發(fā)布時(shí)間：2018-03-22 00:27

  本文選題：結(jié)直腸癌　切入點(diǎn)：分子標(biāo)志物　出處：《吉林大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：結(jié)直腸癌是常見的消化道腫瘤之一，每年全世界范圍內(nèi)的新增病例超過100萬(wàn)例，位于腸壁內(nèi)的原發(fā)性結(jié)直腸癌采用手術(shù)和化療往往能夠收到比較好的治療效果，5年生存率約為90%，即使在發(fā)達(dá)國(guó)家，結(jié)直腸癌的總體致死率仍有33%之多。盡管癌組織周邊淋巴結(jié)未檢測(cè)到明顯轉(zhuǎn)移灶，其復(fù)發(fā)率也可達(dá)25%，絕大多數(shù)死亡的結(jié)直腸癌病例均是由于出現(xiàn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，因此，早期檢查和治療是有效降低結(jié)直腸癌致死率的關(guān)鍵。目前的臨床檢測(cè)方法主要是病理組織染色，為提高診斷準(zhǔn)確性，尤其是預(yù)測(cè)患者對(duì)常規(guī)療法的應(yīng)答水平，更好地指導(dǎo)診斷和用藥，往往輔以分子標(biāo)志物的檢測(cè)。采用分子標(biāo)志物作為結(jié)直腸癌診斷和預(yù)后指標(biāo)具有很多優(yōu)越性，但潛在的標(biāo)志蛋白質(zhì)分子多涉及癌癥的各種增殖或凋亡信號(hào)通路，通常存在諸多突變型，增加了檢測(cè)的困難程度和結(jié)果的不確定性。另外，較大的個(gè)體差異也是其推廣應(yīng)用的一大阻礙。核型分析也存在類似的問題，檢測(cè)手段繁瑣，個(gè)體重復(fù)性差，使得這些檢測(cè)方法只能作為常規(guī)病理檢測(cè)手段的輔助選項(xiàng)，對(duì)于臨床診斷和療效預(yù)測(cè)貢獻(xiàn)極小。miRNA直到近些年才被納入分子標(biāo)志物的選擇范疇，它具有檢測(cè)方便、成本低廉、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。本課題的目的就是在于篩選并獲得結(jié)直腸癌特異性miRNA分子，并詳細(xì)闡述其生物學(xué)功能與臨床意義。 方法：首先采用miRNA檢測(cè)芯片分析5例結(jié)直腸癌組織和癌旁正常組織的miRNA表達(dá)譜，對(duì)比篩選差異基因。再擴(kuò)大樣本量至30例，用Realtime-PCR驗(yàn)證篩選結(jié)果，分析其表達(dá)水平與結(jié)直腸癌分級(jí)分期的相關(guān)性，同時(shí)檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞系和正常結(jié)腸細(xì)胞該miRNA的表達(dá)差異。確定差異顯著的miRNA后，在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中通過質(zhì)粒過表達(dá)和消減表達(dá)的實(shí)驗(yàn)，，研究該miRNA的生物學(xué)功能。隨后采用軟件分析其序列并預(yù)測(cè)目的基因，以熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)和定量PCR、免疫印跡等方法進(jìn)行驗(yàn)證，并在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中研究miRNA及其調(diào)控靶基因?qū)?xì)胞增殖、周期和侵襲能力的調(diào)控作用。最后，在小鼠移植瘤模型中驗(yàn)證體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，通過對(duì)比瘤重、腫瘤體積等數(shù)據(jù)，確定該miRNA對(duì)在體腫瘤組織生長(zhǎng)的影響。 結(jié)果：芯片檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與相應(yīng)的癌旁對(duì)照組織相比較，miR-103在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)，并且與另外30例組織標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果一致，同時(shí)miR-103的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者腫瘤組織的轉(zhuǎn)移性和TNM分期相關(guān)。進(jìn)一步驗(yàn)證miR-103在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中表達(dá)水平也顯著高于正常結(jié)直腸細(xì)胞。在結(jié)直腸癌細(xì)胞系HCT-116中驗(yàn)證，miR-103可促進(jìn)細(xì)胞增殖和侵襲。通過軟件預(yù)測(cè)和熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)以及定量PCR、免疫印跡等方法，我們發(fā)現(xiàn)miR-103可直接調(diào)控DICER和PTEN的表達(dá)水平。在HCT-116細(xì)胞中，miR-103可明顯逆轉(zhuǎn)DICER和PTEN的表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞的增殖和侵襲。構(gòu)建荷瘤裸鼠模型，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)上述結(jié)果，消減表達(dá)miR-103后，腫瘤組織PTEN表達(dá)量顯著上調(diào)，而對(duì)腫瘤生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用。 結(jié)論：通過本課題的研究，我們利用基因芯片技術(shù)篩選到了在結(jié)直腸癌中高表達(dá)的微小RNA miR-103，并初步證實(shí)其表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的腫瘤轉(zhuǎn)移和TNM分期呈正相關(guān)。同時(shí)，通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，我們進(jìn)一步證實(shí)miR-103參與調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和侵襲。隨后，發(fā)現(xiàn)并證實(shí)在結(jié)直腸癌細(xì)胞中，DICER和PTEN可做為miR-103的靶基因，miR-103可通過調(diào)控DICER和PTEN的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的增殖、周期和侵襲能力。最后，通過體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)，證實(shí)miR-103可通過其靶基因DICER和PTEN參與調(diào)控腫瘤的生長(zhǎng)，而消減miR-103的表達(dá)，可以顯著逆轉(zhuǎn)DICER和PTEN的表達(dá)，并有效抑制腫瘤生長(zhǎng)。我們的研究證實(shí)在結(jié)直腸癌中，miR-103表達(dá)上調(diào)且與腫瘤的侵襲性和TNM分期密切相關(guān)，并初步闡明其介導(dǎo)腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，提示miR-103可做為結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的潛在分子標(biāo)志物，為結(jié)直腸癌的臨床檢測(cè)提供新的檢測(cè)靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1646255