本文選題：微循環(huán)　切入點：肝癌　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分地塞米松對肝癌微循環(huán)功能的影響目的：研究糖皮質(zhì)激素地塞米松(Dexamethasone, Dex)對肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma)腫瘤的生長和活體微循環(huán)功能的影響。方法：構(gòu)建轉(zhuǎn)基因裸鼠原位肝癌模型,通過活體顯微觀測系統(tǒng)檢測地塞米松(Dex)對肝癌小鼠腫瘤生長的影響,觀察肝癌表面微血管生成的變化。采用肝癌H22誘導(dǎo)金黃地鼠頰囊產(chǎn)生腫瘤,構(gòu)建肝癌腫瘤模型,觀察Dex對腫瘤微循環(huán)功能的影響,檢測包括腫瘤的生長大小、微血管迂曲度、微血管面積密度及血流量,統(tǒng)計數(shù)據(jù),并進行定量分析。結(jié)果：(1)裸鼠原位肝癌：為了研究Dex對小鼠肝癌微循環(huán)功能的影響,接種綠色熒光蛋白GFP標(biāo)記的HepG2-GFP肝癌細胞至BALB/c-nu裸鼠肝臟表面,構(gòu)建轉(zhuǎn)基因裸鼠原位肝癌模型。實驗分組為Dex藥物組,注射劑量2.5 μg/g,對照組為生理鹽水,每組10只小鼠,治療16天。結(jié)果顯示,兩組小鼠體重較實驗前分別增加了21%,1%；每2天統(tǒng)計腫瘤增殖情況,制作生長曲線圖,結(jié)果顯示Dex組比對照組的腫瘤生長面積較小(P0.05),熒光圖像結(jié)果顯示Dex組腫瘤血管平均總長度較對照組小,約為對照組的22%(1159±1227 pixel vs 5177±2840 pixel, P 0.01)。實驗結(jié)束后處死小鼠,腫瘤稱重,Dex組腫瘤的重量較對照組小(0.0161±0.0083 g vs 0.0297±0.0085 g, P 0.05),抑瘤率達到了45.8%,表明Dex對小鼠原位肝癌腫瘤的生長和血管生成均起到了抑制作用。(2)金黃地鼠頰囊肝癌實驗：接種肝癌H22細胞至3-4周齡的金黃地鼠頰囊處,接種第三天給予藥物治療,實驗分組：對照組生理鹽水；Dex組25μg/g; Dex+拮抗劑組；單獨拮抗劑組。分別觀察在3,5,7天的腫瘤生長大小和微循環(huán)功能變化。結(jié)果顯示,Dex單獨治療組腫瘤的大小在第5和7天均較對照組明顯降低(P0.05),Dex+拮抗劑組、單獨拮抗劑組與對照組比較無顯著差異。多普勒激光掃描系統(tǒng)分析腫瘤表面血流量的變化,結(jié)果顯示Dex組與對照組比較,在第5天和第7天血流量較低(P0.05)；圖像分析結(jié)果顯示,Dex組的微血管迂曲度在第5天和第7天,比對照組較小(P0.05),而其余兩組與對照組相比無顯著差異。實驗第5天,結(jié)果顯示Dex組的微血管面積密度為(13.38±1.898% vs 20.39±2.573%,P0.05)比對照組較小,其余兩組微血管面積密度與對照組相比無顯著差異。結(jié)論：地塞米松對肝癌HepG2-GFP誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因裸鼠原位肝癌具有抑制腫瘤生長的作用,并抑制肝癌腫瘤的血管生成。地塞米松對H22誘導(dǎo)的金黃地鼠頰囊肝癌腫瘤生長起到抑制作用,在接種后的第5天,第7天表現(xiàn)出微血管的迂曲度的改善、微血管面積密度的降低和腫瘤表面血流量的降低。第二部分地塞米松對肝癌糖異生和血管生成的影響及機制研究目的：研究Dex對肝癌腫瘤生長、糖異生和血管生成的影響,探討其潛在的分子作用調(diào)控機制。方法：分別培養(yǎng)肝癌H22細胞與小鼠正常的肝細胞NCTC-1469, Western blot檢測兩種細胞內(nèi)促進糖異生的關(guān)鍵酶肝癌PEPCK和G6Pase的表達水平。H22細胞經(jīng)不同濃度的Dex (0,0.1,1,10μM)處理一周后,采用Western blot檢測PEPCK和G6Pase兩種酶的蛋白表達水平。收集H22被Dex處理一周后的培養(yǎng)上清液,干預(yù)HUVECs的生長。采用遷移實驗、成管實驗、Transwell通透性實驗,分別檢測這些培養(yǎng)上清液對HUVECs遷移能力、成管能力、單層細胞通透性能力的影響。接種H22至BALB/c小鼠皮下,構(gòu)建小鼠肝癌移植瘤模型。四天后,分別給予不同劑量的Dex藥物0 μg/g,2.5 μg/g,5 μg/g治療小鼠16天(n=7),統(tǒng)計腫瘤生長曲線,實驗結(jié)束后處死小鼠,采用免疫組化實驗檢測Dex對小鼠肝癌腫瘤糖異生功能和血管生成的影響,檢測組織內(nèi)促進糖異生的關(guān)鍵性酶PEPCK、 G6Pase、11β-HSD1和11β-HSD2的表達水平,并檢測腫瘤組織內(nèi)CD31的表達水平。結(jié)果：實驗結(jié)果表明,與小鼠正常肝細胞NCTC-1469相比,PEPCK和G6Pase這兩種調(diào)控糖異生的酶在小鼠肝癌H22細胞中表達幾乎是缺失的(P0.01)。Dex處理H22一周后,細胞內(nèi)PEPCK和G6Pase這兩種酶的表達量顯著上調(diào)(P0.01),結(jié)果表明Dex能促進肝癌H22細胞內(nèi)的糖異生過程。培養(yǎng)人的臍靜脈內(nèi)皮細胞至匯合狀態(tài),將Dex處理后的H22上清液與內(nèi)皮細胞進行共培養(yǎng),結(jié)果顯示培養(yǎng)上清液中的Dex對HUVECs的促遷移、促成管能力均顯示降低(P0.05,P0.05),并對內(nèi)皮細胞的單層通透性產(chǎn)生影響(P0.05)。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示,Dex治療組的小鼠腫瘤組織內(nèi),PEPCK和G6Pase表達量高于0 μg/g對照組(P0.01);調(diào)控糖異生過程的另外兩種關(guān)鍵性酶11β-HSDs的異常表達情況也得以恢復(fù),表明Dex促進小鼠肝癌腫瘤內(nèi)糖異生功能。CD31的免疫組化實驗結(jié)果顯示,Dex治療組的腫瘤內(nèi)微血管密度低于對照組(P0.05),表明Dex抑制小鼠肝癌腫瘤內(nèi)的血管生成。結(jié)論：Dex抑制小鼠肝癌腫瘤的生長和血管生成,其調(diào)控機制可能是通過促進腫瘤細胞內(nèi)的糖異生途徑對肝癌小鼠的血管生成產(chǎn)生影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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本文編號：1586101