本文選題：多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤　切入點(diǎn)：miR-874　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究目的和內(nèi)容:多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是一種常見的高度惡性的顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤。目前,臨床對于惡性膠質(zhì)瘤的治療主要是手術(shù)結(jié)合放療、化療及其他綜合治療。多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤呈浸潤性生長,手術(shù)很難完全切除,術(shù)后易復(fù)發(fā),且對化療和放療往往具有抗性,因而其預(yù)后很差,病人的平均生存期一般不超過兩年。替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)是一種DNA烷化劑,可使O6-甲基鳥嘌呤-DNA烷基轉(zhuǎn)移酶(一種DNA修復(fù)蛋白)失活。O6-甲基鳥嘌呤在下一個(gè)DNA復(fù)制循環(huán)中無法配對正確的堿基對,子鏈DNA形成缺口,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。研究表明,替莫唑胺能夠顯著改善膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后,已成為膠質(zhì)瘤化療的一線藥物。但是由于膠質(zhì)瘤存在于顱內(nèi),藥物需要穿透血腦屏障,以及現(xiàn)在抗癌藥物的耐藥性等不利因素,膠質(zhì)瘤的治療及預(yù)后并不是很理想。所以,進(jìn)一步探討膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制,找尋新的增強(qiáng)腫瘤化療敏感性的方法,是十分迫切的。Micro RNAs是一類長度約為21-23個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子,它們在膠質(zhì)瘤的癌變及發(fā)生發(fā)展過程中起到重要的調(diào)控作用。其主要是通過與靶基因的3’端非轉(zhuǎn)錄區(qū)域(3‘UTR)特異性結(jié)合。人類超過1/3的基因都可以被mi RNAs所靶定,這些mi RNAs在細(xì)胞凋亡、增殖、分化、生長和代謝中發(fā)揮著重要作用。Micro RNA-874(mi R-874)參與了人類許多的腫瘤調(diào)控過程。本課題組的前期實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)在人類膠質(zhì)瘤細(xì)胞中mi R-874表達(dá)量降低,并且在體外膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過表達(dá)mi R-874能夠抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖并且促進(jìn)凋亡。但是,調(diào)控mi R-874在膠質(zhì)瘤內(nèi)的表達(dá)是否能夠促進(jìn)膠質(zhì)瘤的化療增敏性,我們還不是很清楚。所以,在本實(shí)驗(yàn)中,我們著重研究上調(diào)mi R-874的表達(dá),對于替莫唑胺(TMZ)在多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤化療治療中敏感性的影響,并從分子水平探討其作用的機(jī)制。方法:1.細(xì)胞轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染效率的檢測:首先培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87和LN229,采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù),利用lipofectamine 2000將mi R-874模擬體(mimics)轉(zhuǎn)染至兩種膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)。用lipofectamine 2000將陰性對照序列scramble轉(zhuǎn)染至兩種膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)。2.實(shí)驗(yàn)分組及藥物處理:分為scramble,TMZ,mi R-874,mi R-874+TMZ治療組。上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中mi R-874的表達(dá),6小時(shí)后更換新鮮完全培養(yǎng)基,同時(shí)給予不同劑量替莫唑胺進(jìn)行作用,化療24小時(shí)、48小時(shí)。3.利用MTT方法檢測細(xì)胞增殖,Annexin V/PI流式染色檢測細(xì)胞凋亡,JC-1流式染色檢測線粒體膜電位變化情況,Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲、遷移情況,Western blotting檢測細(xì)胞STAT3、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax以及遷移侵襲相關(guān)蛋白MMPs的表達(dá)情況。結(jié)果:1.轉(zhuǎn)染mi R-874 mimics上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中mi R-874的表達(dá),給予替莫唑胺治療24、48小時(shí)后,MTT結(jié)果顯示相對于對照組,mi R-874聯(lián)合TMZ治療能夠明顯抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87和LN229的增殖活性,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);2.Annexin V/PI及線粒體膜電位流式分析發(fā)現(xiàn),相對于其他三組(scramble,TMZ,mi R-874),mi R-874聯(lián)合TMZ治療組的膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡最為明顯,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3.通過Transwell實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)mi R-874聯(lián)合TMZ組的膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移、侵襲能力明顯受到抑制,與對照組差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);4.Western Blotting結(jié)果顯示,mi R-874聯(lián)合TMZ組的p-STAT3/STAT3信號通路受到抑制,抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平降低,促凋亡蛋白Bax表達(dá)水平上調(diào),遷移侵襲相關(guān)蛋白MMP-2、MMP-9的表達(dá)水平降低,差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:MTT發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染mi R-874能夠明顯增強(qiáng)TMZ抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長活性的能力;Annexin V/PI及線粒體膜電位流式分析發(fā)現(xiàn),mi R-874聯(lián)合TMZ治療可以顯著增強(qiáng)替莫唑胺對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用,其機(jī)制可能與p-STAT3/STAT3信號通路受到明顯抑制,Bcl-2表達(dá)降低,Bax表達(dá)上調(diào),MMP-2、MMP-9表達(dá)降低有關(guān);Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染mi R-874能明顯抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移、侵襲能力。這些提示:惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞中mi R-874過表達(dá),通過調(diào)控p-STAT3/STAT3通路增強(qiáng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對TMZ的化療敏感性,兩者在惡性膠質(zhì)瘤化療中有協(xié)同作用。通過闡明mi R-874在膠質(zhì)瘤細(xì)胞化療中的作用及其機(jī)制有助于對惡性腫瘤的耐藥進(jìn)一步深入的了解,同時(shí)也為腫瘤化療治療提供新的線索。
[Abstract]:The research purpose and content: glioblastoma multiforme is a common malignant primary intracranial tumor. At present, the clinical treatment for malignant glioma is mainly surgery combined with radiotherapy, chemotherapy and other comprehensive treatment. Glioblastoma multiforme infiltrative growth, it is difficult to completely surgical resection, surgery after recurrence, and often with resistance to chemotherapy and radiotherapy, the prognosis is very poor, the average survival time of patients is generally not more than two years. Temozolomide (Temozolomide, TMZ) is a DNA alkylating agent, can make O6- methylguanine -DNA alkyl transferase (a DNA repair protein) inactivation of.O6- methylguanine in the next DNA copy the correct base pair not matching cycle, DNA sub chain form a gap, eventually lead to apoptosis. The results show that temozolomide could significantly improve the prognosis of patients with glioma, glioma chemotherapy has become a Line drugs. But due to intracranial glioma in medicine, need to penetrate the blood-brain barrier and anticancer drug resistance now and other unfavorable factors, treatment and prognosis of glioma is not very satisfactory. Therefore, to further explore the pathogenesis of glioma, the method to find the tumor chemotherapy sensitivity enhancement, is very urgent.Micro RNAs is a kind of non encoding single stranded RNA molecules of about 21-23 nucleotides in length, they play an important role in the process of carcinogenesis and development of glioma. It is mainly through the target gene 3 'untranslated regions (3' UTR) specific binding to human 1/3 gene over mi RNAs can be targeted, these mi RNAs in apoptosis, proliferation, differentiation, and plays an important role in the growth and metabolism of.Micro RNA-874 (MI R-874) is involved in many human tumor regulation process. This lesson early problem sets The study also found that the decrease of MI R-874 expression in human glioma cells and glioma cells in vitro, overexpression of MI in R-874 can inhibit the proliferation of glioma cells and promote apoptosis. However, whether the regulation of MI expression in R-874 glioma can promote glioma chemotherapy sensitization, we are not very sure. So, in this paper, we mainly study the upregulation of MI R-874 expression, for temozolomide (TMZ) sensitivity in glioblastoma chemotherapy, and to explore its mechanism at molecular level. Methods: to detect 1. cell transfection and transfection efficiency: first training U87 and the LN229 glioma cell line by transfection technique, using Lipofectamine 2000 mi R-874 model (mimics) was transfected into two glioma cells by Lipofectamine 2000. The negative control sequence were transfected by scramble two Glioma cell.2. in experimental groups and drug treatment: scramble, TMZ, MI, R-874, MI, R-874+TMZ group. Expression of glioma cells in MI R-874, 6 hours after the replacement of fresh complete medium, and given different doses of temozolomide chemotherapy effect, 24 hours, 48 hours by.3. MTT cell proliferation detection method, Annexin V/PI flow cytometry staining to detect cell apoptosis, JC-1 flow cytometry staining was used to detect the changes of mitochondrial membrane potential, Transwell assay, cell invasion, migration, Western blotting detection of cell STAT3, apoptosis related protein Bcl-2, Bax expression and invasion related protein MMPs. Results: the expression of 1. gene mi R-874 mimics mi R-874 up-regulated in glioma cells, given temozolomide therapy after 24,48 hours, MTT results showed that compared with the control group, MI R-874 combined with TMZ therapy can significantly inhibit glioma cells U87 and LN229 proliferation activity, with significant difference (P0.05); V/PI and mitochondrial membrane potential of 2.Annexin flow cytometry analysis showed that compared with other three groups (scramble, TMZ, MI, R-874) apoptosis of glioma cells combined with TMZ treatment group mi R-874 was the most obvious, significant difference was statistically significant (P0.05) 3.; through the Transwell experiment we found that the migration of MI R-874 combined with TMZ group of glioma cells, the invasion ability was significantly inhibited, and the control group with significant difference (P0.05); 4.Western Blotting showed that p-STAT3/STAT3 signaling pathway mi R-874 combined with TMZ group was inhibited, the anti apoptotic protein Bcl-2 expression level decreased, apoptosis Bax protein expression level increased, the migration and invasion related protein MMP-2, MMP-9 expression level was decreased, the difference was statistically significant (P0.05). Conclusion: MTT R-874 can increase the transfection of MI found Strong ability to inhibit the growth of glioma cells TMZ activity; V/PI and mitochondrial membrane potential of Annexin flow cytometry analysis showed that MI R-874 combined with TMZ therapy can significantly enhance temozolomide on apoptosis of malignant glioma cells induced by hypoxia and its mechanism may be related to p-STAT3/STAT3 signaling pathway was inhibited, Bcl-2 expression decreased, increased expression of Bax MMP-2 the expression of MMP-9, decrease; Transwell experiments indicated that transfection of MI R-874 could significantly inhibit the migration of glioma cells invasion. These suggest that over expression of malignant glioma cells mi R-874 enhances chemosensitivity of glioma cells to TMZ by regulation of p-STAT3 /STAT3 pathway, both have synergistic effect in chemotherapy of malignant glioma through. Clarify mi R-874 in glioma cells in the chemotherapy effect and mechanism contributes to the resistance of malignant tumor and further in-depth understanding, but also for the treatment of cancer chemotherapy The therapy provides a new clue.

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 潘淑菊,張君仁,龐華,李學(xué)寨;紫外分光光度法測定替莫唑胺含量及光照穩(wěn)定性的研究[J];山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年03期

2 丁江華;;替莫唑胺一線治療原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤完全緩解1例及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];安徽醫(yī)藥;2011年12期

3 王永峰;;我和替莫唑胺二十年[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2013年04期

4 杜小莉;治療頑固性多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的新藥——替莫唑胺[J];中國藥學(xué)雜志;2000年02期

5 蔡霞 ,馮光玲 ,任業(yè)明;替莫唑胺的合成[J];山東醫(yī)藥工業(yè);2003年04期

6 熊曉鵬;孔琳;胡超蘇;;放射治療合并替莫唑胺治療多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的研究[J];中國神經(jīng)腫瘤雜志;2005年04期

7 韋敏;肖億;;替莫唑胺的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2006年12期

8 楊寧蓉;王琳;秦叔逵;;替莫唑胺治療原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性淋巴瘤1例[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2007年11期

9 曾毅;羅林;袁紅平;劉金成;;替莫唑胺同步放療治療非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移32例觀察[J];云南醫(yī)藥;2009年03期

10 潘浩;;新型烷化劑替莫唑胺的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J];中國醫(yī)院用藥評價(jià)與分析;2010年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 徐軍;周士振;朱玉方;陶榮杰;;替莫唑胺配合放療治療原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤的臨床研究[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 田新華;林曉寧;林錦超;魏峰;莊再旺;任磊;陳鍔;孫瑾;;替莫唑胺聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒的制備方法比較[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 李紅霞;黃佳;史衛(wèi)忠;趙志剛;;冰片作用下替莫唑胺在家兔體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究[A];2008年中國藥學(xué)會學(xué)術(shù)年會暨第八屆中國藥師周論文集[C];2008年

4 王新東;郎岳明;勵勇;徐將榮;高峰;李江;余建軍;;替莫唑胺治療腦膠質(zhì)瘤的臨床分析[A];2011年浙江省神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

5 孫濤;董瑩;張矛;;替莫唑胺聯(lián)合放射治療在非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移患者治療中的作用研究[A];第13屆全國肺癌學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2013年

6 田新華;林曉寧;林錦超;魏峰;莊再旺;任磊;陳鍔;孫瑾;;腦靶向載替莫唑胺聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

7 許建萍;張湘茹;李峻嶺;王宏羽;王燕;郝學(xué)志;石遠(yuǎn)凱;;替莫唑胺聯(lián)合伊立替康治療復(fù)發(fā)性非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的療效和毒副作用分析[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

8 宋諸臣;楊磊;魏金芝;叢智榮;彭春雷;;替莫唑胺聯(lián)合美羅華治療復(fù)發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤(附1例報(bào)告)[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

9 陳鵬;傅偉明;張宏;石鍵;;替莫唑胺治療術(shù)后殘留惡性腦膠質(zhì)瘤的療效[A];2009年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

10 孫爽;李鴻彬;;替莫唑胺對腦轉(zhuǎn)移腫瘤的治療研究報(bào)告[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前9條

1 徐道;抗腦瘤老藥替莫唑胺煥發(fā)生機(jī)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

2 ;替莫唑胺新適應(yīng)癥獲批[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

3 國訊;英國提示替莫唑胺的肝臟損害風(fēng)險(xiǎn)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2014年

4 劉民;替莫唑胺可長期治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

5 董江萍;FDA增加替莫唑胺的骨髓抑制警告[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

6 雷諾島;徹底擊斃毀滅性疾病[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2011年

7 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質(zhì)瘤新藥[N];中國醫(yī)藥報(bào);2011年

8 記者 匡遠(yuǎn)深;讓膠質(zhì)瘤干細(xì)胞不再“繁殖”[N];健康報(bào);2011年

9 張獻(xiàn)懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 邸輝;miR-874的過表達(dá)促進(jìn)多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤對替莫唑胺化療敏感性的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2017年

2 劉彥廷;長鏈非編碼RNA RP11-838N2.4通過miR-10a調(diào)控腦膠質(zhì)瘤替莫唑胺耐藥性的機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

3 樊天禹;膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中抑制EZH2的表達(dá)改善替莫唑胺化療敏感性的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

4 李曉明;人腦膠質(zhì)瘤中DEC1的表達(dá)對烷化劑替莫唑胺化療敏感性影響的分子機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

5 林靖;泛素連接酶Fbw7在人腦膠質(zhì)瘤增殖、侵襲、遷移以及對替莫唑胺敏感性中的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

6 亓旭晨;DNMT1介導(dǎo)miRNA-20a調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞替莫唑胺耐藥性的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

7 林洪;白藜蘆醇誘導(dǎo)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)替莫唑胺藥物敏感性作用的分子機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

8 宋振華;survivin在替莫唑胺誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及老化中的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

9 崔勇;RNA干擾AKT2對腦膠質(zhì)瘤替莫唑胺化療敏感性的影響及相關(guān)機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2014年

10 朱巍巍;替莫唑胺誘導(dǎo)的人腦膠質(zhì)瘤耐藥細(xì)胞株的建立及其繼發(fā)性耐藥相關(guān)基因的篩查[D];蘇州大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李亞輝;替莫唑胺同期全腦放療治療腦轉(zhuǎn)移瘤的療效觀察[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 趙亞超;雙硫侖增強(qiáng)垂體瘤細(xì)胞替莫唑胺化療敏感性的研究[D];河南科技大學(xué);2015年

3 孫浩;不同替莫唑胺用藥規(guī)律對膠質(zhì)瘤患者遠(yuǎn)期生存的影響:系統(tǒng)綜述和meta分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

4 郭珊珊;新烷化劑替莫唑胺酯抗腦膠質(zhì)瘤的作用及機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

5 梁會娟;紫杉醇增強(qiáng)替莫唑胺對膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞敏感性[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

6 趙海濤;替莫唑胺聯(lián)合全腦放療治療復(fù)發(fā)/難治性原發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤的臨床研究[D];濟(jì)南大學(xué);2015年

7 陳正新;c-Myc-miR-29c-REV3L信號通路在人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤替莫唑胺獲得性耐藥中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

8 高翔;放療聯(lián)合替莫唑胺治療惡性腦膠質(zhì)瘤的臨床療效分析[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

9 徐媛媛;紫杉醇—替莫唑胺共載納米復(fù)合溫敏凝膠系統(tǒng)對腦膠質(zhì)瘤的治療研究[D];上海交通大學(xué);2015年

10 趙倩茹;貝伐單抗聯(lián)合替莫唑胺治療復(fù)發(fā)惡性腦膠質(zhì)瘤的療效及安全性分析[D];鄭州大學(xué);2016年

，

本文編號：1719365