發(fā)布時間：2018-03-26 13:16

  本文選題：高保真DNA聚合酶　切入點：限制性內(nèi)切酶　出處：《蘇州大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的建立一種新型基因轉(zhuǎn)換系統(tǒng),用于檢測TP53基因(R175H)早期突變,為腫瘤的早期篩查提供依據(jù)。方法構(gòu)建TP53基因野生型DNA模板(含NarI酶切位點)和突變DNA模板。將TP53基因野生型基因片段與突變型基因片段按照野生:突變(W:T)=1:0,100:1,300:1,1000:1的比例混合,使用高保真DNA聚合酶進行PCR擴增,過程中不斷添加限制性內(nèi)切酶進行酶切消化,并對其產(chǎn)物進行PCR擴增后再行測序。結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示,純野生型基因片段的PCR產(chǎn)物可以被NarI限制性內(nèi)切酶酶切,而其余三種混合比例中因含有突變型基因片段,其PCR產(chǎn)物有不能被酶切的片段產(chǎn)生,使得突變型基因獲得了大量擴增,經(jīng)測序后亦證實上述結(jié)果。結(jié)論在高保真DNA聚合酶及低溫限制性內(nèi)切酶的基礎(chǔ)上,聯(lián)合特異性引物構(gòu)成的基因轉(zhuǎn)換系統(tǒng)檢測早期TP53基因(R175H)突變是可行的,這個基因轉(zhuǎn)換系統(tǒng)可能在基因早期篩查等方面具有較大的實際應(yīng)用價值。
[Abstract]:Objective to establish a novel gene transformation system for detecting the early mutation of TP53 gene r175H. Methods the wild type DNA template of TP53 gene (including NarI restriction site) and the mutant DNA template were constructed. The wild type gene fragment of TP53 gene and the mutant gene fragment were mixed according to the ratio of 1: 100: 100: 100: 1: 300: 11 000: 1 of TP53 gene. High fidelity DNA polymerase was used for PCR amplification. Restriction endonuclease was added in the process of digestion, and the products were amplified by PCR and sequenced. Results agarose gel electrophoresis showed that, The PCR products of pure wild-type gene fragments can be digested by NarI restriction endonuclease, but the other three kinds of mixed proportion contain mutant gene fragments, so the PCR products can not be digested, which makes the mutant genes obtain a lot of amplification. Conclusion on the basis of high fidelity DNA polymerase and low temperature restriction endonuclease, it is feasible to detect the early TP53 gene r175H mutation by a gene conversion system composed of specific primers. This gene conversion system may be of great practical value in early gene screening.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.43

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本文編號：1668006