偽 induce H3122 cell growth curve to the right of H3122 cells induced by EGF and TGF- 偽 in a dose-dependent manner. HGF- EGF and TGF- 偽 treatment can reduce the inhibitory effect of alectinib on the viability of lung cancer cells. The apoptosis rate of H3122 cell line induced by 0.05 渭 mol/L alectinib for 48 h is 20.12 鹵1.36%, while that of alectinib combined with HGF- EGF is 20.12 鹵1.36%. The apoptotic rates were 5.60 鹵0.79% and 4.58 鹵1.00% after TGF- 偽 and 7.85 鹵1.03%, respectively, which were significantly lower than that of P0.05N. Alectinib treated with alectinib alone. HGF significantly increased the protein levels of p-Met and its downstream p-AKTp-ERK protein. EGF and TGF- 偽 increased the expression of p-EGFR and TGF- 偽 in the cells. The expression of p-AKTtinib inhibited the expression of p-ALK, but could not inhibit the protein expression of pAKT and p-ERK induced by HGF EGF and TGF- 偽. In addition, the combination of crizotinib and 17-DMAG inhibited the activity of H3122 cells induced by HGF and EGFR ligands. Conclusion EML4-ALK positive lung cancer cell H3122 can be induced to be resistant to alectinib by the way of bypass activation, which may be related to the activation of c-Met phosphorylation by HGF and EGFR phosphorylation by TGF- 偽.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)研究生院;廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院呼吸腫瘤內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81260357;No.81060188) 廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.2015GXNSFAA139162)
【分類號(hào)】：R730.23

【參考文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1787147