本文選題：非小細(xì)胞肺癌　切入點：吉非替尼　出處：《浙江大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：吉非替尼是第一代以表皮生長因子受體(EGFR)為靶點的可逆性小分子酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI),對具有EGFR敏感突變的晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者有著極好的療效,能夠顯著延長患者生存時間,改善生活質(zhì)量。目前EGFR抑制劑已成為具有EGFR敏感突變的晚期NSCLC患者的一個標(biāo)準(zhǔn)治療。然而,幾乎所有初始治療敏感的患者最終仍不可避免的出現(xiàn)了耐藥,多項臨床研究顯示其治療的中位疾病進展時間(PFS)約為10個月。環(huán)孢素A(CsA)作為一個多藥耐藥(MDR)相關(guān)蛋白抑制劑,能夠逆轉(zhuǎn)多種化療藥物的耐藥。最新研究發(fā)現(xiàn)CsA還可以通過抑制活化T細(xì)胞核因子(NFAT)克服小分子靶向藥物的耐藥,如伊馬替尼,達沙替尼,selumetinib等。CsA能否增敏EGFR-TKI,并進一步克服耐藥尚未有報道。如何利用目前可以獲得的方法來逆轉(zhuǎn)EGFR-TKIs的耐藥值得進一步的探索。目的：通過體內(nèi)外實驗,探討環(huán)孢素A聯(lián)合吉非替尼對EGFR-TKI敏感及耐藥肺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。并深入分析CsA增敏并逆轉(zhuǎn)吉非替尼耐藥的機制。方法：選取初始吉非替尼敏感及耐藥肺癌細(xì)胞株,并通過持續(xù)吉非替尼處理建立獲得性耐藥細(xì)胞株；采用MTS方法分析CsA是否可以增加各類肺癌細(xì)胞株細(xì)胞對于吉非替尼的敏感性；運用流式細(xì)胞儀定量分析藥物處理后細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的改變；建立非小細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤模型評估CsA對吉非替尼在體內(nèi)的增敏作用；通過Western blot和免疫熒光分析CsA聯(lián)合吉非替尼處理后的NSCLC細(xì)胞中STAT3, Akt, Erk以及NFAT1等與藥物敏感性相關(guān)分子的激活情況；并通過siRNA的方法確認(rèn)下調(diào)STAT3或NFAT1后各組肺癌細(xì)胞對吉非替尼敏感性的變化。進一步收集經(jīng)EGFR-TKI治療的肺癌患者腫瘤樣本,分析腫瘤細(xì)胞中STAT3及其磷酸化水平與EGFR-TKI治療效果的關(guān)系。結(jié)果：在EGFR敏感突變、原發(fā)耐藥及獲得性耐藥的肺癌細(xì)胞株中,CsA均能提高吉非替尼的增殖抑制作用。進一步研究提示CsA可以增加吉非替尼誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,但未能影響吉非替尼對細(xì)胞周期的阻滯效果。吉非替尼可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞株STAT3的激活,獲得性耐藥細(xì)胞株中P-STAT3的水平明顯高于其親本細(xì)胞株。CsA可以明顯抑制STAT3的激活,減少Bcl-2的表達,從而增敏吉非替尼。為了證實STAT3是CsA增敏吉非替尼的關(guān)鍵分子,我們進一步用siRNA下調(diào)STAT3,結(jié)果發(fā)現(xiàn)STAT3的siRNA增敏效果與CsA類似,其可以促進吉非替尼的增殖抑制作用和增加細(xì)胞凋亡。而下調(diào)NFAT1未能實現(xiàn)增敏的效果。裸鼠移植瘤模型進一步證實CsA能夠增加吉非替尼對腫瘤生長的抑制作用。從給藥的第7天開始,CsA聯(lián)合吉非替尼組平均腫瘤體積較吉非替尼單藥組明顯縮小(p0.05)。聯(lián)合治療組腫瘤組織中P-STAT3和Bcl-2的表達均明顯低于吉非替尼單藥組。我們進一步分析了22例經(jīng)EGFR-TKI治療的患者臨床樣本,結(jié)果發(fā)現(xiàn)EGFR-TKI治療的效果與STAT3磷酸化水平密切相關(guān),P-STAT3高組治療的PFS顯著低于p-STAT3低組(p0.05)。結(jié)論：CsA可以增加肺癌細(xì)胞對于吉非替尼治療的敏感性,其增敏作用主要通過增加吉非替尼誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡來實現(xiàn)。機制研究發(fā)現(xiàn)吉非替尼誘導(dǎo)的反饋性STAT3激活與肺癌細(xì)胞的藥物敏感性及耐藥密切相關(guān),CsA通過抑制吉非替尼誘導(dǎo)的STAT3激活,下調(diào)Bcl-2的表達,從而增敏各類肺癌細(xì)胞。吉非替尼聯(lián)合CsA可以作為NSCLC治療的一種新的策略。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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本文編號：1690210