本文選題：胃癌　切入點(diǎn)：阿霉素　出處：《華中科技大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：第一部分抑制EZH2表達(dá)對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞衰老的影響及相關(guān)機(jī)制 目的： 檢測(cè)阿霉素對(duì)胃癌細(xì)胞系的衰老誘導(dǎo)作用,及抑制EZH2表達(dá)對(duì)該作用的影響,并探討相關(guān)機(jī)制。 方法： 使用阿霉素誘導(dǎo)AGS和MKN28兩種胃癌細(xì)胞系衰老,采用SA-β-gal染色、：DAPI染色、流式周期檢測(cè)方法檢測(cè)衰老誘導(dǎo)效果。觀察siRNA或特異性EZH2抑制劑EGCG聯(lián)合阿霉素的作用對(duì)胃癌細(xì)胞的影響。使用Western-blot檢測(cè)p53/p21通路活化程度。 結(jié)果： 阿霉素能夠有效誘導(dǎo)AGS和MKN28兩種胃癌細(xì)胞系衰老,從而抑制胃癌細(xì)胞增殖。沉默EZH2能夠促進(jìn)阿霉素對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用,但就其機(jī)制而言,p53野生型與突變型細(xì)胞涉及的機(jī)制不同。對(duì)p53突變型胃癌細(xì)胞MKN28,抑制EZH2在誘導(dǎo)衰老及促進(jìn)凋亡兩方面均與阿霉素存在協(xié)同作用,但對(duì)于p53野生型胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS無(wú)此協(xié)同作用。 結(jié)論： 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明阿霉素能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞衰老。并揭示了EZH2與阿霉素聯(lián)合使用對(duì)胃癌細(xì)胞衰老和凋亡進(jìn)程的影響與細(xì)胞p53背景密切相關(guān)。 第二部分抑制EZH2表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞系的衰老誘導(dǎo)機(jī)制 目的： 研究抑制EZH2表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞系MKN28、SGC-7901中INK4/ARF位點(diǎn)的影響,從而探索衰老誘導(dǎo)機(jī)制。 方法： 采用MTT、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)shRNA-EZH2通過抑制EZH2表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響。SA-β-gal染色、流式周期檢測(cè)方法檢測(cè)細(xì)胞衰老情況。通過Western blot及ChIP驗(yàn)證抑制EZH2表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞系MKN28、SGC-7901中INK4/ARF位點(diǎn)的影響,從而探索衰老誘導(dǎo)機(jī)制。 結(jié)果： shRNA-EZH2能夠有效抑制EZH2及其下游產(chǎn)物H3K27me3的表達(dá),并能抑制對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖及克隆形成能力。對(duì)于p21、p16均不表達(dá)的MKN28細(xì)胞系,抑制p15表達(dá)能夠阻礙shRNA-EZH2的衰老誘導(dǎo)作用。最后,通過Western blot及ChIP驗(yàn)證EZH2可通過表觀遺傳學(xué)途徑影響INK4/ARF位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄,從而調(diào)控周期影響衰老。 結(jié)論： 揭示了EZH2在調(diào)控INK4/ARF位點(diǎn)表達(dá)及誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞衰老中的重要作用,為以原癌基因EZH2為靶點(diǎn)的腫瘤治療策略的應(yīng)用奠定了一定理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:The first part: inhibition of EZH2 expression on adriamycin-induced senescence of gastric cancer cells and its related mechanismsObjective:To detect the senescence induction of adriamycin on gastric cancer cell line and the effect of inhibiting the expression of EZH2 on this effect, and to explore the related mechanism.Methods:Adriamycin was used to induce senescence of AGS and MKN28 gastric cancer cell lines. SA- 尾 -gal staining was used to detect the senescence induction of gastric cancer cell lines.To observe the effect of siRNA or specific EZH2 inhibitor EGCG combined with adriamycin on gastric cancer cells.The activation of p53/p21 pathway was detected by Western-blot.Results:Adriamycin can effectively induce senescence of AGS and MKN28 gastric cancer cell lines and inhibit the proliferation of gastric cancer cells.Silencing EZH2 can promote the proliferation inhibition of adriamycin, but the mechanisms involved in p53 wild type and mutant type cells are different.On p53 mutant gastric cancer cell line MKN28, inhibition of EZH2 has synergistic effect with doxorubicin on inducing senescence and promoting apoptosis, but it has no synergistic effect on p53 wild-type gastric cancer cell line AGS.Conclusion:The results showed that adriamycin could promote the aging of gastric cancer cells.The effects of EZH2 combined with adriamycin on the senescence and apoptosis of gastric cancer cells were closely related to the background of p53.The second part of the mechanism of senescence induced by inhibition of EZH2 expression in gastric cancer cell lineObjective:To investigate the effect of inhibition of EZH2 expression on the INK4/ARF site in gastric cancer cell line MKN28 SGC-7901, and to explore the mechanism of senescence induction.Methods:MTT, cell proliferation and clone formation assay were used to detect the effect of shRNA-EZH2 on the proliferation of gastric cancer cells by inhibiting the expression of EZH2. SA- 尾 -gal staining and flow cytometry were used to detect the senescence of gastric cancer cells.The inhibition of EZH2 expression in gastric cancer cell line MKN28SGC-7901 was verified by Western blot and ChIP to explore the mechanism of senescence induction.Results:ShRNA-EZH2 can effectively inhibit the expression of EZH2 and its downstream product H3K27me3, and inhibit the proliferation and clone formation of gastric cancer cells.Inhibition of p15 expression in MKN28 cell lines without p21 p16 expression could inhibit the senescence induction of shRNA-EZH2.Finally, Western blot and ChIP showed that EZH2 could affect the transcription of INK4/ARF site through epigenetic pathway, thus regulating the cycle of senescence.Conclusion:This study revealed the important role of EZH2 in regulating the expression of INK4/ARF sites and inducing the senescence of gastric cancer cells, which laid a theoretical foundation for the application of tumor therapy strategies targeting proto-oncogene EZH2.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1726625