本文選題：PRDX2　切入點(diǎn)：血管生成擬態(tài)　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分結(jié)直腸癌組織中PRDX2與血管生成擬態(tài)的表達(dá)及臨床意義目的:探討結(jié)直腸癌組織中PRDX2與血管生成擬態(tài)及相關(guān)因子的表達(dá)及其臨床意義。方法:1.免疫組織化學(xué)法檢測70例結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織PRDX2與VM相關(guān)因子VEGFR2、MMP-2、LN-5γ2蛋白的表達(dá),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析PRDX2與VEGFR2、MMP-2、LN-5γ2蛋白表達(dá)的相關(guān)性。2.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析PRDX2、VEGFR2、MMP-2及LN-5γ2蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征之間的相關(guān)性。3.CD34/PAS免疫組化雙重染色法檢測70例結(jié)直腸癌組織VM的表達(dá),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析VM形成與PRDX2蛋白表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果:1.PRDX2、VEGFR2、MMP-2及LN-5γ2蛋白表達(dá)在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)顯著的高于癌旁正常組織(P0.05);PRDX2蛋白表達(dá)與VEGFR2、MMP-2及LN-5γ2蛋白表達(dá)成正相關(guān)(P0.05)。2.PRDX2、VEGFR2、MMP-2及LN-5γ2蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌的臨床TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)(P0.05);MMP-2和LN-5γ2蛋白的表達(dá)與腫瘤分化程度有相關(guān)(P0.05),PRDX2和VEGFR2蛋白的表達(dá)與腫瘤分化程度無明顯相關(guān)(P0.05);PRDX2、VEGFR2、MMP-2及LN-5γ2蛋白表達(dá)與患者的年齡、性別和腫瘤大小程度均無明顯相關(guān)(P0.05)。3.70例患者的結(jié)直腸癌組織中16例VM陽性表達(dá),VM陽性表達(dá)率為22.86%(16/70),PRDX2蛋白表達(dá)與VM表達(dá)成正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論:結(jié)直腸癌組織中PRDX2與VM相關(guān)因子VEGFR2、MMP-2及LN-5γ2蛋白表達(dá)高于癌旁正常組織,且PRDX2與VM相關(guān)因子蛋白表達(dá)間有相關(guān)性;PRDX2、VEGFR2、MMP-2及LN-5γ2蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌患者不良的臨床病理特征有相關(guān)性;結(jié)直腸癌組織中PRDX2蛋白表達(dá)與VM的形成有關(guān)。第二部分結(jié)直腸癌細(xì)胞中PRDX2對血管生成擬態(tài)的影響及其意義目的:研究PRDX2對結(jié)直腸癌細(xì)胞VM形成的影響及其意義。方法:1.采用細(xì)胞體外三維培養(yǎng)檢測結(jié)腸癌細(xì)胞VM形成能力。2.PRDX2干擾慢病毒及陰性對照慢病毒分別轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞后,使用Real-Time PCR和WB檢測PRDX2 m RNA和蛋白表達(dá)的干擾效果。3.外源性VEGF誘導(dǎo)以模擬腫瘤微環(huán)境,細(xì)胞體外三維培養(yǎng)檢測PRDX2干擾慢病毒組及陰性對照組HCT116細(xì)胞VM形成變化情況。4.外源性VEGF誘導(dǎo)后采用Transwell小室遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)檢測PRDX2干擾慢病毒組及陰性對照組HCT116細(xì)胞遷移及侵襲變化情況。5.使用Real-Time PCR及WB法檢測干擾PRDX2后對HCT116細(xì)胞VM形成相關(guān)因子表達(dá)的影響。6.使用裸鼠皮下移植瘤模型,觀察干擾PRDX2后HCT116細(xì)胞皮下移植瘤生長變化情況;使用裸鼠肺轉(zhuǎn)移瘤模型,觀察干擾PRDX2后HCT116細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移變化情況。結(jié)果:1.與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC對照比較,三株人結(jié)腸癌細(xì)胞株中只有分化程度較低的HCT116細(xì)胞株能夠形成VM管樣結(jié)構(gòu)。2.同陰性對照組、親本空白對照組分別比較,PRDX2干擾組HCT116細(xì)胞PRDX2 m RNA和蛋白表達(dá)的水平均明顯下降(P0.05)。3.VEGF誘導(dǎo)后HCT116細(xì)胞VM形成能力增強(qiáng)(P0.05);PRDX2干擾后HCT116細(xì)胞VM的形成能力明顯下降(P0.05)。4.VEGF誘導(dǎo)后HCT116細(xì)胞遷移及侵襲能力增強(qiáng)(P0.05);PRDX2干擾后HCT116細(xì)胞遷移及侵襲明顯下降(P0.05)。5.干擾PRDX2后HCT116細(xì)胞VEGFR2蛋白表達(dá)水平無明顯變化(P0.05);p-VEGFR2蛋白表達(dá)水平隨著VEGF誘導(dǎo)時(shí)間均逐漸增高,PRDX2干擾后p-VEGFR2蛋白表達(dá)水平與相應(yīng)的對照組比較明顯降低(P0.05)。VEGF誘導(dǎo)后MMP-2、MMP-9及LN-5γ2的m RNA及蛋白的表達(dá)水平增強(qiáng)(P0.05),PRDX2干擾慢病毒組MMP-2、MMP-9及LN-5γ2的m RNA及蛋白表達(dá)水平與相應(yīng)陰性對照組比較明顯減弱(P0.05)。6.PRDX2干擾后裸鼠皮下移植瘤平均體積(0.82±0.11cm3)和肺轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)目(27.13±3.55個(gè))分別低于陰性對照組皮下移植瘤平均體積(1.43±0.17 cm3)和肺轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)目(43.62±5.81個(gè))(P0.05),干擾PRDX2能抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長與轉(zhuǎn)移。結(jié)論:PRDX2能促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的VM形成,結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移、侵襲力隨之增強(qiáng),進(jìn)而增強(qiáng)了結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長與轉(zhuǎn)移能力。第三部分PRDX2通過ERK1/2通路調(diào)控結(jié)直腸癌血管生成擬態(tài)的機(jī)制研究目的:研究ERK1/2通路在PRDX2調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞VM形成中的作用及機(jī)制。方法:1.外源性VEGF誘導(dǎo),使用WB檢測干擾PRDX2對HCT116細(xì)胞中ERK1/2與p-ERK1/2蛋白表達(dá)變化情況的影響。2.使用ERK1/2通路抑制劑PD98059干預(yù),外源性VEGF誘導(dǎo)后細(xì)胞體外三維培養(yǎng)檢測HCT116細(xì)胞VM形成變化情況。3.使用ERK1/2通路抑制劑PD98059干預(yù),外源性VEGF誘導(dǎo),使用Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)、侵襲實(shí)驗(yàn),檢測HCT116細(xì)胞遷移及侵襲力變化情況。4.使用Real-Time PCR及WB法,檢測ERK1/2通路抑制劑PD98059干預(yù)后HCT116細(xì)胞VM相關(guān)的因子m RNA及蛋白表達(dá)的變化情況。5.使用免疫組化法檢測動物皮下移植瘤中干擾PRDX2后VM形成相關(guān)因子MMP-2、MMP-9及LN-5γ2蛋白表達(dá)的變化情況。結(jié)果:1.干擾PRDX2后HCT116細(xì)胞中ERK1/2蛋白的表達(dá)水平無明顯變異(P0.05);p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平隨著VEGF誘導(dǎo)時(shí)間均逐漸增高,PRDX2干擾后p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平較陰性對照組比較明顯降低(P0.05),PRDX2對結(jié)直腸癌VM形成的調(diào)控可能與ERK1/2通路有關(guān)。2.ERK1/2通路抑制劑PD98059干預(yù)后,與相應(yīng)陰性對照組比較,HCT116細(xì)胞后VM的形成能力明顯的減弱(P0.05)。3.ERK1/2通路抑制劑PD98059干預(yù)后,與相應(yīng)陰性對照組比較,HCT116后細(xì)胞遷移及侵襲力明顯的減弱(P0.05)。4.ERK1/2通路抑制劑PD98059干預(yù)后,與相應(yīng)陰性對照組比較,VM形成相關(guān)因子MMP-2、MMP-9及LN-5γ2的m RNA及蛋白表達(dá)明顯的減弱(P0.05)。5.干擾PRDX2后裸鼠皮下移植瘤組織中PRDX2、MMP-2、MMP-9及LN-5γ2的表達(dá)與對照組相比較明顯減弱(P0.05)。結(jié)論:PRDX2可能通過激活ERK1/2通路促進(jìn)結(jié)直腸癌VM形成;干擾PRDX2能抑制結(jié)直腸癌ERK1/2通路激活,降低VM形成相關(guān)因子的表達(dá),從而抑制VM形成及結(jié)直癌細(xì)胞的生長與轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

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本文編號：1606080