本文選題：miRNA-139-5p　切入點(diǎn)：ZEB1　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的：在世界范圍內(nèi),乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,也是女性最主要的死亡原因。MiRNA-139-5p已經(jīng)被證實(shí)能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,其具體的分子機(jī)制值得進(jìn)一步探索,且miRNA-139-5p對乳腺癌化療的影響仍然是研究空白。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究miRNA-139-5p對乳腺癌細(xì)胞多西他賽敏感性以及乳腺癌細(xì)胞遷移的影響,并探索其背后的分子機(jī)制。方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MCF-7/Doc和MDA-MB-231中miRNA-139-5p和ZEB1mRNA的表達(dá),采用蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測E盒結(jié)合鋅指蛋白1(ZEB1)蛋白的表達(dá)。轉(zhuǎn)染miRNA-139-5pmimic升高miRNA-139-5p,采用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞對多西他賽敏感性的變化,采用遷移實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移能力的變化。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)觀察miRNA-139-5p升高或降低后,ZEB1mRNA和蛋白的變化。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測乳腺癌和癌旁正常組織中miRNA-139-5p和ZEB1 mRNA的表達(dá),觀察兩者的相關(guān)性,以及與化療療效的相關(guān)性。提取TCGA數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù),分析miRNA-139-5p和臨床病理參數(shù)以及總生存的相關(guān)性。各實(shí)驗(yàn)至少獨(dú)立重復(fù)3次。計(jì)量數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS19.0軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,根據(jù)數(shù)據(jù)分布以及方差齊性選擇t檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn),以p0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：MiRNA-139-5p在MCF-7/Doc和MDA-MB-231細(xì)胞中表達(dá)較在MCF-7細(xì)胞中下降,ZEB1表達(dá)升高。升高miRNA-139-5p后,MCF-7和MCF-7/Doc細(xì)胞對多西他賽的敏感性增強(qiáng),MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞遷移能力減弱。升高或降低MCF-7細(xì)胞中miRNA-139-5p后,ZEB1的變化相反。沉默ZEB1后,MCF-7細(xì)胞對多西他賽的敏感性增強(qiáng),遷移減弱。用miRNA-139-5pinhibitor和ZEB1siRNA共轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞,siZEB1可以逆轉(zhuǎn)由inhibitor引起的多西他賽敏感性降低以及遷移增強(qiáng)。乳腺癌組織中的miRNA-139-5p、ZEB1 mRNA均較癌旁組織降低,化療有反應(yīng)和無反應(yīng)的乳腺癌組織中miRNA-139-5p的表達(dá)無明顯差別。對TCGA數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)分析顯示miRNA-139在乳腺癌尤其是基底細(xì)胞樣乳腺癌中表達(dá)降低,是基底細(xì)胞樣乳腺癌的不良預(yù)后因子。結(jié)論：MiRNA-139-5p通過靶向抑制ZEBl而增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對多西他賽的敏感性,并抑制其遷移。但是,miRNA-139-5p卻是基底細(xì)胞樣乳腺癌的不良預(yù)后因子。
[Abstract]:Objective: in the world, breast cancer is the most common malignant tumor in women and the leading cause of death in women. MiRNA-139-5p has been proved to inhibit the metastasis of breast cancer cells, and its specific molecular mechanism is worthy of further exploration.And the effect of miRNA-139-5p on breast cancer chemotherapy is still blank.The purpose of this study was to investigate the effect of miRNA-139-5p on the sensitivity of breast cancer cells to docetaxel and the migration of breast cancer cells and to explore the molecular mechanism behind it.Methods: the expression of miRNA-139-5p and ZEB1mRNA in breast cancer cell line MCF-7 / 7 / Doc and MDA-MB-231 was detected by real-time fluorescence quantitative PCR, and the expression of E-box binding zinc finger protein (ZEB1) was detected by Western blot.Transfection of miRNA-139-5pmimic increased miRNA-139-5 p.The cytotoxicity test was used to observe the sensitivity of cells to docetaxel, the migration test and scratch test were used to observe the change of cell migration ability.Real time fluorescence quantitative PCR and Western blot were used to observe the changes of ZEB1 mRNA and protein after the increase or decrease of miRNA-139-5p.The expression of miRNA-139-5p and ZEB1 mRNA in breast cancer and adjacent normal tissues were detected by real-time fluorescence quantitative PCR.The data from TCGA database were extracted and the correlation between miRNA-139-5p and clinicopathological parameters and total survival was analyzed.Each experiment was repeated at least 3 times independently.The measurement data are expressed as mean 鹵standard deviation, and the experimental results are analyzed by SPSS19.0 software. According to the data distribution and the homogeneity of variance, t test or non-parameter test are selected.Results the expression of 1% MiRNA-139-5p in MCF-7/Doc and MDA-MB-231 cells was higher than that in MCF-7 cells.The sensitivity of MCF-7 and MCF-7/Doc cells to docetaxel increased after miRNA-139-5p. The migration ability of MCF-7 and MDA-MB-231 cells decreased.The changes of ZEB1 in MCF-7 cells were reversed after miRNA-139-5p was increased or decreased.The sensitivity of MCF-7 cells to docetaxel was enhanced and migration decreased after ZEB1 silencing.Cotransfection of MCF-7 cells with miRNA-139-5pinhibitor and ZEB1siRNA could reverse the decrease in docetaxel sensitivity induced by inhibitor and increase migration.The expression of miRNA-139-5 pAg-ZEB1 mRNA in breast cancer tissues was lower than that in adjacent tissues. There was no significant difference in the expression of miRNA-139-5p between chemotherapeutic and non-reactive breast cancer tissues.The analysis of data in TCGA database showed that the expression of miRNA-139 was decreased in breast cancer, especially in basal cell like breast cancer, which was a bad prognostic factor of basal cell like breast cancer.Conclusion: 1 MiRNA-139-5p enhances the sensitivity of breast cancer cells to docetaxel and inhibits their migration by targeting ZEBl.However, miRNA-139-5p is an adverse prognostic factor for basal cell like breast cancer.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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本文編號：1710587