本文選題：食管鱗癌　切入點：FADS2　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景和目的食管癌是人類常見的消化道惡性腫瘤之一,死亡率在所有腫瘤中排名第四[1],病理類型分為鱗癌和腺癌,在我國食管鱗狀細胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是最主要的病理類型,其發(fā)病率具有明顯的地區(qū)差異和家族聚集現(xiàn)象,其高發(fā)區(qū)位于東亞以及中國東部地區(qū),特別是河南的林州、安陽、輝縣和大別山區(qū)等地。當(dāng)前的腫瘤分子生物學(xué)研究資料表明,環(huán)境、遺傳和精神心理等因素通過協(xié)同或序貫的方式引起DNA損傷,使抑癌基因失活或者使原癌基因激活,加上凋亡調(diào)節(jié)基因或者DNA修復(fù)基因的異常改變,促使正常的食管粘膜經(jīng)過一個多因素、多基因、多階段的惡性演化過程,由此發(fā)展為食管癌[2],據(jù)此,從DNA修復(fù)基因、原癌基因、抑癌基因、代謝酶基因的遺傳多態(tài)性入手研究易感基因及腫瘤標(biāo)志物可以為食管癌的早期診斷、治療及預(yù)后提供更多的理論依據(jù)[3]。有研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌組織中脂肪酸去飽和酶基因2(Fatty Acid Desaturase 2,FADS2)表達水平增高,促進亞油酸(linoleic acid,LA)轉(zhuǎn)化成二十碳四烯酸(arachidonic acid,AA),同時其代謝產(chǎn)物前列腺素E2(Prostagland E2,PGE2)增多,在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到一定的促進的作用[4],在食管鱗癌中該基因表達水平顯著上調(diào),其機制尚不清楚。本文通過相關(guān)實驗,檢測FADS2基因在ESCC及癌旁正常黏膜組織中mRNA及蛋白的表達情況,分析其與患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系;通過慢病毒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)構(gòu)建穩(wěn)定表達FADS2的細胞克隆,進行體外細胞增殖實驗、軟瓊脂克隆形成實驗、平板克隆形成實驗、細胞遷移和侵襲實驗初步探討其生物學(xué)功能。研究方法1.臨床標(biāo)本的收集從河南省林州市人民醫(yī)院收集手術(shù)切除的ESCC新鮮組織標(biāo)本,每例標(biāo)本包含食管鱗癌組織及癌旁組織,共70對,儲存于液氮中,用于提取組織RNA,檢測FADS2 mRNA的表達。另外,本課題組調(diào)取了河南省林州市人民醫(yī)院299例ESCC根治切除術(shù)的石蠟包埋組織樣本,整理臨床病理和隨訪資料,制作ESCC的組織芯片。2.方法通過QPCR方法檢測FADS2 mRNA在70例ESCC及癌旁相對正常粘膜組織標(biāo)本中的表達情況;通過免疫組織化學(xué)方法檢測FADS2蛋白在299對ESCC組織芯片中的表達水平,并分析FADS2的表達與ESCC患者臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)性。通過慢病毒包裝系統(tǒng)將FADS2表達質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到食管癌細胞株KYSE30和KYSE510中,篩選出穩(wěn)定表達FADS2的細胞,并用QPCR、Western blot鑒定。通過體外的細胞增殖實驗、平板克隆形成實驗、軟瓊脂克隆形成實驗、遷移實驗和侵襲實驗研究FADS2對細胞生長、克隆形成、遷移及侵襲能力的影響。研究結(jié)果1.QPCR方法檢測FADS2在食ESCC及其相對應(yīng)的癌旁正常粘膜組織中的表達,統(tǒng)計學(xué)結(jié)果顯示FADS2 m RNA在ESCC組織中呈現(xiàn)高表達現(xiàn)象,而在癌旁組織中呈現(xiàn)相對低表達現(xiàn)象,且在ESCC組織和癌旁組織中的表達水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。2.IHC結(jié)果提示在有效的208例檢測樣本中,在癌組織中112例FADS2蛋白陽性表達(53.8%),96例FADS2蛋白陰性表達(46.2%);208例相對應(yīng)的癌旁正常組織中,63例FADS2蛋白陽性表達(30.3%),145例FADS2蛋白陰性表達(69.7%),FADS2的陽性表達率之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。通過統(tǒng)計學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)FADS2高表達與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)(P0.05),但與患者年齡、性別、腫瘤分化程度及浸潤均未發(fā)現(xiàn)有明顯相關(guān)性(P0.05)。Kaplan-Meier分析結(jié)果表明,FADS2高表達組(n=79)與正常表達組(n=129)的生存曲線有顯著差異,FADS2高表達患者的中位生存時間18個月,FADS2正常表達患者的中位生存時間27個月,二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.通過體外細胞功能實驗,我們發(fā)現(xiàn)過表達FADS2基因的食管癌細胞系KYSE30和KYSE510的增殖、非錨定克隆形成能力增強;同時,細胞遷移實驗和侵襲實驗顯示FADS2能夠促進細胞的遷移和侵襲。結(jié)論1.FADS2在食管鱗癌組織中呈現(xiàn)陽性表達,且在癌組織中的表達量高于相對應(yīng)的癌旁組織,其高表達與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān),是預(yù)后不良的重要因素。2.FADS2的高表達會導(dǎo)致腫瘤細胞的增殖、遷移、侵襲和非錨定克隆形成能力增強。
[Abstract]:Research background and objective: esophageal cancer is one of the most common malignant tumor of digestive tract, the mortality rate ranked fourth in all [1] tumors, pathological type was squamous cell carcinoma and adenocarcinoma, in esophageal squamous cell carcinoma in China (Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC) is the main pathological types, its incidence has the phenomenon of regional differences the obvious and familial aggregation, the high incidence area is located in East Asia and Eastern China, especially Henan, Linzhou, Anyang, Huixian and Dabie Mountain and other places. Oncomolecularbiology current researches show that the environment, genetic and psychological factors such as through synergistic or sequential manner to cause DNA damage, tumor suppressor gene inactivation or activation of oncogene, abnormal changes and apoptosis regulating gene or DNA repair genes, promote normal esophageal mucosa after a multi factor, multi gene, multi stage malignant evolution This process, for the development of esophageal carcinoma [2], accordingly, from the DNA repair gene, oncogene, tumor suppressor gene, genetic polymorphism of metabolic enzyme gene with susceptibility gene and tumor marker research for early diagnosis of esophageal cancer, [3] provides more theoretical basis for treatment and prognosis. The study found that in breast cancer tissue fatty acid desaturase gene 2 (Fatty Acid 2 Desaturase, FADS2) expression, promote linoleic acid (linoleic acid, LA) into twenty four carbon acid (arachidonic acid, AA), and its metabolite of prostaglandin E2 (Prostagland E2 PGE2) increased in breast cancer to to promote the role of [4] in the development of this gene was up-regulated in esophageal squamous cell carcinoma, its mechanism is not clear. Through the experiment, the expression of FADS2 gene was detected in ESCC and adjacent normal mucosa tissue mRNA and protein, To analyze the relationship between clinicopathological characteristics and prognosis of patients; construct FADS2 cell clones stably expressing the lentiviral transfection system, experiments were carried out in vitro cell proliferation, soft agar colony formation assay, colony formation assay, invasion and migration of cells to investigate its biological function. Methods 1. clinical specimens were collected from surgical resection ESCC fresh tissue samples from Linzhou City, Henan province people's Hospital, every specimen containing esophageal squamous cell carcinoma and paracancerous tissue, a total of 70, stored in liquid nitrogen, for the extraction of RNA, the expression of FADS2 mRNA. In addition, the research group of the transfer of the Linzhou City People's Hospital of Henan Province in 299 cases of ESCC radical resection paraffin embedded tissue samples, finishing the clinical pathology and follow-up data,.2. method of tissue microarray of ESCC detected by QPCR FADS2 and ESCC mRNA in 70 cases of carcinoma adjacent to normal phase The expression of mucosal tissues; was detected by FADS2 immunohistochemical method in 299 ESCC tissue microarray expression levels, and to analyze the correlation between FADS2 expression and clinicopathological characteristics and prognosis of ESCC patients. The lentiviral packaging system FADS2 expression plasmids were transfected into KYSE30 and KYSE510 in esophageal carcinoma cell lines. Select the stable expression of FADS2 cells, and QPCR and Western blot. Through the identification of cell proliferation in vitro, colony formation assay, soft agar colony formation assay, migration assay and invasion assay of FADS2 on cell growth, colony formation, migration and invasion effect. The results of 1.QPCR method to detect the expression of FADS2 in food ESCC and adjacent normal mucosa tissues, the statistical results show that the FADS2 m RNA in ESCC tissues showed high expression, while in the adjacent tissues The relatively low expression, statistically significant differences in the level of organization and expression in ESCC tissues and adjacent to the (P0.05).2.IHC results in 208 cases of samples effectively, in cancer tissues of 112 cases of FADS2 protein positive expression (53.8%), 96 cases of negative expression of FADS2 protein (46.2%); 208 cases. The corresponding adjacent normal tissues, 63 cases of positive expression of FADS2 protein (30.3%), 145 cases of negative expression of FADS2 protein (69.7%), there was significant difference between the positive expression rate of FADS2 (P0.05). By statistical analysis, found that the high expression of FADS2 in patients with lymph node metastasis and clinical stage (P0.05), but with age, gender, tumor differentiation and invasion were not found to have significant correlation (P0.05).Kaplan-Meier analysis showed that FADS2 high expression group (n=79) and normal group (n=129) and the expression of the survival curves were significantly different in patients with high FADS2 expression in The survival time of 18 months, FADS2 normal expression of the median survival time of patients 27 months, there was significant difference between the two groups (P0.05).3. cell function by in vitro experiments, we found that overexpression of FADS2 gene in esophageal cancer cell lines KYSE30 and KYSE510 proliferation, anchorage clone formation ability enhancement; at the same time, cell migration assay and invasion assay showed that FADS2 could promote cell migration and invasion. Conclusion 1.FADS2 showed positive expression in esophageal squamous cell carcinoma, and the expression in cancer tissues was higher than that of corresponding adjacent tissues, the high expression of staging and lymph node metastasis and clinical patients, high expression of.2.FADS2 important factors of poor prognosis the cause of tumor cell proliferation, migration, invasion and non anchored clone formation ability.

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.1

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本文編號：1623587