本文選題：CD分子　切入點：抗體　出處：《生物技術(shù)》2017年02期

【摘要】：[目的]構(gòu)建較高親和力較低免疫原性的CD20抗體。[方法]通過專利分析,進(jìn)行高親和力和人源化的設(shè)計改造,將抗體的輕鏈和重鏈分別克隆到pc DNA3.1/ZEO(+)、pc DNA3.1(+)真核表達(dá)載體中,共轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細(xì)胞CHO-K1,通過RT-PCR檢測mRNA的轉(zhuǎn)錄,夾心ELISA檢測抗體表達(dá)量,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞上清與CD20陽性細(xì)胞Raji的結(jié)合活性。[結(jié)果]得到了高親和力的人源化CD20抗體的輕鏈和重鏈基因片段,并成功地構(gòu)建了重組表達(dá)載體pc DNA3.1/ZEO(+)-CD20L和pc DNA3.1(+)-CD20H,并可在CHO-K1細(xì)胞中表達(dá),通過RT-PCR證明基因在CHO細(xì)胞中成功表達(dá),ELISA法測得培養(yǎng)上清的含量在0.45~4.72μg/m L之間,流式檢測表明上清中的抗體可與Raji細(xì)胞結(jié)合。[結(jié)論]成功構(gòu)建并表達(dá)篩選了17株單克隆抗體,15號的表達(dá)量最大,為4.72μg/m L,為下一步研究抗體的親合力、免疫原性以及生物學(xué)功能打下基礎(chǔ)。
[Abstract]:[method] [CD20] to construct high affinity antibody with low immunogenicity through patent analysis, design of high affinity and humanization, light chain and heavy chain antibody were cloned into PC DNA3.1/ZEO (+), PC (+) DNA3.1 eukaryotic expression vector, transfection in China hamster ovary cells CHO-K1, RT-PCR transcription through the detection of mRNA expression of sandwich ELISA for detection of antibody activity. Results combined with flow cytometry in cell supernatant and CD20 Raji positive cells were light chain humanized CD20 antibody with high affinity and heavy chain gene fragment, and successfully constructed the recombinant expression vector PC DNA3.1/ZEO (+) -CD20L and PC (DNA3.1 + -CD20H), and can be expressed in CHO-K1 cells, proven by RT-PCR gene was successfully expressed in CHO cells, the content of ELISA was measured in the supernatant between 0.45~4.72 g/m L and flow cytometry showed that the antibody in the supernatant With Raji cell binding. Conclusion: the successful construction and expression screening of 17 strains of monoclonal antibody, the expression of No. 15, 4.72 g/m L, for the next step of antibody affinity, lay the foundation for immunogenicity and biological function.

【作者單位】： 聊城大學(xué)藥學(xué)院;利津縣中心醫(yī)院藥劑科;聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(“動物細(xì)胞大規(guī)模批次流加培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)及產(chǎn)品研發(fā)”,No.2012AA02A306)
【分類號】：R733.1

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本文編號：1659356