本文選題：乳腺癌　切入點：上皮細胞粘附分子　出處：《大連醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：乳腺癌是常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。乳腺癌占全身各種惡性腫瘤的7%-8%,國內(nèi)發(fā)病率高于世界平均水平1%-2%,目前乳腺癌多采用手術(shù)治療、放射治療、化學治療等,手段單一,難以達到滿意的效果。因此尋找有效治療乳腺癌的方法具有一定的臨床意義。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)指腫瘤細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移時,伴隨著細胞形態(tài)學變化,即上皮細胞向間充質(zhì)細胞的轉(zhuǎn)變,侵入到基底膜下面,進入到血管中散播至第二個地方。在此過程中,腫瘤細胞從原發(fā)位置脫落,然后侵入到周圍的組織中,獲得了浸潤性和游走的遷移能力,突破細胞之間的接觸,形成細胞-基質(zhì)的粘附位點,通過基質(zhì)中的蛋白酶來完成趨化過程。一些研究表明,EMT與上皮細胞腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程具有密切的聯(lián)系。目前已發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞轉(zhuǎn)移可以改變粘附分子(Cell Adhesion Molecules,CAMs)的表達。腫瘤細胞表面CAMs表達異常,可能會造成腫瘤細胞粘附性降低而脫落到細胞外基質(zhì)(Extracellular Matrix,ECM)中,促進腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移過程。上皮細胞粘附分子(Epithelial Cell Adhesion Molecule,EpCAM)是由314個氨基酸殘基構(gòu)成的分子量為40 k Da的跨膜糖蛋白,包含N-端的胞外區(qū),跨膜區(qū)和C-端的胞內(nèi)區(qū)。EpCAM是不同于CAMs經(jīng)典家族成員,具有潛在的致癌性。在正常條件下,除鱗狀上皮細胞,EpCAM在正常上皮細胞中都有不同程度地表達。在病理情況下,EpCAM在腺癌中高表達,包括乳腺癌、肺腺癌、卵巢癌、胰腺癌等。EpCAM一級結(jié)構(gòu)顯示,EpCAM N-端細胞外域包含三個N-糖基化位點,分別是Asn74、Asn111、Asn198。文獻已報道,將此三個糖基化位點去除可使EpCAM的半衰期由21小時縮短至7小時,表明N-糖基化位點對于維持EpCAM的功能是必不可少的。另外,與正常組織相比,EpCAM糖基化的差異是引起腫瘤功能差異的重要因素。因此,推測在乳腺癌細胞中EpCAM的N-糖基化修飾可能是激活和調(diào)節(jié)EMT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵。本課題前期工作致力于EpCAM對乳腺癌細胞EMT的調(diào)節(jié)作用和機制研究,實驗結(jié)果證實:在TGF-β1誘導(dǎo)下通過JNK通路,轉(zhuǎn)錄因子AP-1調(diào)控EpCAM的表達從而影響乳腺癌細胞EMT的發(fā)生。本實驗深入探究EpCAM N-糖基化修飾對乳腺癌細胞EMT的調(diào)控機制,為乳腺癌的治療方法提供一定的理論基礎(chǔ)。首先,將EpCAM N-糖基化突變質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染到乳腺癌細胞(MCF-7、MDA-MB-231),結(jié)果表明EpCAM在乳腺癌細胞中表達糖基化和非糖基化蛋白兩種形式。通過細胞免疫熒光技術(shù)檢測,結(jié)果提示EpCAM N-糖基化突變沒有改變EpCAM的表達定位。將EpCAM N-糖基化突變質(zhì)粒聯(lián)合TGF-β1作用于乳腺癌細胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)EMT分子標記物E-鈣粘蛋白(E-cadherin)表達量上升,N-鈣粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimention)表達量下降。結(jié)果提示,EpCAM N-糖基化修飾調(diào)控乳腺癌細胞EMT發(fā)生。將EpCAM N-糖基化突變質(zhì)粒聯(lián)合TGF-β1和ERK1/2和PI3K/Akt的抑制劑作用于兩種乳腺癌細胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)EMT分子標記物E-鈣粘蛋白(E-cadherin)表達量上升,N-鈣粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimention)表達量下降,ERK1/2和PI3K/Akt信號通路中p Raf-1、p ERK、p Akt表達量下降。結(jié)果表明,TGF-β1誘導(dǎo)下,EpCAM N-糖基化修飾經(jīng)由MAPK/PI3K/Akt通路對乳腺癌細胞EMT存在抑制作用。綜上所述,TGF-β1誘導(dǎo)下,EpCAM N-糖基化修飾通過MAPK和PI3K/Akt通路來調(diào)控乳腺癌細胞EMT。整合素作為細胞表面重要的粘附分子,參與細胞與細胞外基質(zhì)的粘附過程,參與細胞內(nèi)外的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)。從而參與細胞分裂、粘附、凋亡等生物特定行為的調(diào)控。細胞也可根據(jù)自身狀態(tài)及需要調(diào)節(jié)整合素與配體的親和力,影響細胞與細胞外基質(zhì)的粘附及遷移。在乳腺癌細胞(MCF-7、MDA-MB-231)中瞬時轉(zhuǎn)染EpCAM N-糖基化突變質(zhì)粒處理48小時,實驗結(jié)果表明,降低纖維連接蛋白(Fibronectin,FN)和integrinβ1蛋白表達,從而進一步激活由integrinβ1調(diào)節(jié)下游關(guān)鍵性的粘著斑激酶(Focal Adhension Kinase,FAK)同時,降低了p FAK、p Scr的蛋白表達。研究發(fā)現(xiàn),FAK可以誘導(dǎo)PI3K/Akt信號通路的激活,采用FAK特異性抑制劑PF-573228聯(lián)合EpCAM N-糖基化突變質(zhì)粒作用于兩種乳腺癌細胞中處理48小時,結(jié)果提示,PI3K/Akt信號通路中p Akt、p GSK3β、β-catenin和MMP-2/MMP-9蛋白表達量下降。因此,乳腺癌細胞中EpCAM N-糖基化修飾通過抑制integrinβ1和FN表達,通過PI3K/Akt信號通路,轉(zhuǎn)錄因子β-catenin調(diào)節(jié)MMP-2/MMP-9表達降低乳腺癌細胞與細胞外基質(zhì)分子的粘附。綜上所述,EpCAM N-糖基化修飾可以調(diào)控乳腺癌細胞EMT的發(fā)生和乳腺癌細胞與胞外基質(zhì)分子的粘附。本實驗闡明了乳腺癌細胞發(fā)生發(fā)展的過程中EpCAM N-糖基化修飾調(diào)控EMT的分子機制,并且為臨床上乳腺癌的基因治療方案的選擇、基因治療藥物的開發(fā)提供科學依據(jù)。EpCAM作為靶點對乳腺癌的治療,提供堅實的理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1649583