發(fā)布時(shí)間：2018-03-20 06:21

  本文選題：泮托拉唑　切入點(diǎn)：肝細(xì)胞肝癌　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:質(zhì)子泵抑制劑(PPI)在臨床上主要用于治療胃酸相關(guān)性疾病,發(fā)現(xiàn)它也可以作為細(xì)胞毒性藥物進(jìn)行抗多種腫瘤的治療。然而,PPI對(duì)肝癌的作用和相關(guān)機(jī)制研究甚少。本課題旨在探索泮托拉唑(PPZ)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其可能的機(jī)制,希望能夠擴(kuò)展PPZ的臨床適用范圍到肝癌治療。方法:(1)運(yùn)用CCK-8(Cell Counting Kit-8)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)PPZ對(duì)肝癌細(xì)胞Huh7、SK-Hep1、Hep G2、PLC/PRF/5增殖行為的影響;(2)運(yùn)用平板集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PPZ對(duì)SK-Hep-1細(xì)胞集落形成能力的影響;(3)運(yùn)用生長曲線檢測(cè)PPZ對(duì)SK-Hep-1生長活力的影響;(4)運(yùn)用Edu增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)泮托拉唑?qū)K-Hep1、Huh7 S期中DNA合成情況的影響;(5)運(yùn)用流式Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)PPZ對(duì)SK-Hep-1和Huh7凋亡的影響;(6)運(yùn)用TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PPZ對(duì)SK-Hep-1和Huh7晚期凋亡的影響;(7)運(yùn)用流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)PPZ對(duì)SK-Hep-1和Huh7細(xì)胞周期的影響;(8)PPZ作用SK-Hep1和Huh7 24h后,運(yùn)用基因芯片技術(shù)篩選出改變明顯的增殖和細(xì)胞周期相關(guān)基因,并用q PCR技術(shù)進(jìn)行再次驗(yàn)證PPZ作用SK-Hep1后這些基因在m RNA水平的表達(dá)是否和基因芯片結(jié)果一致。(9)進(jìn)一步運(yùn)用Western-Blot檢測(cè)PPZ作用SK-Hep1后,以上篩選出的相關(guān)周期基因在蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)CCK-8結(jié)果顯示不同濃度的PPZ(20、40、80、160、320、640μmol/L)作用于多種肝癌細(xì)胞一定時(shí)間(24h、48h、72h)后,與對(duì)照組相比,PPZ呈劑量和時(shí)間依賴性地抑制各種肝癌細(xì)胞的增殖(p0.05)。(2)平板集落形成實(shí)驗(yàn)顯示,不同濃度的PPZ(20、40、80、160μmol/L)作用肝癌細(xì)胞SK-Hep-1 9天后,隨著PPZ濃度的增加,肝癌細(xì)胞SK-Hep-1的集落數(shù)目和面積明顯地降低(p0.01)。(3)生長曲線實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同濃度的PPZ(20、40、80、160μmol/L)作用SK-Hep-1 7天后,與對(duì)照組相比,PPZ呈劑量和時(shí)間依賴性地抑制SK-Hep-1生長(p0.05)。(4)Edu實(shí)驗(yàn)顯示,與對(duì)照組相比,不同濃度的PPZ(20、40、80、160μmol/L)作用SK-Hep-1和Huh7 48h后,可以明顯地抑制肝癌細(xì)胞在S期的DNA合成(p0.05)。(5)流式Annexin V-FITC/PI雙染法結(jié)果顯示,不同濃度的PPZ(160、320μmol/L)作用SK-Hep-1和Huh7 24h后,可以明顯地誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的早期和晚期凋亡(p0.05)。(6)TUNEL實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同濃度的PPZ(160、320μmol/L)作用SK-Hep-1和Huh7 48h后,能夠明顯地誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞晚期凋亡;(7)流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),不同濃度的PPZ(160、320μmol/L)作用SK-Hep-1和Huh7 24h后,SK-Hep-1和Huh7細(xì)胞周期明顯地被阻滯在G2/M期且S期細(xì)胞百分比明顯減少(p0.05);(8)基因芯片篩選并經(jīng)q PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),PPZ作用SK-Hep-1和Huh7 24h后,增殖和細(xì)胞周期相關(guān)基因PNCA、MKI67、CDK1、CDK2、CDC25C、CYCLINA2、CYCLINE2在m RNA水平表達(dá)明顯下調(diào)(p0.05);(9)Western-Blot發(fā)現(xiàn),PPZ作用SK-Hep-1和Huh7 24h后,細(xì)胞增殖和周期相關(guān)基因CDK1、CDK2、CDC25C、CYCLINA2、CYCLINE2在蛋白表達(dá)水平表達(dá)下調(diào),凋亡相關(guān)的蛋白Procaspase-9表達(dá)下降,活化的caspase-9表達(dá)增加(p0.05)。結(jié)論:PPZ能夠明顯地抑制肝癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡,可能與下調(diào)增殖和細(xì)胞周期相關(guān)基因PNCA、MKI67、CDK1、CDK2、CDC25C、CYCLINA2、CYCLINE2的表達(dá),進(jìn)而使得細(xì)胞周期被阻滯在G2/M期有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1637863