本文選題：CD分子　切入點：抗體　出處：《生物技術》2017年02期

【摘要】：[目的]構建較高親和力較低免疫原性的CD20抗體。[方法]通過專利分析,進行高親和力和人源化的設計改造,將抗體的輕鏈和重鏈分別克隆到pc DNA3.1/ZEO(+)、pc DNA3.1(+)真核表達載體中,共轉染中國倉鼠卵巢細胞CHO-K1,通過RT-PCR檢測mRNA的轉錄,夾心ELISA檢測抗體表達量,流式細胞術檢測細胞上清與CD20陽性細胞Raji的結合活性。[結果]得到了高親和力的人源化CD20抗體的輕鏈和重鏈基因片段,并成功地構建了重組表達載體pc DNA3.1/ZEO(+)-CD20L和pc DNA3.1(+)-CD20H,并可在CHO-K1細胞中表達,通過RT-PCR證明基因在CHO細胞中成功表達,ELISA法測得培養(yǎng)上清的含量在0.45~4.72μg/m L之間,流式檢測表明上清中的抗體可與Raji細胞結合。[結論]成功構建并表達篩選了17株單克隆抗體,15號的表達量最大,為4.72μg/m L,為下一步研究抗體的親合力、免疫原性以及生物學功能打下基礎。
[Abstract]:[method] [CD20] to construct high affinity antibody with low immunogenicity through patent analysis, design of high affinity and humanization, light chain and heavy chain antibody were cloned into PC DNA3.1/ZEO (+), PC (+) DNA3.1 eukaryotic expression vector, transfection in China hamster ovary cells CHO-K1, RT-PCR transcription through the detection of mRNA expression of sandwich ELISA for detection of antibody activity. Results combined with flow cytometry in cell supernatant and CD20 Raji positive cells were light chain humanized CD20 antibody with high affinity and heavy chain gene fragment, and successfully constructed the recombinant expression vector PC DNA3.1/ZEO (+) -CD20L and PC (DNA3.1 + -CD20H), and can be expressed in CHO-K1 cells, proven by RT-PCR gene was successfully expressed in CHO cells, the content of ELISA was measured in the supernatant between 0.45~4.72 g/m L and flow cytometry showed that the antibody in the supernatant With Raji cell binding. Conclusion: the successful construction and expression screening of 17 strains of monoclonal antibody, the expression of No. 15, 4.72 g/m L, for the next step of antibody affinity, lay the foundation for immunogenicity and biological function.

【作者單位】： 聊城大學藥學院;利津縣中心醫(yī)院藥劑科;聊城大學農(nóng)學院;
【基金】：國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(“動物細胞大規(guī)模批次流加培養(yǎng)關鍵技術及產(chǎn)品研發(fā)”,No.2012AA02A306)
【分類號】：R733.1

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 尹莉;;免疫原性和抑制原性決定簇在腫瘤細胞和各種類型的大分子上共存[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);1985年01期

2 蔣明方;;癌治療誘導的免疫抵抗性[J];日本醫(yī)學介紹;1989年02期

3 邱文宣;;腫瘤免疫療法—“免疫”核糖核酸[J];福建醫(yī)大;1977年02期

4 RogersVK;WuGY;李延青;高揚;;肝癌的免疫導向診治[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);1990年03期

5 張延軍;吳功侃;閔長庚;;放射免疫導向腫瘤手術的研究[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);1990年05期

6 崔澄 ,楊彥忠;γ干擾素及淋巴細胞可阻礙腫瘤的早期發(fā)育及其免疫原性的形成[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);2002年01期

7 張進芳;馬文麗;危敏;鄭文嶺;;人乳頭瘤病毒疫苗研究進展[J];廣東醫(yī)學;2008年12期

8 劉然義,熊宇芳,屈伸,尤穎健,鄧耀祖;轉染人CD80基因的黑色素瘤細胞生長特性及免疫原性探討[J];癌癥;1999年05期

9 郭慧芳;;重組人TGF-β1在大腸桿菌中的表達、純化及其免疫原性測定[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2008年09期

10 顧良軍;;最新進展[J];癌癥進展;2010年02期

相關會議論文 前2條

1 姜昌麗;張英起;顏真;;重組人TGF-β1在大腸桿菌中的表達、純化及其免疫原性測定[A];2006年全國生化與生物技術藥物學術年會論文集[C];2006年

2 彭佩燕;劉侃;林桂淼;靳廣毅;姜文奇;王曉梅;;TLR7 Agonist-Nanog的合成及對小鼠的免疫激動效應[A];廣東省生物物理學會2013年學術研討會論文集[C];2013年

相關重要報紙文章 前1條

1 本報記者 靖九江;宮頸癌預防重在對HPV進行初級免疫[N];中國醫(yī)藥報;2008年

相關博士學位論文 前1條

1 賈正才;異種TGF-β免疫對腫瘤基因疫苗免疫效能的影響研究[D];第三軍醫(yī)大學;2004年

相關碩士學位論文 前2條

1 孫佳楠;B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21腫瘤干細胞疫苗的制備及其抗腫瘤效應的研究[D];東南大學;2015年

2 陶嵐;B7-H4分子的抗體制備及其在腫瘤研究中的應用[D];浙江大學;2008年

，

本文編號：1659356