本文選題：膀胱尿路上皮癌　切入點(diǎn)：基因芯片　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過基因芯片篩查膀胱癌組織及癌旁正常組織中l(wèi)nc RNA及m RNA的差異表達(dá),發(fā)現(xiàn)與膀胱癌發(fā)病相關(guān)的lnc RNA及m RNA,分析差異表達(dá)基因的生物學(xué)功能;對篩選到的差異表達(dá)基因lnc RNA-n336928及SPP1在大樣本的膀胱癌患者組織中進(jìn)行驗證,并分析其與膀胱癌患者臨床病理相關(guān)指標(biāo)及預(yù)后的相關(guān)性;體外實驗明確lnc RNA-n336928在膀胱癌發(fā)生進(jìn)展中的作用,并探討相關(guān)的分子機(jī)制方法:采用基因芯片的方法檢測3例膀胱癌組織及對應(yīng)的癌旁正常組織中l(wèi)nc RNA與m RNA的表達(dá)情況,并對芯片結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,確定膀胱癌組織及癌旁正常組織lnc RNA與m RNA的差異表達(dá)譜,并采用q RT-PCR的方法進(jìn)行驗證,對差異表達(dá)基因進(jìn)行富集分析及GO分析,預(yù)測差異表達(dá)基因的生物學(xué)功能;在95例膀胱癌組織及癌旁正常組織中采用q RT-PCR的方法檢測lnc RNA-n336928及SPP1 m RNA的差異表達(dá)情況,通過卡方檢驗分析lnc RNA-n336928及SPP1 m RNA的表達(dá)量與膀胱癌患者臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性,通過Kaplan-Meier生存曲線及COX比例風(fēng)險回歸模型分析lnc RNA-n336928及SPP1 m RNA的表達(dá)量與入組膀胱癌患者5年生存率的關(guān)系,通過sperman相關(guān)分析明確lnc RNA-n336928與SPP1 m RNA表達(dá)的相關(guān)性;q RT-PCR檢測評估膀胱癌不同細(xì)胞系中l(wèi)nc RNA-n336928的表達(dá)情況,體外實驗干擾lnc RNA-n336928在膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá),采用CCK-8及Brdu實驗檢測lnc RNA-n336928對膀胱癌細(xì)胞增殖的影響,采用細(xì)胞劃痕實驗及transwell侵襲實驗檢測lnc RNA-n336928對膀胱癌細(xì)胞遷移侵襲的影響,通過q RT-PCR及westernblot檢測lnc RNA-n336928表達(dá)改變后SPP1 m RNA及蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果:基因芯片發(fā)現(xiàn)膀胱癌組織及癌旁正常組織存在lnc RNA和m RNA的差異表達(dá),差異表達(dá)基因主要參與到PI3K-AKT,focal adhesion,ECM-receptor信號通路中;lnc RNA-n336928及SPP1 m RNA在膀胱癌組織中的表達(dá)量明顯高于癌旁正常組織,且與膀胱癌患者臨床分級、病理分級密切相關(guān),與腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、患者年齡、性別及患者吸煙史沒有明顯的相關(guān)性,Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)lnc RNA-n336928高表達(dá)組患者5年生存率明顯差于lnc RNA-n336928低表達(dá)組,COX比例風(fēng)險回歸分析發(fā)現(xiàn)lnc RNA-n336928可能為膀胱癌患者不良預(yù)后的獨(dú)立影響因子,而SPP1 m RNA的表達(dá)量與患者的5年生存率沒有明顯的相關(guān)性;CCK-8及Brdu實驗證實lnc RNA-n336928的異常表達(dá)對膀胱癌細(xì)胞的增殖能力沒有明顯的影響,細(xì)胞劃痕實驗證實異常表達(dá)的lnc RNA-n336928參與調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞的遷移,transwell侵襲實驗證實異常表達(dá)的lnc RNA-n336928參與調(diào)控膀胱癌細(xì)胞的侵襲行為,q RT-PCR及westernblot實驗證實,lnc RNA-n336928表達(dá)發(fā)生改變后,SPP1 m RNA及蛋白的表達(dá)均發(fā)生相應(yīng)的變化。結(jié)論:在膀胱癌的發(fā)生進(jìn)展過程中涉及到lncRNA表達(dá)調(diào)控的異常,lnc RNA-n336928在膀胱癌組織中異常高表達(dá),高表達(dá)的lnc RNA-n336928可能為膀胱癌患者不良預(yù)后的獨(dú)立危險因子,lnc RNA-n336928對膀胱癌細(xì)胞的增殖沒有明顯的調(diào)控作用,lnc RNA-n336928可能參與調(diào)控膀胱癌細(xì)胞的侵襲遷移,lnc RNA-n336928可能通過對SPP1的調(diào)控參與調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞的侵襲遷移。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14

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本文編號：1584429