本文選題：食管鱗癌 + RNF113A　； 參考：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：目的:探討環(huán)指蛋白113A(RNF113A)基因參與食管癌細胞凋亡、增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)行為的影響及在食管癌中的作用;通過分析哈族食管鱗癌組織中RNF113A表達水平與食管癌臨床惡性表型間的關(guān)系,為新疆哈薩克族食管癌臨床早期診斷及個體化治療奠定理論基礎(chǔ)。方法:1)采用免疫組織化學(xué)法在組織水平檢測117例哈薩克族食管鱗癌組織及配對癌旁正常食管組織中RNF113A的表達,及RNF113A的表達與p53表達的關(guān)系;實時熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測41例哈族食管鱗癌組織及配對癌旁正常食管組織RNF113A的mRNA表達情況。分析RNF113A的表達與各臨床病理參數(shù)(患者年齡、性別、分化程度、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織類型、腫瘤部位)的關(guān)系。分析RNF113A的表達與哈薩克族食管鱗癌預(yù)后的相關(guān)性;2)針對RNF113A的cDNA序列,我們合成了小干擾RNA(siRNA)和真核過表達載體,并轉(zhuǎn)染食管鱗狀細胞癌(ESCC)細胞系;運用qRT-PCR技術(shù)和western-blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染干擾和過表達載體后RNF113A表達水平的變化;運用流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡;運用Transwell實驗和細胞劃痕實驗檢測RNF113A干擾和過表達后對ESCC細胞系遷移的變化,運用Transwell實驗檢測RNF113A干擾或過表達后ESCC細胞系侵襲的變化;3)構(gòu)建了RNF113A慢病毒干擾載體,轉(zhuǎn)染Eca109細胞,建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RNF113A敲低的Eca109細胞系。分別將轉(zhuǎn)染有sh-scramble及sh-RNF113A細胞及正常培養(yǎng)的Eca109細胞接種于裸鼠皮下,構(gòu)建Eca109細胞裸鼠皮下荷瘤模型,每周稱重1次,并觀察瘤塊的生長情況。瘤塊長出后,用游標(biāo)卡尺測量裸鼠瘤塊長徑(A)及垂直橫徑(B),按公式V=A×B2/2計算裸鼠腫瘤體積,并繪制腫瘤體積增長曲線及體質(zhì)量曲線。處死后采用qRT-PCR和免疫組織化學(xué)法檢測裸鼠瘤塊組織中RNF113A的表達。結(jié)果:第一部分:免疫組織化學(xué)檢測RNF113A蛋白表達情況。在117哈族ESCC組織中,74例(63.25%)RNF113A呈陽性表達,RNF113A在哈薩克族食管鱗癌組織中呈現(xiàn)高表達,明顯高于配對癌旁正常食管組織(P=0.000)。RNF113A和p53的表達在哈族食管鱗癌組織呈顯著正相關(guān)(P=0.035)。qRT-PCR檢測41例哈族食管鱗癌組織及配對癌旁正常食管組織RNF113A的mRNA表達情況,癌組織中表達量是癌旁正常組織中表達量均值的2倍。哈族食管癌組織中RNF113A表達與臨床病理指標(biāo)間的相關(guān)性分析顯示,分化程度(P=0.008)和T分期(P=0.000)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.017)與RNF113A表達顯著相關(guān),而RNF113A表達與性別、年齡、組織類型、腫瘤部位之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Kaplan Meier的生存曲線表明,RNF113A陰性表達的食管癌患者比RNF113A陽性表達的患者生存期長。采用Cox比例風(fēng)險單因素分析表明RNF113A表達和T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響哈族ESCC的預(yù)后因素。多因素分析表明RNF113A表達、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是哈薩克族食管癌患者總生存率的獨立危險因素。第二部分:在體外ESCC細胞水平,沉默RNF113A基因后,G0/G1期細胞數(shù)顯著增加,S期細胞數(shù)顯著減少,G2/M期細胞顯著減少,抑制增殖;過表達RNF113A基因后,G0/G1期細胞數(shù)顯著減少,S期細胞數(shù)變化不明顯,G2/M期細胞顯著增加,促進增殖。RNF113A siRNA轉(zhuǎn)染Eca109及EC9706細胞后細胞凋亡率顯著上升;RNF113A過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,各組間細胞凋亡率無差異。干擾RNF113A能抑制Eca109、EC9706細胞的遷移和侵襲能力;過表達RNF113A能顯著促進ESCC細胞的遷移和侵襲能力。第三部分:通過人食管癌Eca109細胞株裸鼠移植瘤動物模型的成功建立,結(jié)果顯示sh-RNF113A組裸鼠的瘤塊體積及重量都比對照組小,說明干擾RNF113A的表達后減緩了裸鼠的成瘤能力。sh-RNF113A組裸鼠瘤塊組織中RNF113A的蛋白和mRNA表達明顯降低,提示RNF113A能提高食管癌細胞的生長能力,促進腫瘤細胞生長。結(jié)論:RNF113A在哈薩克族食管鱗癌中高表達,RNF113A表達與分化程度、T分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后顯著相關(guān)。RNF113A能抑制食管鱗癌細凋亡,影響細胞周期,促進增殖、遷移和侵襲。在裸鼠荷瘤的動物水平,RNF113A在體內(nèi)能夠促進腫瘤生長,發(fā)揮著癌基因的作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the relationship between the expression of RNF113A and the expression of RNF113A in esophageal squamous cell carcinoma . The results showed that RNF113A could inhibit the proliferation , proliferation , migration and invasion of Eca109 and EC9706 cells . The results showed that RNF113A could inhibit the proliferation , migration and invasion of Eca109 and EC9706 cells .

【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.1

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本文編號：1747177