本文選題：乳腺癌 + microRNA　； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：【研究背景】腫瘤是威脅人類健康的重大疾病,而我國的癌癥負擔不斷增加,每年大約有160萬人被診斷為癌癥,約120萬人死于癌癥。乳腺癌是目前女性最常見的惡性腫瘤之一,它發(fā)病率高,死亡率高。全球乳腺癌的發(fā)病率自20世紀70年代以來一直呈現(xiàn)逐年上升的趨勢,而且近年來發(fā)病年齡趨于年輕化。但是隨著現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的不斷提高,近年來乳腺癌的五年生存率有了很大的提高,但是有遠處轉(zhuǎn)移的患者的愈后仍然很差,五年生存率大約為20%。每年大約有30%的乳腺癌患者發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移,其中有70%左右都是骨轉(zhuǎn)移。侵襲性生長和遠處轉(zhuǎn)移是乳腺癌患者死亡的最主要的原因。盡管,目前的研究成果有利于我們進一步了解乳腺癌的發(fā)生發(fā)展,但是仍然有很多尚未發(fā)現(xiàn)的標記物阻礙了我們對乳腺癌發(fā)生發(fā)展的全面認識。越來越多的研究表明,microRNA在癌癥的診斷和治療中發(fā)揮著重要的作用,在乳腺癌中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了幾十種可以影響腫瘤生長轉(zhuǎn)移的microRNA。mi RNA是一類長度約20~24個核苷酸的非編碼小RNA,是一組不編碼蛋白質(zhì)的短序列RNA。它們通過與靶基因的m RNA3’UTR區(qū)結(jié)合,抑制蛋白質(zhì)的合成或直接降解靶m RNA,從而調(diào)控基因的表達。目前,只有一小部分的mi RNA的生物學(xué)功能得到了闡明。miR-205是一種被證實的對腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有著重要負調(diào)控作用的抑癌基因,有研究報道m(xù)iR-205在前列腺癌等腫瘤組織中低表達,而恢復(fù)miR-205在前列腺癌中的表達,可以導(dǎo)致間質(zhì)樣細胞向上皮樣細胞轉(zhuǎn)化。我們前期基因芯片分析發(fā)現(xiàn),miR-205在乳腺癌細胞中低表達,于是我們想進一步研究它的生物學(xué)功能。腫瘤細胞的快速生長是實體瘤惡性進展的先決條件,其中會涉及到許多靶基因的表達異常和功能缺失。Runx2,又稱核心結(jié)合因子,已有研究證明在多種惡性腫瘤中扮演者癌基因的功能。我們思考miR-205-3p-3p的下降在乳腺癌進展中是否起到了促進作用?而這其中miR-205-3p-3p是否與Runx2有一定的聯(lián)系呢?本課題中,首先檢測了正常乳腺上皮細胞MCF-10A和乳腺癌細胞MB231、MCF7中miR-205-3p-3p的表達水平,人為改變miR-205-3p-3p的表達水平觀察乳腺癌細胞在增殖、遷移侵襲以及克隆形成的變化;并通過生物信息學(xué)預(yù)測和熒光素酶報告基因來驗證Runx2是否為miR-205-3p的靶基因。通過探討miR-205-3p在乳腺癌細胞中的作用,為乳腺癌的臨床診斷和治療提供了新的方向�！狙芯磕康摹刻接憁iR-205-3p在乳腺癌細胞中的作用,尋找其靶基因�！狙芯績�(nèi)容】miR-205-3p在乳腺癌細胞株中的作用以及miR-205-3p與靶基因Runx2的預(yù)測和驗證1.用qRT-PCR檢測人正常乳腺上皮細胞MCF-10A和乳腺癌細胞MB231、MCF-7中,miR-205-3p的表達情況。2.用慢病毒感染三株細胞,建立穩(wěn)定表達miR-205-3p inhibitor/negative control的MCF-10A細胞株和穩(wěn)定表達miR-205-3p mimic/negative control的MB231、MCF-7細胞株。3.用上述構(gòu)建好的細胞株來研究miR-205-3p在乳腺癌細胞中的生物學(xué)功能。(1)MTT法檢測細胞增殖能力的變化(2)平板克隆實驗和軟瓊脂集落形成實驗檢測MB231和MCF-7的克隆形成能力和非錨定生長能力。(3)Transwell法檢測MCF-10A、MB231和MCF-7中細胞侵襲能力的改變。4.用Western blot檢測與EMT相關(guān)marker的蛋白表達情況。5.檢測miR-205-3p是否通過Wnt/β-catenin介導(dǎo)EMT。6.用Targetscan軟件預(yù)測miR-205-3p的靶基因Runx2,并用熒光素酶報告基因?qū)嶒瀬眚炞C。7.通過PCR和Western blot檢測抑制或過表達miR-205-3p后Runx2的變化�！狙芯拷Y(jié)果】1.與人正常乳腺上皮細胞MCF-10A相比,miR-205-3p在乳腺癌細胞MB231、MCF-7中低表達。2.成功構(gòu)建了敲低miR-205-3p的MCF-10A和過表達miR-205-3p的MB231、MCF-7穩(wěn)定細胞株。3.miR-205-3p對乳腺癌細胞增殖速度的影響:MTT結(jié)果顯示,在MCF-10A中敲低miR-205-3p的表達后,細胞增殖速度明顯增加;而在MB231和MCF-7中過表達miR-205-3p后,細胞的生長速度受到了抑制。4.miR-205-3p對乳腺癌細胞克隆形成能力和非錨定生長能力的影響:平板克隆結(jié)果顯示,在MB231和MCF-7中過表達miR-205-3p后,克隆形成的大小和克隆形成率明顯減少,軟瓊脂的集落形成大小和個數(shù)也都明顯減少,表明miR-205-3p抑制了乳腺癌細胞的克隆形成能力和非錨定生長能力。5.miR-205-3p對乳腺癌細胞侵襲能力的影響:Tranwell結(jié)果表明,在在MCF-10A中敲低miR-205-3p的表達后,細胞的侵襲能力增強;而在MB231和MCF-7中過表達miR-205-3p后,細胞的侵襲能力明顯減弱。以上結(jié)果表明了miR-205-3p的升高能夠抑制乳腺癌細胞的侵襲能力。6.miR-205-3p與MET的關(guān)系:細胞形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),在MB231中過表達miR-205-3p后,細胞間的連接變得緊密。通過WB檢測發(fā)現(xiàn),間質(zhì)樣Marker的表達降低,而上皮樣Marker表達升高。7.miR-205-3p在乳腺癌細胞中可以通過Wnt/β-catenin信號通路逆轉(zhuǎn)EMT的發(fā)生。8.生物信息學(xué)預(yù)測軟件分析Runx2的m RNA 3’UTR區(qū)與miR-205-3p有一段完全互補的堿基序列;通過熒光素酶報告基因?qū)嶒瀸unx2的野生型質(zhì)粒與miR-205-3p mimic共轉(zhuǎn)到293T細胞中,熒光強度與對照組相比顯著降低,驗證了Runx2是miR-205-3p的一個靶基因。9.過表達或抑制miR-205-3p在MB231和MCF-10A中的表達,Runx2的m RNA和蛋白水平相應(yīng)的出現(xiàn)下降或上升。【結(jié)論】在乳腺癌細胞中過表達miR-205-3p,能夠抑制乳腺癌細胞的增殖、侵襲和克隆形成能力,同時能夠逆轉(zhuǎn)EMT的發(fā)生,在乳腺癌中發(fā)揮著抑癌基因的作用。
[Abstract]:Breast cancer is one of the most common malignant tumors in breast cancer . The expression of miR - 205 - 3P in breast cancer cell line MCF - 10A and breast cancer cells MB231 and MCF - 7 were determined by using the above - mentioned construction cell line . The expression of miR - 205 - 3P in MCF - 10A and MCF - 7 was significantly reduced compared with control group . The results showed that miR - 205 - 3P inhibited the invasion ability of breast cancer cells .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1771622