本文選題：膽管癌　切入點(diǎn)：HMGB-1　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：背景膽管癌是一種呈高度侵襲性的惡性腫瘤,根據(jù)其發(fā)生部位可分為肝內(nèi)膽管癌、肝門部膽管癌和肝外膽管癌。雖然膽管癌發(fā)生率較低,但因其惡性程度較高給膽管癌的治療造成一定的困難。膽管癌的危險(xiǎn)因素主要有肥胖、膽汁淤積及DNA甲基化等。慢性炎癥在膽管癌的發(fā)展過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用,比如慢性肝炎、原發(fā)性硬化性膽管炎,肝硬化等,已經(jīng)成為膽管癌重要的癌前病變和高危因素。高遷徙率族蛋白(High mobility group box 1, HMGB-1)在真核生物的細(xì)胞核中廣泛的表達(dá),但受到一定的刺激時(shí),HMGB-1可釋放到細(xì)胞外,作為損傷模式相關(guān)分子,參與炎癥因子的釋放及其他免疫反應(yīng)。HMGB-1在炎性反應(yīng)及癌癥的發(fā)展過程中起著重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn),HMGB-1可通過NF-κB (nuclear factor kappa B)促進(jìn)肝細(xì)胞癌的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。在肝癌的動(dòng)物模型及人乳腺癌的研究過程中也發(fā)現(xiàn),HMGB-1可明顯促進(jìn)腫瘤的發(fā)展過程。HMGB-1被釋放到細(xì)胞外可激活NF-κB及PI-3K (phosphatidylinositol-3-kinase)從而激活免疫細(xì)胞,促進(jìn)炎癥反應(yīng),刺激腫瘤細(xì)胞的增殖侵襲和轉(zhuǎn)移并抑制其凋亡。最近的研究表明,HMGB-1可促進(jìn)膽管癌細(xì)胞的侵襲,但是否可促進(jìn)膽管癌的增殖作用,目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。目的1.收集2010年1月-2015年1月間在南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的膽管癌患者的病歷資料及病理標(biāo)本,免疫組化檢測HMGB-1在膽管癌患者及其癌旁組織中的表達(dá)。分析HMGB-1的表達(dá)與膽管癌患者臨床分期,分化程度,腫瘤大小及是否發(fā)生轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系；分析HMGB-1的表達(dá)量與患者生存時(shí)間之間的關(guān)系。2.收集膽管癌及膽結(jié)石患者的膽汁,色譜法分析膽汁中結(jié)合膽汁酸和游離膽汁酸的含量。3.觀察HMGB-1與膽汁酸(TCA,DCA)對膽管癌細(xì)胞增殖及炎癥發(fā)生過程中的相互作用。方法1.收集2010-2015年間膽管癌患者的臨床資料及病理組織,做免疫組化分析,根據(jù)Bannar法對HMGB-1的表達(dá)進(jìn)行評分；Western blotting方法檢測膽管癌及其癌旁組織組織中HMGB-1的表達(dá)。2.采用Kapan-Meier生存分析法HMGB-1的表達(dá)量與患者生存時(shí)間的關(guān)系,運(yùn)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型,單因素及多因素進(jìn)一步分析膽管癌患者的生存時(shí)間與TNM分期、腫瘤大小、分化程度、血管轉(zhuǎn)移、神經(jīng)轉(zhuǎn)移等之間的關(guān)系。3.收集膽管癌及膽管結(jié)石患者ERCP術(shù)后膽汁酸各20例高效液相色譜法分析膽汁中結(jié)合膽汁酸(TCA)、游離膽汁酸(DCA)的含量。4. qRT-PCR及western blotting測HMGB-1在膽管癌細(xì)胞株及膽管上皮細(xì)胞HBEPic中的表達(dá);ELISA檢測HMGB-1在膽管癌患者及膽結(jié)石患者膽汁中的釋放量。5.不同濃度的TCA (900pM), DCA(400μM)分別刺激膽管癌細(xì)胞(HuCCT-1,RBE)48小時(shí),qRT-PCR, western blotting和ELISA觀察HMGB-1在mRNA和蛋白水平的變化。6.不同濃度的TCA (900μM),DCA (400μM)和HMGB-1(10ng/ml)單獨(dú)或聯(lián)合作用刺激膽管癌細(xì)胞株(HuCCT-1, RBE)24,48和72小時(shí),實(shí)驗(yàn)分為以下幾組：空白組、NC組、TCA組、DCA組、HMGB-1組、"HMGB-1+TCA"組、"HMGB-1+DCA"組,CCK8檢測細(xì)胞的增殖作用。7.不同濃度的TCA(900μM),DCA (400μM)和HMGB-1 (10ng/ml)單獨(dú)或聯(lián)合作用刺激膽管癌細(xì)胞株(HuCCT-1, RBE)48小時(shí),實(shí)驗(yàn)分為以下幾組：空白組、NC組、TCA組、DCA組、HMGB-1組、"HMGB-1+TCA"組、"HMGB-1+DCA"組。qRT-PCR檢測RAGE, S1PR2, IL-6, IL-1α, TNFα的表達(dá)。8. Kaplan-Meier法計(jì)算HMGB-1與膽管癌患者總體生存時(shí)間及無復(fù)發(fā)生存時(shí)間之間的關(guān)系。結(jié)果1. HMGB-1在不同的膽管癌患者中的表達(dá)量亦不相同,RAGE在膽管癌組織中的表達(dá)明顯高于其癌旁組織；HMGB-1的表達(dá)量與腫瘤的大小、分化程度、TNM分期均有明顯的正相關(guān)。2. HMGB-1在體積較大的膽管癌患者組織中高表達(dá)；HMGB-1可促進(jìn)膽管癌細(xì)胞的增殖,且在一定的時(shí)間內(nèi),隨濃度的增加刺激作用也明顯增強(qiáng)。3. HMGB-1在膽管癌患者膽汁中的含量明顯高于膽結(jié)石患者；HMGB-1在膽管癌細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于正常膽管上皮細(xì)胞。4.TCA可明顯促進(jìn)HMGB-1的釋放,而DCA的促進(jìn)作用不明顯。5.TCA可促進(jìn)膽管癌細(xì)胞的增殖；DCA可抑制膽管癌細(xì)胞的增殖；]HMGB-1可協(xié)同TCA對膽管癌細(xì)胞的增殖作用,而減弱DCA對膽管癌細(xì)胞的抑制作用。6. HMGB-1可促進(jìn)TCA受體(S1PR2)的表達(dá),但抑制DCA受體(FXR)的表達(dá);HMGB-1與TCA協(xié)同可促進(jìn)EAGE, S1PR2及炎癥因子(IL-6,IL-la,TNFα)的釋放。7. HMGB-1的表達(dá)量與患者的總體生存時(shí)間及疾病無復(fù)發(fā)生存時(shí)間密切相關(guān)。結(jié)論HMGB-1在膽管癌患者中高表達(dá),與患者腫瘤大小,分化程度,TNM分期等正相關(guān)；HMBGB-1表達(dá)越高,膽管癌患者的總體生存時(shí)間及無復(fù)發(fā)生存時(shí)間越短；HMGB-1可協(xié)同TCA促進(jìn)膽管癌的增殖及炎癥反應(yīng)過程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.8

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本文編號：1653138