發(fā)布時間：2018-04-18 12:59

  本文選題：sGRP78 + STAT3��； 參考：《武漢大學》2015年博士論文

【摘要】：目的：近年來,我國乳腺癌發(fā)病率逐年上升,已躍升為女性腫瘤的第一位。耐藥乳腺癌復發(fā)及轉(zhuǎn)移仍然是無法治愈的疾病,潛伏的腫瘤細胞帶來的腫瘤復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移則是乳腺癌患者死亡的主要原因。已有研究證實,細胞膜高表達GRP78蛋白與癌細胞增殖、遷移、侵襲和治療耐藥有關(guān)。然而,其具體的作用機制并不清楚。本文將探討人乳腺癌組織細胞膜GRP78(surface GRP78,sGRP78)蛋白的表達與疾病進展的關(guān)系,并在體外進一步研究sGRP78蛋白促進乳腺癌細胞增殖和遷移的分子機制。方法：利用免疫熒光雙標法檢測乳腺癌組織和及其癌旁對照組織sGRP78蛋白,Western blot法檢測蛋白和蛋白磷酸化的表達,并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。采用攜帶目的基因腺病毒載體在低表達GRP78蛋白的人乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-453建立過表達模型；采用靶向STAT3的shRNA慢病毒下調(diào)STAT3的表達。分析sGRP78蛋白表達與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的關(guān)系,然后分別應用MTT和TUNEL檢測細胞增殖和凋亡,wound healing assay檢測細胞遷移,最后探討sGRP78對JAK2/STAT3信號通路的影響。結(jié)果：(1)sGRP78在人乳腺癌組織中有表達,且表達與乳腺癌的病理分期顯著相關(guān),分期越高,sGRP78蛋白的表達越強。(2)Ad/GRP78轉(zhuǎn)染細胞可顯著提高sGRP78在乳腺癌細胞中的表達。(3)sGRP78蛋白上調(diào)不能引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激；但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激能夠提高GRP78蛋白表達并上調(diào)GRP78蛋白在細胞膜的分布。(4)sGRP78蛋白過表達促進MCF-7乳腺癌細胞增殖、遷移。(5)sGRP78激活JAK2/STAT3信號通路。(6)STAT3介導sGRP78對乳腺癌細胞的增殖、凋亡、遷徙的影響。結(jié)論：我們證實,(1)人乳腺癌組織表達sGRP78蛋白,且與乳腺癌進展相關(guān)；(2)sGRP78蛋白通過激活JAK2/STAT3信號通路促進乳腺癌細胞增殖和遷移。
[Abstract]:Objective: in recent years, the incidence of breast cancer in China has increased year by year.Recurrence and metastasis of drug-resistant breast cancer is still an incurable disease. Recurrence and distant metastasis caused by latent tumor cells are the main causes of death in breast cancer patients.It has been proved that the high expression of GRP78 protein on cell membrane is related to the proliferation, migration, invasion and drug resistance of cancer cells.However, its specific mechanism is not clear.In this paper, we will investigate the relationship between the expression of GRP78(surface GRP78) and the progress of the disease in human breast cancer tissue, and further study the molecular mechanism of sGRP78 protein promoting the proliferation and migration of breast cancer cells in vitro.Methods: the expression of protein and protein phosphorylation in breast cancer tissues and its adjacent control tissues were detected by double immunofluorescence blot, and the relationship between protein phosphorylation and clinicopathological parameters was analyzed.The overexpression model was established by using adenovirus vector carrying target gene in MCF-7 and MDA-MB-453 cells with low expression of GRP78 protein, and the expression of STAT3 was down-regulated by shRNA lentivirus targeting STAT3.The relationship between the expression of sGRP78 protein and endoplasmic reticulum stress was analyzed. Then MTT and TUNEL were used to detect cell proliferation and apoptosis healing assay to detect cell migration. Finally, the effect of sGRP78 on JAK2/STAT3 signaling pathway was discussed.Results the expression of SGRP78 in human breast cancer was significantly correlated with the pathological stage of breast cancer.The higher the stage, the stronger the expression of sGRP78 protein. Ad-r-GRP78 transfection cells could significantly increase the expression of sGRP78 in breast cancer cells. The up-regulation of sGRP78 protein could not induce endoplasmic reticulum stress.However, endoplasmic reticulum stress could increase the expression of GRP78 protein and up-regulate the distribution of GRP78 protein on the cell membrane. The overexpression of GRP78 protein promoted the proliferation of MCF-7 breast cancer cells. Migration. 5% sGRP78 activated the JAK2/STAT3 signaling pathway. SGRP78 mediated the proliferation and apoptosis of breast cancer cells.The effects of migration.Conclusion: sGRP78 protein is expressed in human breast cancer tissues, and it is associated with the progression of breast cancer, which promotes the proliferation and migration of breast cancer cells by activating JAK2/STAT3 signaling pathway.
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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本文編號：1768477