本文選題：ST6Gal-I　切入點(diǎn)：肝癌β-catenin　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：原發(fā)性肝癌是常見的惡性腫瘤,盡管醫(yī)療水平不斷提高,但其仍然是全球第五位最常見的惡性腫瘤。目前,甲胎蛋白(AFP)仍是肝癌早期診斷中最常用的腫瘤標(biāo)志物,但僅有30%-40%的患者能夠被診斷出來,治療方式主要通過手術(shù)切除、肝移植和介入。由此可見,僅將AFP作為HCC的診斷標(biāo)志物具有很大局限性,因此,分析肝癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)分子機(jī)制,尋求新的肝癌早期診斷生化指標(biāo),對(duì)改善肝癌患者的診斷治療具有重要意義。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),聚糖在結(jié)構(gòu)和表達(dá)水平上的改變與腫瘤細(xì)胞間增殖轉(zhuǎn)移的關(guān)系密切。唾液酸是一種帶有負(fù)電荷的九碳單糖,位于糖蛋白和糖脂的寡糖鏈末端。由于其末端定位性和帶負(fù)電荷性,使糖鏈的唾液酸修飾在細(xì)胞行為學(xué)中發(fā)揮重要作用。唾液酸可與次末端的半乳糖、N-乙酰半乳糖胺或糖鏈上的其他唾液酸以ɑ2,3-、ɑ2,6-或ɑ2,8-方式連接,分別由相應(yīng)的唾液酸轉(zhuǎn)移酶(sialyltransferases,STs)催化反應(yīng)。唾液酰基轉(zhuǎn)移酶ST6Gal-I能夠通過催化唾液�；苌颪eu5Ac與CMP結(jié)合形成CMP-Neu5Ac的底物,通過α2,6糖苷鍵形式與N-聚糖外側(cè)Galβ1-3Glc NAc的二糖單位連接。α2,6唾液酸在不同腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)量不同,相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),唾液酸化糖鏈結(jié)構(gòu)的異常改變可促使細(xì)胞發(fā)生癌變。在很多腫瘤組織和細(xì)胞中,ST6Gal-I的表達(dá)均較高,例如結(jié)腸癌、宮頸癌、絨毛膜癌、急性髓性白血病、胃癌以及乳腺癌等。本課題組通過前期研究得知,ST6Gal-I能夠正性介導(dǎo)小鼠肝癌細(xì)胞的惡性表型。然而,ST6Gal-I在人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖中的作用及分子機(jī)制研究尚不完全明確。目的:1.檢測(cè)ST6Gal-I在不同臨床分期肝癌組織中的表達(dá)差異性、以及患者術(shù)后隨訪資料相關(guān)性和生存率分析;2.檢測(cè)ST6Gal-I在肝癌細(xì)胞系的表達(dá)及定位情況,并篩選獲得ST6Gal-I穩(wěn)定上調(diào)的Huh-7單克隆細(xì)胞株;3.體外實(shí)驗(yàn)細(xì)胞水平檢測(cè)上調(diào)/下調(diào)ST6Gal-I對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移以及侵襲能力的影響;4.運(yùn)用小鼠肝癌模型建立和裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ST6Gal-I在肝癌模型建立過程中的表達(dá)變化以及其對(duì)體內(nèi)成瘤能力的影響;5.探討ST6Gal-I調(diào)控肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移以及侵襲的分子機(jī)制。方法:1.免疫組織化學(xué)方法(IHC)檢測(cè)在正常肝組織,以及不同臨床分期肝癌組織中ST6Gal-I的表達(dá)差異;2.運(yùn)用Pearson’s chi-squared和Kaplan Meier Kaplan Meier統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析ST6Gal-I的表達(dá)差異與術(shù)后隨訪臨床資料相關(guān)性以及肝癌患者愈后生存率的相關(guān)性;3.Real-time PCR、Western-blot和免疫熒光細(xì)胞化學(xué)分別檢測(cè)ST6Gal-I在人正常肝細(xì)胞系和肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)及定位情況;4.脂質(zhì)體法將pc DNA3.1/ST6Gal-I質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到Huh-7細(xì)胞株中,通過G418和有限稀釋法篩選得到穩(wěn)定過表達(dá)ST6Gal-I的人肝癌Huh-7單克隆細(xì)胞株;q PCR、Western Blot、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ST6Gal-I在穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞Huh-7/ST6Gal-I中的表達(dá)情況;5.軟瓊脂克隆形成、cck-8、流式細(xì)胞術(shù)、劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell分別檢測(cè)上調(diào)/下調(diào)ST6Gal-I的表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、遷移和侵襲能力的影響;6.裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)低表達(dá)ST6Gal-I后對(duì)肝癌細(xì)胞在體內(nèi)成瘤能力的影響;7.利用DEN聯(lián)合CCl4/乙醇誘導(dǎo)構(gòu)建小鼠肝癌模型,通過免疫組化和Western Blot方法檢測(cè)在此過程中ST6Gal-I的表達(dá)差異;8.Western Blot和共聚焦免疫熒光細(xì)胞化學(xué)分析過表達(dá)/低表達(dá)ST6Gal-I對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白分子的影響。結(jié)果:1.與癌旁組織相比,肝癌組織中的ST6Gal-I的表達(dá)較高;2.高表達(dá)ST6Gal-I與肝癌患者的性別、腫瘤數(shù)目、病理分級(jí)以及患者生存率有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;3.免疫細(xì)胞熒光化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),ST6Gal-I在核周高爾基體內(nèi)表達(dá)較多,且在Huh-7細(xì)胞中表達(dá)最低,在MHCC97-H細(xì)胞中表達(dá)最高;4.上調(diào)/下調(diào)ST6Gal-I后可明顯促進(jìn)/抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力;5.與對(duì)照組相比,下調(diào)ST6Gal-I的表達(dá)后,裸鼠體內(nèi)的成瘤率能力明顯降低,瘤重和瘤體積也明顯減小;6.隨著肝癌模型的形成,小鼠肝癌組織中ST6Gal-I的表達(dá)逐漸增強(qiáng);7.上調(diào)/下調(diào)ST6Gal-I可增強(qiáng)/抑制β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、TCF1、TCF4和Cyclin D1等蛋白水平。結(jié)論:1.ST6Gal-I在肝癌組織中表達(dá)較高,高表達(dá)的ST6Gal-I與患者性別、腫瘤數(shù)目以及病理分級(jí)密切相關(guān),且ST6Gal-I的高表達(dá)提示肝癌患者的低生存率;2.篩選得到穩(wěn)定高表達(dá)ST6Gal-I的單克隆Huh-7細(xì)胞株,并用實(shí)驗(yàn)室保存的下調(diào)ST6Gal-I的單克隆細(xì)胞株MHCC97-H/sh ST6Gal-I,通過體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)證明,ST6Gal-I表達(dá)上調(diào)/下調(diào)可促進(jìn)/抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力;3.上調(diào)/下調(diào)ST6Gal-I可通過激活/抑制Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)來影響肝癌的發(fā)生發(fā)展。
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【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張嘉寧;汪淑晶;;唾液酸生物學(xué)與人類健康和疾病[J];生命科學(xué);2011年07期

2 Terence CW Poon;Clarissa HS Chiu;Paul BS Lai;Tony SK Mok;Benny Zee;Anthony TC Chan;Joseph JY Sung;Philip J Johnson;;Correlation and prognostic significance of beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase and serum monosialylated alpha-fetoprotein in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2005年42期

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本文編號(hào)：1599594