本文選題：smad3　切入點：順鉑　出處：《華中科技大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：研究smad3在肝癌對順鉑化療敏感性中的作用方法：建立過表達和低表達smad3的肝癌細胞,利用CCK-8、平板克隆形成實驗、細胞凋亡實驗、小鼠皮下移植瘤模型和免疫組化從體內(nèi)和體外兩個方面檢測肝癌細胞對順鉑的化療敏感性,利用western blot檢測肝癌細胞smad3下游靶基因的變化。結(jié)果：成功構(gòu)建了過表達smad3的肝癌細胞7721-smad3和低表達smad3的肝癌細胞LM3-shsmad3;高表達smad3的肝癌細胞系對順鉑的化療敏感性增加；順鉑抑制高表達smad3肝癌細胞皮下移植瘤的生長；高表達smad3的肝癌細胞在順鉑的作用下上調(diào)p21cip1和下調(diào)c-myc, cyclinD 1, bcl2的表達。結(jié)論：smad3通過上調(diào)p21Cip1和下調(diào)c-myc, bcl2, cyclinD1來增加肝癌細胞對順鉑的化療敏感性。這一發(fā)現(xiàn)為肝癌的生物學分層和肝癌的個體化治療提供了新的理論依據(jù)。目的：研究非smad通路在smad3增加肝癌化療敏感性中的作用方法：利用TGFβ1和各種小分子抑制劑檢測smad3與非smad通路之間的關(guān)系；利用western blot檢測順鉑處理肝癌細胞后非smad通路的變化；用順鉑和PI3K/AKT抑制劑處理SMMC-7721和HCC-LM3細胞后,利用CCK8,平板克隆形成實驗檢測細胞增殖能力,利用western檢測smad3下游轉(zhuǎn)錄因子的表達,評價LY294002在低表達smad3誘導的順鉑耐藥中的作用。結(jié)果：過表達smad3增加了ERK,JNK,p38的磷酸化水平,降低了AKT的磷酸化水平；smad3低表達通過誘導AKT磷酸化增加肝癌對順鉑的耐藥；LY294002顯著增加smad3低表達細胞中順鉑誘導的細胞凋亡,這一作用在smad3高表達細胞中并不明顯；LY294002和順鉑發(fā)揮協(xié)同作用下調(diào)c-myc, cyclinD1, bcl2和上調(diào)p21Cip1的表達。結(jié)論：smad3通過抑制AKT磷酸化增加肝癌對順鉑的化療敏感性,順鉑和LY294002聯(lián)合應用恢復了smad3缺失細胞對順鉑的化療敏感性,這一結(jié)果為常規(guī)化療藥物和分子靶向藥物的聯(lián)合應用提供了新的理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to study the role of smad3 in the chemosensitivity of hepatocellular carcinoma to cisplatin. Methods: the overexpression and low expression of smad3 were established in HCC cells. In vivo and in vitro, the chemosensitivity of hepatoma cells to cisplatin was detected in mice subcutaneous transplanted tumor model and immunohistochemistry. Results: hepatoma cells 7721-smad3 and LM3-shsmad3, which overexpressed smad3 and LM3-shsmad3, were successfully constructed and the chemosensitivity to cisplatin was increased in hepatoma cells with high expression of smad3. Cisplatin inhibited the growth of subcutaneous xenografts of hepatoma cells with high expression of smad3. Overexpression of smad3 in hepatoma cells induced by cisplatin up-regulates p21cip1 and down-regulates the expression of c-myc, cyclinD1, bcl2. Conclusion: Smad3 can increase the chemosensitivity of hepatoma cells to cisplatin by upregulating p21Cip1 and down-regulating c-myc, bcl2, cyclinD1. Objective: to study the role of non smad pathway in increasing the chemosensitivity of hepatocellular carcinoma (HCC) by smad3. Methods: TGF 尾 1 and various small molecular inhibitors were used to detect the relationship between smad3 and non smad pathway. Western blot was used to detect the changes of non-#en2# pathway in hepatoma cells treated with cisplatin and PI3K/AKT inhibitor, then CCK8 was used to detect the proliferation of SMMC-7721 and HCC-LM3 cells, and western was used to detect the expression of transcription factors downstream of smad3. To evaluate the role of LY294002 in cisplatin resistance induced by low expression of smad3. Results: overexpression of smad3 increased the phosphorylation level of ERKN JNKP38. Decreased the phosphorylation level of AKT and the low expression of smad3 increased the apoptosis induced by cisplatin in low expression smad3 cells by inducing AKT phosphorylation to increase the resistance of hepatocarcinoma to cisplatin. This effect is not obvious in smad3 overexpression cells. LY294002 and cisplatin play a synergistic role in down-regulating the expression of c-myc, cyclin D1, bcl2 and p21Cip1.Conclusion the chemosensitivity of liver cancer to cisplatin is increased by inhibiting AKT phosphorylation. The combination of cisplatin and LY294002 restored the chemosensitivity of smad3 deletion cells to cisplatin, which provided a new theoretical basis for the combination of conventional chemotherapeutic drugs and molecular targeted drugs.
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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本文編號：1594021