本文選題：KCTD12　切入點：OCM-1　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：人類鉀離子通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白12(KCTD12,也稱為Pfetin)是KCTD家族26個成員之一。KCTD12調(diào)節(jié)GABAB受體信號的激動劑效力和動力學(xué)效應(yīng)。蛋白質(zhì)組學(xué)分析表明KCTD12可能是判斷胃腸道間質(zhì)瘤預(yù)后潛在的生物標(biāo)志物。然而,很少有報道關(guān)于KCTD12對其他腫瘤類型的作用。葡萄膜黑色素瘤通常指發(fā)生在脈絡(luò)膜,睫狀體或虹膜上的黑色素瘤。葡萄膜黑色素瘤是最常見的成人原發(fā)性眼內(nèi)惡性腫瘤。在美國,這些癌癥的發(fā)生率是5%,其中85%是葡萄膜原發(fā)。葡萄膜黑色素瘤患者早期表現(xiàn)為無痛性視力下降,后期則可導(dǎo)致視網(wǎng)膜脫離。此外,葡萄膜黑色素瘤具有高度轉(zhuǎn)移性,患者黑色素瘤可能轉(zhuǎn)移到肝臟,肺或者皮膚。因此,葡萄膜黑色素瘤患者有高達一半的死亡率。葡萄膜黑色素瘤腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移是復(fù)雜過程。到目前為止,尚無研究KCTD12對葡萄膜黑素瘤影響的相關(guān)研究。本課題研究旨在探討過表達KCTD12基因?qū)γ}絡(luò)膜黑色素瘤細胞OCM-1的生物學(xué)功能的影響。本研究設(shè)計并亞克隆KCTD12全長和部分片段基因。構(gòu)建了真核過表達載體PC3.1-KCTD12,瞬轉(zhuǎn)人類脈絡(luò)膜黑素瘤細胞系(OCM-1),發(fā)現(xiàn)過表達KCTD12可以上調(diào)腫瘤上皮組織標(biāo)志蛋白E-cad的表達及降低腫瘤上皮組織間質(zhì)化(EMT)標(biāo)志蛋白Vimitin的表達。構(gòu)建慢病毒核心質(zhì)粒p LVX-Puro-KCTD12,篩選出穩(wěn)定表達KCTD12的OCM-1細胞系。我們將得到的細胞系進行RNA-Sequencing檢測,并對數(shù)據(jù)進行生物信息學(xué)分析。發(fā)現(xiàn)基因表達水平變化主要包括增殖,細胞黏附,細胞凋亡,血管生成等方面。我們也針對以上結(jié)果進行實驗驗證。通過MTS實驗、平板克隆實驗及軟瓊脂克隆實驗,結(jié)果表明KCTD12可有效抑制OCM-1細胞的增殖。通過劃痕實驗、transwell侵襲遷移實驗及相關(guān)蛋白的表達情況的檢測,發(fā)現(xiàn)上皮化標(biāo)志物E-cadherin,β-Catenin表達量上調(diào),而間質(zhì)化標(biāo)志物Vimentin的表達量則下降,Snail及slug作為E-cadherin的調(diào)節(jié)因素,表達量也有所下降。實驗結(jié)果說明過表達KCTD12可以限制OCM-1細胞的侵襲及遷移。通過流式細胞儀對細胞周期及凋亡進行檢測,并對細胞周期相關(guān)的關(guān)健蛋白進行檢測。蛋白檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)cyclin B表達量明顯下降。結(jié)果表明過表達KCTD12的OCM-1細胞中G2/M到G1期的過程時間延長。另外,KCTD12過表達OCM-1細胞抑制了裸鼠體內(nèi)異種移植物的生長。最后,實驗還構(gòu)建了PGEX-4T-KCTD12全長和部分片段的載體,進行原核表達,并純化了帶GST及HIS標(biāo)簽的KCTD12全長及部分片段的融合蛋白。用全長部分蛋白驗證對OCM-1細胞的生物學(xué)作用,并用部分片段蛋白免疫小鼠制備了鼠源性抗體。總的來說,過表達KCTD12具有抑制OCM-1細胞生長的作用,未來有可能作為治療脈絡(luò)膜黑色素瘤的新型治療靶標(biāo)。
[Abstract]:Human potassium channel tetramer domain protein 12KCTD12, also known as Pfetinin, is one of the 26 members of the KCTD family. KCTD12 regulates the agonist potency and kinetic effects of GABAB receptor signal. Proteomics analysis indicates that KCTD12 may be the judge of gastrointestinal tract. Potential biomarkers for tumor prognosis. However, The role of KCTD12 in other types of tumors is rarely reported. Uveal melanoma usually refers to melanoma occurring in the choroid, ciliary body, or iris. Uveal melanoma is the most common primary intraocular malignant tumor in adults. The incidence of these cancers is 5%, of which 85% are primary uveal. Patients with uveal melanoma show painless visual acuity at an early stage, which can lead to retinal detachment later. In addition, uveal melanoma is highly metastatic. Patients with melanoma may metastasize to the liver, lungs, or skin. As a result, uveal melanoma patients have a high rate of death. The occurrence and metastasis of uveal melanoma tumors is a complex process. No study has been done on the effect of KCTD12 on uveal melanoma. This study aims to investigate the effect of overexpression of KCTD12 gene on the biological function of OCM-1 in choroidal melanoma cells. This study designed and subcloned the full length and part of KCTD12. Fragment gene. Eukaryotic expression vector PC3.1-KCTD12 was constructed and transformed into human choroidal melanoma cell line (OCM-1). It was found that overexpression of KCTD12 could up-regulate the expression of E-cad, and decrease the expression of mesenchymal marker of tumor epithelium. Construction of lentivirus core plasmid pLVX-Puro-KCTD12 and screening of OCM-1 cell lines stably expressing KCTD12. The obtained cell lines will be detected by RNA-Sequencing. Bioinformatics analysis of the data shows that the changes of gene expression level mainly include proliferation, cell adhesion, apoptosis, angiogenesis and so on. The results of plate cloning and soft Agar cloning showed that KCTD12 could effectively inhibit the proliferation of OCM-1 cells, and the expression of E-cadherin and 尾 -Catenin was up-regulated by scratching test, transwell invasion and migration assay and the expression of related proteins. However, the expression of interstitial marker Vimentin decreased. Snail and slug were the regulatory factors of E-cadherin. The results showed that overexpression of KCTD12 could limit the invasion and migration of OCM-1 cells. Flow cytometry was used to detect cell cycle and apoptosis. The results showed that the expression of cyclin B was significantly decreased. The results showed that the process time from G2 / M to G1 phase was prolonged in OCM-1 cells with overexpression of KCTD12. In addition, KCTD12 over-expressed OCM-1 cells. Inhibit the growth of xenografts in nude mice. Finally, The full-length and partial fragments of PGEX-4T-KCTD12 were constructed and expressed in prokaryotic expression, and the fusion proteins of KCTD12 with GST and HIS tags were purified. The biological effects on OCM-1 cells were verified by full-length partial proteins. In general, overexpression of KCTD12 could inhibit the growth of OCM-1 cells and might be a new therapeutic target for choroidal melanoma in the future.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.7

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊芳;連續(xù)拍照能及早發(fā)現(xiàn)黑色素瘤[J];國外醫(yī)學(xué).護理學(xué)分冊;2000年02期

2 紀(jì)小龍,徐薪,申明識;黏膜黑色素瘤的常見臨床病理特點[J];診斷病理學(xué)雜志;2002年02期

3 李凌,徐慶中;黑色素瘤高頻超聲表現(xiàn)1例[J];中華超聲影像學(xué)雜志;2002年09期

4 陳燁 ,劉敏賢 ,安秀珍 ,林昌萬 ,姜影;淚囊黑色素瘤1例報告[J];吉林醫(yī)學(xué);2003年01期

5 蔡振鑫;黑色素瘤:預(yù)測致死性特征的30年臨床經(jīng)驗[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2004年02期

6 Helsing P.,Loeb M. ,馮義國;小直徑黑色素瘤:挪威黑色素瘤隨訪項目[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2005年04期

7 Murray C.S.;Stockton D.L.;Doherty V.R. ;黨倩麗;;增厚的黑色素瘤:長久面對的挑戰(zhàn)[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2005年08期

8 High W.A. ,Quirey R.A. ,Guillén D.R ,R.S. Taylor,劉超;7例甲單元原位黑色素瘤的臨床表現(xiàn)、組織病理和臨床預(yù)后[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2005年02期

9 Curtin J.A.;Fridlyand J.;Kageshita T. ;B.C. Bastian;黨倩麗;;黑色素瘤不同位置的基因改變[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2006年02期

10 Blaise S.;Rumeau-Trividic M.;Le Brun V.;周少娜;;黑色素瘤伴亞急性原發(fā)性纖維蛋白溶解[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2006年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李東;謝遵江;賀業(yè)春;劉穎;劉麗;;在黑色素瘤組織中免疫細胞的形態(tài)學(xué)觀察[A];中國解剖學(xué)會第八屆組織學(xué)與胚胎學(xué)專業(yè)青年研討會論文集[C];2004年

2 安菊生;吳令英;李寧;俞高志;劉麗影;;原發(fā)女性生殖道黑色素瘤42例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

3 陳陸霞;孫保存;張詩武;賀忠江;;眼內(nèi)移植性黑色素瘤微循環(huán)模式的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

4 楊志濤;陸洪光;;死亡受體和黑色素瘤的抗凋亡作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第14次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

5 鐘傳華;楊文治;王曉蘭;;黑色素瘤與痔診治失誤的啟迪[A];2012醫(yī)學(xué)前沿——中華中醫(yī)藥學(xué)會肛腸分會第十四次全國肛腸學(xué)術(shù)交流大會論文精選[C];2012年

6 郭軍;;黑色素瘤最新進展和未來趨勢[A];中國腫瘤內(nèi)科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 孫保存;張詩武;劉志勇;張丹芳;郭華;;多西環(huán)素影響黑色素瘤微循環(huán)模式的形成[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

8 郭偉;;口腔頜面-頭頸黏膜黑色素瘤的個體化診治與思考[A];中國腫瘤內(nèi)科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

9 孫保存;張丹芳;張詩武;郭華;張文治;趙秀蘭;;缺血缺氧對黑色素瘤局部浸潤的相關(guān)分子機制影響的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

10 唐亮;;手術(shù)治療足跟底部皮膚黑色素瘤6例臨床分析[A];2013年全國激光醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)聯(lián)合會議暨2013年浙江省醫(yī)學(xué)會整形美容學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 王倫邋王晨;早期發(fā)現(xiàn)黑色素瘤可挽救生命[N];科技日報;2007年

2 倪方;黑色素瘤早治療可痊愈（三）[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2008年

3 健康時報特約記者 管九蘋;澳大利亞免費普查黑色素瘤[N];健康時報;2010年

4 實習(xí)生 易立;黑色素瘤,是否無藥可治？[N];科技日報;2011年

5 記者 張e，

本文編號：1631111