發(fā)布時(shí)間：2018-04-14 08:57

  本文選題：腎癌 + microRNA-137(miR-137)�。� 參考：《吉林大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:腎癌全稱腎細(xì)胞癌或腎腺癌(Renal cell carcinoma,RCC),是一種致死性較強(qiáng)的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤。盡管RCC診斷治療水平已經(jīng)取得巨大進(jìn)步,但晚期腎癌患者的預(yù)后不佳,主要是由于腎癌容易發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā),因此研究腎癌病理機(jī)制有助于腎癌的診斷與治療。MicroRNA(miRNA)是由19-25個(gè)核苷酸組成的一組小片段非編碼RNA,參與癌癥的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程。miR-137是一種能參與多種癌癥發(fā)生發(fā)展的重要的miRNA,但是miR-137在腎癌中的生物功能及其潛在的分子機(jī)制仍然不清楚。因此本研究的目的是分析miR-137在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及相關(guān)的生物學(xué)作用,同時(shí)對其可能的分子機(jī)制進(jìn)行初步探討,為確立以miR-137為靶點(diǎn)的診斷及治療方案提供參考。方法:本實(shí)驗(yàn)通過實(shí)時(shí)定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)比較miR-137在腎癌細(xì)胞系和腫瘤組織中的表達(dá)情況,同時(shí)分析miR-137的表達(dá)與患者年齡、性別、癌癥分期、腫瘤大小、是否發(fā)生轉(zhuǎn)移等臨床指標(biāo)之間的關(guān)系。為深入研究miR-137在腎癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用,將miR-137-mimic轉(zhuǎn)化入786-O細(xì)胞中,通過RT-qPCR對轉(zhuǎn)化效率進(jìn)行驗(yàn)證;通過MTT實(shí)驗(yàn)對細(xì)胞活性進(jìn)行測定;通過流式細(xì)胞術(shù)分析過表達(dá)miR-137對786-O細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響;應(yīng)用Transwell侵襲及遷移試驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)miR-137對786-O細(xì)胞的侵襲和遷移能力;采用小鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)研究過表達(dá)miR-137對小鼠腫瘤的生長的影響;為了研究其相關(guān)的分子機(jī)制,通過在線軟件Target Scan和miRandasearch預(yù)測miR-137的潛在靶基因,通過RT-qPCR、western blot、熒光素表達(dá)技術(shù)、RNA干擾(RNA interference,RNAi)研究miR-137的靶基因作用。結(jié)果:為了研究miR-137的表達(dá)與腎癌病情發(fā)展的相互關(guān)系,我們采用RT-qPCR對miR-137的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測。腫瘤細(xì)胞及組織中miR-137的表達(dá)水平顯著低于正常細(xì)胞及組織。尤其在腎癌組織中miR-137的表達(dá)水平與癌旁組織相比降低了約78%。miR-137的表達(dá)與患者腫瘤大小、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力呈負(fù)相關(guān)。為進(jìn)一步驗(yàn)證miR-137的生物學(xué)作用,將miR-137 mimic轉(zhuǎn)染于786-O細(xì)胞中,用RT-qPCR對miR-137的表達(dá)進(jìn)行了確認(rèn)。MTT法測定細(xì)胞活力顯示miR-137mimic組腎癌細(xì)胞活力顯著低于陰性對照組和空白對照組(P0.05)。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示過表達(dá)miR-137可以將786-O細(xì)胞阻遏在G0/G1期從而使得處于S期的細(xì)胞比例顯著降低。同時(shí),過表達(dá)miR-137能顯著增加腎癌細(xì)胞凋亡比例,降低腎癌細(xì)胞侵襲和遷移的能力。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示過表達(dá)miR-137可以有效抑制小鼠腫瘤的生長。我們采用Target Scan和miRandasearch對miR-137的靶基因進(jìn)行了預(yù)測。結(jié)果顯示:miR-137可與PIK3R3基因的3'-UTR進(jìn)行結(jié)合。熒光素報(bào)告系統(tǒng)結(jié)果證實(shí)PIK3R3為miR-137的直接受體。此外,我們通過RT-qPCR和western blot研究發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-137可以顯著降低PIK3R3轉(zhuǎn)錄和翻譯水平。此外本實(shí)驗(yàn)還采用si-PIK3R3對該基因進(jìn)行了沉默,研究發(fā)現(xiàn)PIK3R3基因的沉默可以有效抑制癌細(xì)胞侵襲和遷移的作用,與過表達(dá)miR-137有相同的功效。最后,我們發(fā)現(xiàn)相對于鄰近的正常組織,PIK3R3在腎癌組織中的表達(dá)明顯上調(diào),相關(guān)性分析表明miR-137在腎癌組織中與PIK3R3表達(dá)水平負(fù)相關(guān)。這些結(jié)論表明miR-137抑制癌細(xì)胞侵襲和遷移的能力在一定程度上依賴對PIK3R3基因表達(dá)的抑制。結(jié)論:在腎癌細(xì)胞及組織中miR-137的表達(dá)水平顯著低于正常細(xì)胞,miR-137的低表達(dá)與腫瘤大小、TNM分期和是否發(fā)生轉(zhuǎn)移相關(guān)。同時(shí)我們的研究也表明過表達(dá)miR-137可以在體外有效抑制腎癌細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移能力,在體內(nèi)抑制腫瘤增長。PIK3R3被證明作為miR-137的靶點(diǎn),抑制該基因表達(dá)能夠抑制腎癌細(xì)胞的侵襲及遷移能力,過表達(dá)該基因能夠反轉(zhuǎn)miR-137對腎癌細(xì)胞侵襲及遷移抑制作用。這些研究表明對于腎癌治療miR-137是一個(gè)有潛力的治療靶標(biāo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1748576