本文選題：鄰苯二甲酸-單-2-乙基己酯　切入點(diǎn)：四氯二苯并-對-二VA英　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:本研究旨在探討鄰苯二甲酸-單-2-乙基己酯(Mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)暴露、四氯二苯并-對-二VA英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)暴露、MEHP與TCDD共暴露對乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖、遷移和侵襲,以及對芳香烴受體(Aryl hydrocarbon receptor,AhR)信號通路的影響,以闡明MEHP與TCDD共暴露在乳腺癌發(fā)展過程中的作用及機(jī)制。方法:1.通過MTS檢測0.1μM~100μM的MEHP單獨(dú)暴露,1nM的TCDD單獨(dú)暴露,以及MEHP與TCDD共暴露6h、12h、24h、48h,對細(xì)胞增殖的影響,采用siRNA技術(shù)干擾AhR的表達(dá)后再次分析MEHP和TCDD暴露6h和48h對細(xì)胞增殖的影響。2.采用Transwell檢測1~100μM的MEHP單獨(dú)暴露,1nM的TCDD單獨(dú)暴露,以及MEHP與TCDD共暴露24h和48h,對MCF-7細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲的影響,并在siRNA干擾AhR后再次檢測MEHP和TCDD暴露48h對細(xì)胞遷移和侵襲。3.采用PCR-Array方法篩選100μM的MEHP單獨(dú)暴露,100nM的TCDD單獨(dú)暴露,以及MEHP與TCDD共暴露24h對腫瘤發(fā)展相關(guān)基因的影響。4.采用qRT-PCR實(shí)驗(yàn),Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測1μM~100μM的MEHP單獨(dú)暴露、1nM的TCDD單獨(dú)暴露、MEHP與TCDD共暴露24h對AhR、CYP1A1和CYP1B1基因和蛋白表達(dá)的影響;采用P450-Glo?Assays實(shí)驗(yàn)檢測1μM~100μM的MEHP單獨(dú)暴露、1nM的TCDD單獨(dú)暴露、MEHP與TCDD共暴露48h對CYP1A1和CYP1B1活性的影響;采用染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)探討100μM的MEHP單獨(dú)暴露、1nM和100nM的TCDD單獨(dú)暴露以及MEHP與TCDD共暴露對AhR與二VA英反應(yīng)原件(Dioxin-responsive element,DRE)結(jié)合的影響。結(jié)果:1.MEHP暴露6h和48h均可抑制細(xì)胞增殖,具體表現(xiàn)為MEHP 10μM、20μM和40μM暴露6h后可顯著抑制細(xì)胞增殖(所有P0.001),MEHP 1μM、10μM和20μm暴露48h可顯著抑制細(xì)胞增殖(p值分別為0.036,0.009和0.026),其他濃度暴露不影響細(xì)胞增殖;轉(zhuǎn)染sirna-ahr后并不能緩解mehp對細(xì)胞增殖的抑制作用,表明mehp抑制增殖作用不依賴ahr;2.tcdd單獨(dú)暴露不影響細(xì)胞增殖(p值分別為0.208,0.875,0.474和0.751)。mehp與tcdd共暴露6h和48h對細(xì)胞增殖的影響存在交互作用(p值分別為0.013和0.011),而共暴露12h和24h對細(xì)胞增殖無影響。mehp與tcdd共暴露后,細(xì)胞增殖能力顯著降低,表明mehp與tcdd共暴露可抑制細(xì)胞增殖;ahr干擾后并未緩解mehp與tcdd共暴露對細(xì)胞增殖的抑制作用,表明共暴露對細(xì)胞增殖的影響不依賴ahr;3.mehp暴露可促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲,表現(xiàn)為mehp1μm、10μm和100μm暴露24h均可顯著促進(jìn)細(xì)胞遷移(所有p≤0.001),mehp10μm和100μm暴露48h后細(xì)胞遷移能力顯著高于對照組(所有p0.001),mehp10μm和100μm暴露48h后細(xì)胞侵襲能力顯著高于mehp1μm(p值分別為0.028和0.003);轉(zhuǎn)染sirna-ahr后mehp100μm誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移作用減弱(p=0.010),但是轉(zhuǎn)染sirna-ahr不影響mehp100μm介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲(p=0.416),表明mehp介導(dǎo)的細(xì)胞遷移依賴ahr,而mehp介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲不依賴ahr;qrt-pcr結(jié)果表明,mehp暴露可增加mmp2,mmp9,vimentin的mrna水平,降低e-cadherin水平(p值分別為0.025,0.003,0.003和0.002);sirna干擾ahr后可抑制mehp介導(dǎo)的mmp2基因表達(dá)(p=0.044)。4.1nm的tcdd暴露24h和48h均可顯著促進(jìn)細(xì)胞遷移(所有p≤0.001);在細(xì)胞遷移上,mehp與tcdd之間存在拮抗性交互作用(p=0.001),而在細(xì)胞侵襲上無影響(p=0.056);sirna干擾ahr后可顯著抑制tcdd暴露誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移(p=0.001);sirna干擾ahr后,tcdd單獨(dú)暴露組mmp2、mmp9基因表達(dá)水平均顯著降低(p值分別為0.032和0.043),表明tcdd介導(dǎo)的mmp2和mmp9表達(dá)依賴ahr。5.pcr-array結(jié)果表明,mehp暴露可顯著上調(diào)23個基因表達(dá),下調(diào)8個基因表達(dá);tcdd暴露可顯著上調(diào)22個基因表達(dá),下調(diào)6個基因表達(dá)。在18個基因表達(dá)上,mehp可產(chǎn)生與tcdd相同的作用,包括14個上調(diào)的基因和4個下調(diào)的基因。在mmp14,pai1,plau,gpx1,pou5f1,cxcr4,jup,dll4和cyp1a1等9個基因上mehp與tcdd之間存在拮抗作用,在il1b,cdh5,nfe2l2,mtor和mapk14上mehp與tcdd共暴露存在協(xié)同作用。6.MEHP暴露6h、12h、24h和48h均可顯著增加AhR的表達(dá),同時顯著增加CYP1A1和CYP1B1的表達(dá),且AhR,CYP1A1,CYP1B1的mRNA水平隨MEHP濃度增加而增加(所有P≤0.001),隨暴露時間延長而增加(所有P≤0.001)。轉(zhuǎn)染siRNA-AhR后,MEHP誘導(dǎo)的CYP1A1與轉(zhuǎn)染siRNA-NC相比下降39.91%,CYP1B1下降43.28%;染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)果表明,MEHP暴露2h即可增加AhR與CYP1A1和CYP1B1調(diào)節(jié)區(qū)域的DRE結(jié)合,Luciferase報(bào)告基因結(jié)果顯示MEHP可顯著上調(diào)CYP1A1的啟動子活性,證明MEHP可通過上調(diào)AhR的表達(dá),并增加AhR的轉(zhuǎn)錄活性,進(jìn)而誘導(dǎo)CYP1A1和CYP1B1的表達(dá);7.MEHP與TCDD共暴露對AhR和CYP1A1基因表達(dá)存在拮抗性交互作用(P值分別為0.009和0.041),MEHP介導(dǎo)的AhR基因表達(dá)被TCDD抑制,同時TCDD介導(dǎo)的CYP1A1基因表達(dá)可被MEHP抑制;MEHP與TCDD共暴露對CYP1B1的表達(dá)交互作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.586);轉(zhuǎn)染siRNA-Ah R后,TCDD誘導(dǎo)的CYP1A1顯著降低,且MEHP對TCDD介導(dǎo)的CYP1A1表達(dá)的拮抗作用消失,表明TCDD與MEHP共暴露在CYP1A1的表達(dá)過程中的拮抗作用依賴AhR;染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)果表明,MEHP可拮抗性降低AhR與CYP1A1啟動子區(qū)域的DRE結(jié)合,由此拮抗TCDD介導(dǎo)的CYP1A1的表達(dá)。結(jié)論:1.MEHP具有AhR活性,可上調(diào)AhR的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄活性,是MEHP促進(jìn)MCF-7細(xì)胞遷移的作用機(jī)制之一。2.MEHP與TCDD共暴露可拮抗TCDD介導(dǎo)的AhR與DRE的結(jié)合,從而拮抗TCDD介導(dǎo)的CYP1A1的表達(dá)。3.MEHP與TCDD在MMP14,PAI1,PLAU,GPX1,POU5F1,CXCR4,JUP,DLL4的表達(dá)上具有拮抗作用,在IL1B,CDH5,NFE2L2,MTOR和MAPK14等5個基因表達(dá)上具有協(xié)同作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Charles D.Hebert;STUDY ON THE MECHANISM CELLULAR PROLIFERATION IN HUMAN SQUAMOUS CARCINOMA CELLS BY 2,3,7,8-TETRACHLORODIBENZO-P-DIOXIN(TCDD)[J];癌變.畸變.突變;1991年S1期

2 楊小芳,王沭沂;TCDD及其研究進(jìn)展[J];中國公共衛(wèi)生;2000年11期

3 ;In vitro Cytotoxicity of TCDD on SPC-A1 Cells[J];Biomedical and Environmental Sciences;2006年01期

4 ;氯化二惡英(TCDD)的毒性[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);1984年04期

5 曹群立,Chanles D.Helest;TCDD對人鱗癌細(xì)胞增生機(jī)制的研究[J];癌變.畸變.突變;1991年02期

6 鄒立海;;接觸TCDD工人的癌癥死亡率[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1992年03期

7 GUOYUMEI,WANGSHUYI,WANGXINRU,LASLEYBILL;Effect of TCDD on Maternal Toxicity and Chorionic Gonadotropin──Bioactivity in the Immediate Post-implantation Period of Macaque[J];Biomedical and Environmental Sciences;2000年01期

8 趙玉紅;吳麗霞;趙玉巖;郭磊;;TCDD誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞細(xì)胞凋亡的研究[J];沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年02期

9 黃莉;黃韌;馮媛瑜;劉寒英;丘劍峰;李冰;;2,3,7,8-四氯苯并二VA英(TCDD)短期染毒可造成著床前胚胎丟失并伴隨雌性生殖器官中毒物相關(guān)蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)[J];生態(tài)毒理學(xué)報(bào);2010年03期

10 郭玉梅,王沭沂,王心如;TCDD對獼猴妊娠期及其妊娠結(jié)局的毒性影響[J];中國公共衛(wèi)生;2000年11期

相關(guān)會議論文 前10條

1 許先進(jìn);Salvatore Cannistraro;Anna Rita Bizzarri;蘇計(jì)國;陳慰祖;王存新;;TCDD inhibition of the activity of CK2 through binding to the ATP-competitive binding site of the catalytic subunit:Insight from computational studies[A];第五屆全國生物信息學(xué)與系統(tǒng)生物學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2012年

2 Hiroki Teraoka;Koji Yamazaki;Yoshikazu Tsujimoto;Tomohiro Imagawa;JohnJ.Stegeman;Richard E.Peterson;Takeo Hiraga;;TCDD induces apoptosis through local circulation failure in midbrain of developing zebrafish[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

3 Hiroki Teraoka;Koji Yamazaki;Yoshikazu Tsujimoto;Tomohiro Imagawa;John J. Stegeman;Richard E. Peterson;Takeo Hiraga;;TCDD induces apoptosis through local circulation failure in midbrain of developing zebrafish[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會論文摘要集（第一部分）[C];2002年

4 ;Effect of Lactational Exposure to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin(TCDD)on Growth Development and CYP1A1 Expression of Lungs in Mice Offspring[A];節(jié)能環(huán)保 和諧發(fā)展——2007中國科協(xié)年會論文集（二）[C];2007年

5 尹海萍;徐建平;周顯青;;TCDD對小鼠神經(jīng)神經(jīng)內(nèi)分泌功能的影響及其維生素E的拮抗作用[A];2008年神經(jīng)內(nèi)分泌暨神經(jīng)免疫內(nèi)分泌學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2008年

6 馬靜;陳曦;劉亞男;陳京山;冷玲;湯乃軍;;宮內(nèi)TCDD暴露對成年大鼠血清性激素和睪丸核受體基因表達(dá)的影響[A];中國毒理學(xué)會第六屆全國毒理學(xué)大會論文摘要[C];2013年

7 Colin R Jefcoate;;TCDD and Wnt3a cooperatively disrupt C3H10T1/2 cell differentiation through restoration of cell adhesion[A];營養(yǎng)與慢性病——中國營養(yǎng)學(xué)會第七屆理事會青年工作委員會第一次學(xué)術(shù)交流會議論文集[C];2010年

8 李承浩;何葦;蒙田;石冰;;小鼠孕期胃飼維生素B6拮抗2,3,7,8,-TCDD誘導(dǎo)的腭裂的實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆全國唇腭裂學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

9 唐志;林樹海;鄧伶莉;胡傳芹;董繼揚(yáng);蔡宗葦;;TCDD擾亂小鼠肝臟中膽汁酸代謝通路的初步研究[A];第十七屆全國波譜學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2012年

10 袁秀平;徐盈;吳文忠;黎雯;劉建平;;2,3,7,8-TCDD對稀有(魚句)鯽肝臟超微結(jié)構(gòu)影響的研究[A];中國動物科學(xué)研究——中國動物學(xué)會第十四屆會員代表大會及中國動物學(xué)會65周年年會論文集[C];1999年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 馬靜;宮內(nèi)TCDD暴露對子代印記基因及空間學(xué)習(xí)記憶影響的跨代遺傳研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

2 冷玲;AhR在MEHP與TCDD共暴露致MCF-7細(xì)胞遷移的作用機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

3 黃莉;TCDD的早期妊娠毒性及其機(jī)理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2004年

4 王s，

本文編號：1684590