發(fā)布時間：2018-04-20 08:10

  本文選題：胰腺癌 + 化療耐藥��； 參考：《第四軍醫(yī)大學》2015年碩士論文

【摘要】：胰腺癌是死亡率最高的惡性腫瘤之一,胰腺癌的致死性主要是由于其化療藥物抵抗能力,這與胰腺癌細胞死亡信號通路的改變密切相關。以往大家普遍認為腫瘤細胞化療耐藥的機制一般為對細胞凋亡的抵抗,細胞凋亡的抵抗機制一直是研究的熱門話題。然而越來越多的證據表明,腫瘤細胞死亡方式呈現(xiàn)多樣化。深入理解化療藥物誘導的腫瘤細胞死亡形式及信號通路的變化對于腫瘤化療耐藥的克服及藥靶的開發(fā)具有非常重要的現(xiàn)實意義。程序性壞死是近幾年發(fā)現(xiàn)的另一種程序性細胞死亡形式,與凋亡相似,是可調控的細胞死亡形式。一般在凋亡信號通路受到阻斷,caspase活性受到抑制的條件下發(fā)生,這一特質也恰恰使程序性壞死具有了克服腫瘤化療耐藥的潛質,而且使得程序性壞死在耐藥方面的研究成為熱點。但是,程序性壞死在傳統(tǒng)化療藥物誘導的腫瘤細胞死亡抵抗中是否發(fā)揮作用,凋亡和程序性壞死在腫瘤細胞死亡抵抗中發(fā)揮怎樣的作用,調控腫瘤細胞死亡形式及死亡抵抗的關鍵分子有哪些還不明確,本研究就是要針對這些問題進行初步探究。在本研究中,我們首先分析了168例胰腺癌病人樣本,發(fā)現(xiàn)RIP3的表達水平與胰腺癌病人的總體生存時間顯著相關,RIP3高表達是胰腺癌病人死亡的危險因素。然后我們在細胞水平進行了研究,我們篩選出能夠發(fā)生程序性壞死的胰腺癌細胞株CFPAC-1,我們發(fā)現(xiàn)吉西他濱誘導該細胞的死亡不會被全caspase抑制劑Z-VAD-fmk阻斷,卻能夠被程序性壞死抑制劑Nec-1部分阻斷,且透射電鏡結果顯示,吉西他濱能夠誘導CFPAC-1發(fā)生凋亡和壞死,。我們用吉西他濱誘導CFPAC-1細胞獲得了IC50為20μM的耐藥細胞株R1、R2。另外,我們發(fā)現(xiàn)該耐藥細胞株獲得了抵抗凋亡和程序性壞死的能力。我們首次在腫瘤耐藥模型中研究了程序性壞死的作用。我們發(fā)現(xiàn)在胰腺癌耐藥細胞株中,RIP3、CD147、p-Drp1的表達水平顯著上調。干涉RIP3能夠促進吉西他濱誘導的耐藥腫瘤細胞的死亡,對CFPAC-1細胞沒有顯著作用。另外,干涉CD147或者利用CD147的單克隆抗體Hab18/6H8阻斷聯(lián)合吉西他濱均能逆轉CFPAC-1(R)吉西他濱耐藥。我們還發(fā)現(xiàn)Drp-1 S637位去磷酸化及線粒體分裂參與了吉西他濱誘導的胰腺癌細胞死亡及耐藥。最后,我們發(fā)現(xiàn)CD147能夠促進Drp1磷酸化,抑制Drp1二聚抑制線粒體分裂,從而抑制吉西他濱誘導的細胞死亡。RIP3能夠通過調控CD147及其下游信號分子Bcl-2、Drp-1、NF-kB等參與腫瘤細胞死亡抵抗。
[Abstract]:Pancreatic cancer is one of the most fatal malignant tumors, and its mortality is mainly due to its resistance to chemotherapy drugs, which is closely related to the change of death signal pathway in pancreatic cancer cells. In the past, it was generally believed that the mechanism of chemotherapeutic resistance of tumor cells is the resistance to apoptosis, and the mechanism of resistance to apoptosis has always been a hot topic. However, there is increasing evidence that tumor cells die in a variety of ways. It is very important to understand the changes of tumor cell death and signal pathway induced by chemotherapeutic drugs for overcoming chemotherapeutic resistance and developing drug targets. Programmed necrosis is another kind of programmed cell death found in recent years, which is similar to apoptosis and can be regulated by cell death. The activity of caspase occurs when the apoptotic signaling pathway is blocked, which makes the programmed necrosis have the potential to overcome the chemotherapeutic resistance of tumor, and makes the research on the drug resistance of the programmed necrosis become a hot topic. However, whether programmed necrosis plays a role in tumor cell death resistance induced by traditional chemotherapeutic drugs, and what role apoptosis and programmed necrosis play in tumor cell death resistance, It is not clear which key molecules are involved in the regulation of tumor cell death forms and death resistance. In this study, we first analyzed 168 patients with pancreatic cancer. We found that the expression of RIP3 was significantly correlated with the overall survival time of patients with pancreatic cancer, and the high expression of RIP3 was a risk factor for death in patients with pancreatic cancer. Then we studied it at the cell level, and we screened the pancreatic cancer cell line CFPAC-1, which could cause programmed necrosis, and we found that gemcitabine-induced cell death was not blocked by the whole caspase inhibitor Z-VAD-fmk. The results of transmission electron microscope showed that gemcitabine could induce apoptosis and necrosis of CFPAC-1. CFPAC-1 cells were induced by gemcitabine to obtain a 20 渭 M IC50 resistant cell line R _ (1) and R _ (2). In addition, we found that the drug resistant cell line acquired the ability to resist apoptosis and programmed necrosis. For the first time, we studied the role of programmed necrosis in tumor resistance models. We found that the expression of RIP3, CD147, p-Drp1 was significantly up-regulated in drug-resistant pancreatic cancer cell lines. Intervention of RIP3 could promote the death of drug resistant tumor cells induced by gemcitabine, but had no significant effect on CFPAC-1 cells. In addition, interfering with CD147 or blocking the combination of gemcitabine with Hab18/6H8, a monoclonal antibody of CD147, could reverse the resistance to gemcitabine. We also found that Drp-1 S637 dephosphorylation and mitochondrial division were involved in gemcitabine-induced pancreatic cancer cell death and drug resistance. Finally, we found that CD147 can promote Drp1 phosphorylation, inhibit Drp1 dimerization, inhibit mitochondrial division, and thus inhibit gemcitabine-induced cell death. RIP3 can participate in tumor cell death resistance by regulating CD147 and its downstream signaling molecule Bcl-2NF-kB.
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9

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本文編號：1776967