本文選題：膀胱癌　切入點：Cx43　出處：《承德醫(yī)學院》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：第一部分Cx43在膀胱尿路上皮癌組織中的表達目的:探討膀胱腫瘤組織及癌旁組織標本中Cx43基因及蛋白表達有無變化。方法:隨機選取2014年6月至2015年9月間,承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院泌尿外科膀胱癌開放手術(shù)患者膀胱癌組織52例及32例癌旁組織,用免疫組化的方法檢驗膀胱癌組織和癌旁組織中Cx43蛋白的變化。從上述標本中選取了12對膀胱腫瘤組織(tumor組)及其癌旁組織(control組),通過RT-PCR和免疫印跡方法檢測兩組中Cx43的m RNA和蛋白的變化。通過免疫組化結(jié)果與臨床病理資料結(jié)合分析Cx43與腫瘤的相關(guān)性。結(jié)果:1.膀胱腫瘤組織中Cx43在基因和蛋白水平的表達明顯較癌旁組織中高(P0.01)。2.免疫組化顯示Cx43主要定位于胞漿中,腫瘤組織中染色明顯較癌旁組織強(P0.05)。3.臨床病理分析提示,高表達的Cx43往往聯(lián)系著高級別膀胱癌(P0.05)結(jié)論:Cx43在膀胱腫瘤組織中表達增加且與高級別的膀胱腫瘤有關(guān)。第二部分Cx43在膀胱癌細胞中對順鉑抗腫瘤作用的影響研究目的:探討利用RNA干擾技術(shù)沉默膀胱癌5637細胞株Cx43蛋白的表達對順鉑化療敏感性的影響。方法:體外培養(yǎng)膀胱癌5637細胞和正常尿路上皮SV-HUC-1細胞,采用蛋白質(zhì)印跡法檢測膀胱癌5637細胞系和正常尿路上皮SV-HUC-1細胞中Cx43蛋白的表達,應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測膀胱癌5637細胞系中Cx43蛋白的定位。利用RNA干擾技術(shù)沉默膀胱腫瘤5637細胞株Cx43蛋白的表達并用順鉑(3ug/ml)處理Si RNA-Cx43組(實驗組)和Si RNA-Control(對照組)后,通過CCK-8檢測實驗組、對照組及野生型5637細胞的增殖情況;利用流式細胞術(shù)檢測兩組癌細胞的凋亡;利用蛋白質(zhì)印跡法檢測順鉑處理后野生型5637細胞后細胞中Cx43、Cleaved caspase-3的表達及實驗組和對照組中Cx43、Cleaved caspase-3和Bcl-2的表達。結(jié)果:膀胱癌5637細胞中的Cx43表達較正常尿路上皮細胞高(P=0.019),免疫熒光檢測Cx43定位主要在細胞質(zhì)中。CCK-8結(jié)果顯示:膀胱癌5637細胞隨著順鉑藥物的濃度(0.75ug/ml、1.5ug/ml、3ug/ml、6ug/ml)和時間(0天、1天、2天、3天)的增加,細胞的增殖減少;Si RNA-Cx43組增殖較Si RNA-Control組明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義,F=9.949,P=0.02。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示,實驗組和對照組凋亡率分別為(63±4.58)%和(34.33±6.03)%,差別有統(tǒng)計學意義,P0.01。蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示,5637細胞隨著藥物(順鉑3ug/ml)作用時間增加,Cx43蛋白的表達逐漸降低,(P0.001),而Cleaved caspase-3逐漸升高。順鉑(3ug/ml,4h)處理實驗組和對照組后,實驗組和對照組相比Cleaved caspase-3明顯升高(P=0.001),而BCL-2較對照組降低(P=0.005)。結(jié)論:沉默膀胱癌5637細胞中Cx43蛋白表達能提高順鉑的敏感性,可能與反常定位于細胞質(zhì)中的Cx43參與線粒體介導的凋亡途徑有關(guān)。第三部分Cx43通過激活MAPK通路促進膀胱腫瘤細胞的進展目的:探討過表達Cx43和敲低Cx43對膀胱腫瘤5637細胞的作用及相關(guān)機制。方法:在膀胱腫瘤5637細胞上建立過表達Cx43穩(wěn)定株。應(yīng)用CCK-8實驗方法檢測Cx43過表達組及對照組的增殖能力,利用流式細胞術(shù)方法檢測器細胞周期和凋亡情況,免疫印跡檢測MAPK相關(guān)蛋白變化。利用si RNA干擾Cx43在腫瘤細胞中的表達,利用上述方法予以確認。結(jié)果:通過CCK-8實驗顯示,過表達Cx43組的增殖能力較對照組明顯增加(P0.01),而小干擾實驗組則表現(xiàn)相反的結(jié)果(P0.01)。流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),過表達Cx43組中腫瘤細胞凋亡明顯低于對照組,但在小干擾實驗組中,敲低Cx43表達可戲劇性的增加凋亡的比例。細胞周期實驗顯示,敲低Cx43的表達可以使細胞周期阻滯在G2-M期。免疫印跡顯示:Cx43的過表達能激活MAPK信號途徑,增加JNK和ERK的表達,尤其是磷酸化后的水平,而敲低Cx43后則出現(xiàn)與之相反的結(jié)果。結(jié)論:Cx43蛋白表達的改變可影響腫瘤細胞的增殖和凋亡,其機制可能與MAPK信號調(diào)控有關(guān)。
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【學位授予單位】：承德醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.14

【參考文獻】

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本文編號：1615289