本文選題：胃癌　切入點：阿霉素　出處：《華中科技大學》2015年博士論文

【摘要】：第一部分抑制EZH2表達對阿霉素誘導的胃癌細胞衰老的影響及相關機制 目的： 檢測阿霉素對胃癌細胞系的衰老誘導作用,及抑制EZH2表達對該作用的影響,并探討相關機制。 方法： 使用阿霉素誘導AGS和MKN28兩種胃癌細胞系衰老,采用SA-β-gal染色、：DAPI染色、流式周期檢測方法檢測衰老誘導效果。觀察siRNA或特異性EZH2抑制劑EGCG聯(lián)合阿霉素的作用對胃癌細胞的影響。使用Western-blot檢測p53/p21通路活化程度。 結(jié)果： 阿霉素能夠有效誘導AGS和MKN28兩種胃癌細胞系衰老,從而抑制胃癌細胞增殖。沉默EZH2能夠促進阿霉素對細胞的增殖抑制作用,但就其機制而言,p53野生型與突變型細胞涉及的機制不同。對p53突變型胃癌細胞MKN28,抑制EZH2在誘導衰老及促進凋亡兩方面均與阿霉素存在協(xié)同作用,但對于p53野生型胃癌細胞系AGS無此協(xié)同作用。 結(jié)論： 實驗結(jié)果表明阿霉素能夠促進胃癌細胞衰老。并揭示了EZH2與阿霉素聯(lián)合使用對胃癌細胞衰老和凋亡進程的影響與細胞p53背景密切相關。 第二部分抑制EZH2表達對胃癌細胞系的衰老誘導機制 目的： 研究抑制EZH2表達對胃癌細胞系MKN28、SGC-7901中INK4/ARF位點的影響,從而探索衰老誘導機制。 方法： 采用MTT、細胞增殖實驗及克隆形成實驗檢測shRNA-EZH2通過抑制EZH2表達對胃癌細胞增殖的影響。SA-β-gal染色、流式周期檢測方法檢測細胞衰老情況。通過Western blot及ChIP驗證抑制EZH2表達對胃癌細胞系MKN28、SGC-7901中INK4/ARF位點的影響,從而探索衰老誘導機制。 結(jié)果： shRNA-EZH2能夠有效抑制EZH2及其下游產(chǎn)物H3K27me3的表達,并能抑制對胃癌細胞的增殖及克隆形成能力。對于p21、p16均不表達的MKN28細胞系,抑制p15表達能夠阻礙shRNA-EZH2的衰老誘導作用。最后,通過Western blot及ChIP驗證EZH2可通過表觀遺傳學途徑影響INK4/ARF位點的轉(zhuǎn)錄,從而調(diào)控周期影響衰老。 結(jié)論： 揭示了EZH2在調(diào)控INK4/ARF位點表達及誘導胃癌細胞衰老中的重要作用,為以原癌基因EZH2為靶點的腫瘤治療策略的應用奠定了一定理論基礎。
[Abstract]:The first part: inhibition of EZH2 expression on adriamycin-induced senescence of gastric cancer cells and its related mechanismsObjective:To detect the senescence induction of adriamycin on gastric cancer cell line and the effect of inhibiting the expression of EZH2 on this effect, and to explore the related mechanism.Methods:Adriamycin was used to induce senescence of AGS and MKN28 gastric cancer cell lines. SA- 尾 -gal staining was used to detect the senescence induction of gastric cancer cell lines.To observe the effect of siRNA or specific EZH2 inhibitor EGCG combined with adriamycin on gastric cancer cells.The activation of p53/p21 pathway was detected by Western-blot.Results:Adriamycin can effectively induce senescence of AGS and MKN28 gastric cancer cell lines and inhibit the proliferation of gastric cancer cells.Silencing EZH2 can promote the proliferation inhibition of adriamycin, but the mechanisms involved in p53 wild type and mutant type cells are different.On p53 mutant gastric cancer cell line MKN28, inhibition of EZH2 has synergistic effect with doxorubicin on inducing senescence and promoting apoptosis, but it has no synergistic effect on p53 wild-type gastric cancer cell line AGS.Conclusion:The results showed that adriamycin could promote the aging of gastric cancer cells.The effects of EZH2 combined with adriamycin on the senescence and apoptosis of gastric cancer cells were closely related to the background of p53.The second part of the mechanism of senescence induced by inhibition of EZH2 expression in gastric cancer cell lineObjective:To investigate the effect of inhibition of EZH2 expression on the INK4/ARF site in gastric cancer cell line MKN28 SGC-7901, and to explore the mechanism of senescence induction.Methods:MTT, cell proliferation and clone formation assay were used to detect the effect of shRNA-EZH2 on the proliferation of gastric cancer cells by inhibiting the expression of EZH2. SA- 尾 -gal staining and flow cytometry were used to detect the senescence of gastric cancer cells.The inhibition of EZH2 expression in gastric cancer cell line MKN28SGC-7901 was verified by Western blot and ChIP to explore the mechanism of senescence induction.Results:ShRNA-EZH2 can effectively inhibit the expression of EZH2 and its downstream product H3K27me3, and inhibit the proliferation and clone formation of gastric cancer cells.Inhibition of p15 expression in MKN28 cell lines without p21 p16 expression could inhibit the senescence induction of shRNA-EZH2.Finally, Western blot and ChIP showed that EZH2 could affect the transcription of INK4/ARF site through epigenetic pathway, thus regulating the cycle of senescence.Conclusion:This study revealed the important role of EZH2 in regulating the expression of INK4/ARF sites and inducing the senescence of gastric cancer cells, which laid a theoretical foundation for the application of tumor therapy strategies targeting proto-oncogene EZH2.
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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本文編號：1726625