發(fā)布時間：2018-04-17 06:15

  本文選題：膠質瘤 + LRIG1�。� 參考：《武漢大學》2016年博士論文

【摘要】：目的：探討LRIG1對人腦膠質瘤細胞侵襲及轉移能力的影響及其可能的分子機制。探討SNAI2|—E-cadherin軸在這一過程中所發(fā)揮的作用。方法：使用質粒轉染LRIG1基因的方法使人腦膠質瘤細胞系U251細胞中高表達LRIG1,采用G418篩選出陽性單克隆細胞株并進行擴增,RT-PCR及Western Blot驗證LRIG1在mRNA及蛋白水平高表達。應用siRNA使人腦膠質瘤細胞系U251細胞中低表達LRIG1,RT-PCR及Western Blot驗證LRIG1在mRNA及蛋白水平低表達。Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲能力的變化,Transwell轉移實驗及劃痕愈合實驗檢測細胞轉移能力的變化。RT-PCR及Western Blot檢測LRIG1表達水平改變時EMT相關標記分子SNAI2及其下游分子E-cadherin的變化。收集人腦膠質母細胞瘤及人正常腦組織標本,采用Western Blot檢測各例標本中LRIG1與SNAI2和E-cadherin的蛋白表達。最后使用SNAI2的小分子抑制劑PCPA處理LRIG1低表達的U251細胞,觀察SNAI2功能被抑制后低表達LRIG1對細胞侵襲及轉移能力的影響及SNAI2—E-cadherin軸的變化。結果：運用質粒轉染的方法成功構建高表達LRIG1的人腦膠質瘤U251細胞株。LRIG1高表達可導致U251細胞侵襲及轉移能力明顯下降。同時LRIG1高表達會下調細胞中SNAI2的表達,導致細胞中E-cadherin表達量明顯上升。運用特異性沉默LRIG1的siRNA成功構建低表達LRIG1的人腦膠質瘤U251細胞株。LRIG1低表達可導致U251細胞侵襲及轉移能力明顯上升。同時LRIG1低表達會上調細胞中SNAI2的表達,導致細胞中E-cadherin表達量明顯下降。與正常人腦組織相比,人腦膠質母細胞瘤組織中LRIG1蛋白水平較低,SNAI2蛋白水平明顯上調而E-cadherin蛋白水平明顯下調。進一步實驗表明,使用PCPA處理LRIG1低表達的U251細胞阻斷SNAI2的功能,可逆轉LRIG1低表達對U251細胞侵襲和轉移能力的促進作用及對E-caherin表達的調節(jié)作用。結論：LRIG1可以抑制人腦膠質瘤U251細胞侵襲及轉移,這一作用與LRIG1抑制SNAI2—E-cadherin軸有關。人腦膠質母細胞瘤LRIG1蛋白水平較低,SNAI2蛋白水平較高,E-cadherin蛋白水平較低。人腦膠質母細胞瘤中LRIG1可通過SNAI2—E-cadherin軸調節(jié)細胞侵襲與轉移能力,但其詳細的分子機制尚有待進一步研究。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of LRIG1 on invasion and metastasis of human glioma cells and its possible molecular mechanism.The role of SNAI2-E-cadherin axis in this process is discussed.Methods: the expression of LRIG1 in human glioma cell line U251 was induced by plasmid transfection of LRIG1 gene. The positive monoclonal cell line was screened by G418, and the overexpression of LRIG1 in mRNA and protein levels was verified by RT-PCR and Western Blot.Using siRNA to induce low expression of LRIG1T in human glioma cell line U251 by RT-PCR and Western Blot to verify the change of cell invasion ability of LRIG1 in mRNA and protein low expression .Transwell invasion assay; Transwell metastasis test; scratch healing assay to detect cell metastasisAbility change. RT-PCR and Western Blot were used to detect the changes of EMT related marker SNAI2 and its downstream E-cadherin.Western Blot was used to detect the expression of LRIG1, SNAI2 and E-cadherin in human glioblastoma and normal brain tissue.Finally, U251 cells with low expression of LRIG1 were treated with PCPA, a small molecular inhibitor of SNAI2. The effect of low expression of LRIG1 on the invasion and metastasis of U251 cells and the changes of SNAI2-E-cadherin axis were observed after SNAI2 function was inhibited.Results: the overexpression of human glioma cell line. LRIG1 was successfully constructed by plasmid transfection. The ability of invasion and metastasis of U251 cells decreased significantly.At the same time, the high expression of LRIG1 can down-regulate the expression of SNAI2, leading to a significant increase in the expression of E-cadherin.The low expression of human glioma cell line. LRIG1, which was successfully constructed by using siRNA with specific silencing of LRIG1, could significantly increase the ability of invasion and metastasis of U251 cells.At the same time, low expression of LRIG1 upregulated the expression of SNAI2, which resulted in the decrease of E-cadherin expression.Compared with normal human brain tissue, the level of LRIG1 protein in glioblastoma tissue was lower than that in normal human brain tissue. The level of SNAI2 protein was up-regulated and the level of E-cadherin protein was down-regulated.Further experiments showed that PCPA treatment of U251 cells with low expression of LRIG1 could reverse the effect of LRIG1 low expression on the invasion and metastasis of U251 cells and the regulation of E-caherin expression by blocking the function of SNAI2.Conclusion: LRIG1 can inhibit the invasion and metastasis of human glioma U251 cells, which is related to the inhibition of SNAI2-E-cadherin axis by LRIG1.The level of LRIG1 protein in human glioblastoma was lower and SNAI2 protein level was higher than that of E-cadherin protein.LRIG1 can regulate the invasion and metastasis of human glioblastoma through the SNAI2-E-cadherin axis, but the detailed molecular mechanism remains to be further studied.
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41

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本文編號：1762409