本文選題：TRIB3　切入點(diǎn)：腎透明細(xì)胞癌　出處：《暨南大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景和意義腎細(xì)胞癌約占所有成人惡性腫瘤的2%~3%,其中腎透明細(xì)胞癌(Clear-cell renal cell carcinoma,ccRCC)最常見且惡性程度最高。目前,手術(shù)仍是局限性腎癌的首選治療方案。免疫治療與分子靶向藥物治療效果不明顯。腎癌的發(fā)病機(jī)制仍不清楚,臨床亟需療效確切的靶向治療藥物,而對于新型基因的研究仍是較好的切入點(diǎn)。Tribbles(TRIBs)假激酶是細(xì)胞周期、分化、新陳代謝、增殖和細(xì)胞應(yīng)激的基本調(diào)節(jié)因子。其包括3個成員:TRIB1、TRIB2和TRIB3。研究顯示TRIBs極可能與腫瘤發(fā)生和致瘤性轉(zhuǎn)化相關(guān),研究其在腫瘤中的角色及機(jī)制,可能為腫瘤的診治提供新思路。方法本研究首先通過轉(zhuǎn)錄組測序分析TRIB家族基因在ccRCC組織中的表達(dá),并通過提取TCGA數(shù)據(jù)庫中ccRCC患者RNA-seq數(shù)據(jù)進(jìn)行分析驗(yàn)證,并進(jìn)一步探討TRIB家族基因mRNA表達(dá)與患者臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。通過qRT-PCR、western-blot和免疫組織化學(xué)檢測TRIB3在ccRCC中的表達(dá),在腎癌細(xì)胞株(769-P細(xì)胞系)基礎(chǔ)上應(yīng)用si RNA技術(shù)沉默TRIB3基因,隨后通過CCK-8、transwell遷移和侵襲、流式細(xì)胞術(shù)、RNA-seq等實(shí)驗(yàn),探討TRIB3基因在ccRCC中的功能及機(jī)制。Target Scan預(yù)測可能靶向調(diào)控TRIB3基因的miRNA,GEO Data Sets ncRNA芯片數(shù)據(jù)分析其在ccRCC中表達(dá),熒光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)探討其與TRIB3基因的靶向作用關(guān)系。結(jié)果1.34對配對ccRCC及癌旁組織RNA-seq結(jié)果顯示癌組織中TRIB2和TRIB3 mRNA表達(dá)顯著上調(diào),TRIB1 mRNA表達(dá)無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。2.TCGA 72對配對ccRCC及癌旁組織RNA-seq結(jié)果顯示癌組織中TRIB1 mRNA表達(dá)顯著下調(diào),TRIB3 mRNA表達(dá)顯著上調(diào),TRIB2 mRNA表達(dá)無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。并在TCGA524例腎細(xì)胞癌組織及72例癌旁組織對結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。3.524例ccRCCRNA-seq結(jié)果分析顯示TRIB1 mRNA表達(dá)與患者p T分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分期及個體帶瘤情況顯著相關(guān)。TRIB2 mRNA表達(dá)與患者性別、Fuhrman分級、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分期及個體帶瘤情況顯著相關(guān)。TRIB3 mRNA表達(dá)與患者性別、pT分期、Fuhrman分級、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分期、生存情況及個體目前帶瘤情況顯著相關(guān)。4.生存分析顯示TRIB1和TRIB2 mRNA表達(dá)無明顯預(yù)后診斷價值;TRIB3 mRNA高表達(dá)與ccRCC患者短的生存時間顯著相關(guān),低表達(dá)組平均生存時間86.42±3.49,高表達(dá)組平均生存時間55.80±2.38月。cox回歸分析結(jié)果顯示年齡≥60歲、缺乏新輔助治療、高的Fuhrman分級、病理分期、個體帶瘤情況及TRIB3 mRNA高表達(dá)為影響患者預(yù)后的風(fēng)險因素。5.qRT-PCR及western-blot對配對臨床樣本檢測顯示ccRCC中TRIB3 mRNA和蛋白表達(dá)均顯著高于癌旁組織。ccRCC免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示ccRCC組織中TRIB3蛋白表達(dá)于細(xì)胞核。6.qRT-PCR及western-blot檢測顯示TRIB3 mRNA及蛋白表達(dá)在腎癌A498、ACHN、Caki-1、Caki-2、769P細(xì)胞株中均顯著高于正常人腎近端小管上皮細(xì)胞株HK-2。7.CCK-8、Transwell檢測顯示腎癌細(xì)胞株中沉默TRIB3顯著抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。8.western-blot和流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示沉默TRIB3使促凋亡蛋白PARP、caspase-9和Bax表達(dá)上調(diào),而抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)則下調(diào),細(xì)胞凋亡率顯著上調(diào)。9.RNA-seq結(jié)果顯示沉默TRIB3基因后,543個基因表達(dá)有顯著差異,其中195個基因表達(dá)上調(diào),348個基因表達(dá)下調(diào)。KEGG pathway分析富集評分排在前5的分別是TNF信號通路,NF-κB信號通路,腫瘤micro RNAs,細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互關(guān)聯(lián)通路和細(xì)胞凋亡通路。10.GEO Data Sets提取ncRNA芯片數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示miR-124-3p在ccRCC組織中表達(dá)較癌旁組織顯著下調(diào)。11.293T細(xì)胞中過表達(dá)miR-124-3p可以使TRIB3蛋白表達(dá)顯著下調(diào),而抑制miR-124-3p則使TRIB3蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。雙熒光素酶報告基因結(jié)果顯示野生型TRIB3 3′UTR共轉(zhuǎn)染組過表達(dá)miR-124-3p顯著抑制了熒光素酶活性,抑制miR-124-3p表達(dá)熒光素酶活性顯著升高;突變型TRIB3 3′UTR共轉(zhuǎn)染組結(jié)合位點(diǎn)均為未顯示出明顯的熒光素酶活性改變,說明TRIB3是miR-124-3p的直接靶向基因。結(jié)論:1.TRIB3在ccRCC組織中表達(dá)穩(wěn)定上調(diào),且與腫瘤惡性進(jìn)程和不良預(yù)后顯著相關(guān)。TRIB3的高表達(dá)是ccRCC患者不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因子。2.沉默TRIB3基因表達(dá)可抑制腎癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,促進(jìn)腎癌細(xì)胞凋亡。3.TRIB3可能通過抑制細(xì)胞凋亡并激活TNF信號通路、NF-κB信號通路影響ccRCC進(jìn)程。4.miR-124-3p在ccRCC中顯著低表達(dá),其可能通過靶向調(diào)控TRIB3基因發(fā)揮抑癌作用。
[Abstract]:The expression of TRIB3 gene in ccRCC was studied by means of transcription group sequencing . The results showed that the expression of TRIB3 mRNA in ccRCC was not significant . The results showed that the expression of TRIB3 mRNA and protein in ccRCC was significantly lower than that of normal controls .

【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.11

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本文編號：1720165