本文選題：腎母細胞瘤　切入點：信號通路　出處：《中華腫瘤防治雜志》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的腎母細胞瘤是一種高發(fā)的兒童實體瘤,發(fā)病率占兒童惡性腫瘤8%~10%,多發(fā)生于5歲兒童,有研究表明某些信號通路可調控其增殖過程。本研究探討TGF-β和IGF-1信號通路是否共同參與調控腎母細胞瘤細胞的增殖過程。方法采用siRNA轉染實驗將TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA轉至腎母細胞瘤細胞株G401,以轉染不同siRNA分為TGFBR1-siRNA組和IGF1R-siRNA組,siRNA無關序列(non-siRNA)轉染組作為對照組,每組設6個復孔。MTS方法檢測TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA對細胞增殖率的影響,蛋白質印跡法檢測TGF-β信號通路TGFBR1及下游蛋白p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表達情況;蛋白質印跡法檢測IGF-1信號通路IGF1R及下游蛋白p-AKT蛋白表達情況。ELISA法檢測細胞上清中FGF9蛋白表達。結果抑制TGFBR1和IGF1R72和96h后,細胞的增殖率受到抑制,對照組增殖率設為100%。與其相比,轉染TGFBR1-siRNA 72h后的實驗組和對照組的增殖率分別為(80±14)%和(100±7)%,實驗組低于對照組,P=0.034;轉染IGF1R-siRNA 72h后實驗組和對照組的增值率分別為(85±21)%和(100±7)%,實驗組低于對照組,P=0.028。轉染TGFBR1-siRNA 96h后的實驗組和對照組的增殖率分別為(81±13)%和(100±11)%,實驗組低于對照組,P=0.021;轉染IGF1R-siRNA 96h后實驗組和對照組的增殖率分別為(82±17)%和(100±11)%,實驗組低于對照組,P=0.038。抑制TGFBR1后,與non-siRNA組相比,下游蛋白FGF-9、p-ERK、SMAD2/3和p-AKT明顯受到抑制。TGFBR1-siRNA轉染72h后,實驗組細胞上清中FGF9蛋白表達量顯著下降,實驗組為(533.85±54.64)ρg/mL,對照組為(587.34±46.83)ρg/mL,P=0.041;96h后實驗組FGF9蛋白表達量仍顯著低于對照組,實驗組為(495.03±59.26)ρg/mL,對照組為(605.34±49.28)ρg/mL,P=0.018。TGFBR1-siRNA轉染48h后,p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表達量出現(xiàn)降低;72h后,p-ERK和SMAD2/3蛋白表達量仍降低。與non-siRNA轉染對照組相比,IGF1R-siRNA轉染72和96h后,p-AKT蛋白表達量出現(xiàn)降低。結論TGF-β和IGF-1信號通路共同參與腎母細胞瘤細胞的增殖,兩條信號通路可能通過共同的下游蛋白AKT參與對腎母細胞瘤增殖的調控,TGFBR1和IGF1R可以作為腎母細胞瘤治療的靶點深入研究。
[Abstract]:Objective nephroblastoma is a kind of high incidence solid tumor in children. The incidence of nephroblastoma is 8% and 10% of malignant tumors in children, most of which occur in children aged 5 years. Some studies have shown that some signaling pathways can regulate the proliferation process. This study is to investigate whether TGF- 尾 and IGF-1 signaling pathways are involved in the regulation of the proliferation of nephroblastoma cells. Methods TGFBR1-siRNA and IGF1R-siRNA were transferred to the nephroblastoma cells by siRNA transfection experiment. The tumor cell line G401 was divided into two groups: TGFBR1-siRNA group and IGF1R-siRNA group. The effects of TGFBR1-siRNA and IGF1R-siRNA on cell proliferation were detected by six multiple holes. The expression of TGFBR1 and p-ERKN SMAD2 / 3 and p-AKT proteins in TGF- 尾 signaling pathway and downstream proteins were detected by Western blot. IGF-1 signaling pathway IGF1R and downstream protein p-AKT protein expression were detected by Western blot. Elisa method was used to detect the expression of FGF9 protein in the supernatant. Results after inhibiting TGFBR1 and IGF1R72 for 96 h, the cell proliferation rate was inhibited, and the control group proliferation rate was set to 100th. The proliferation rates of the experimental group and the control group were 80 鹵14% and 100 鹵7, respectively, which were lower than those of the control group after 72 hours of transfection of IGF1R-siRNA, and the proliferation rates of the experimental group and the control group were 85 鹵21% and 100 鹵7% respectively after 72 hours of IGF1R-siRNA transfection, and were lower than that of the control group after 96 h of TGFBR1-siRNA transfection. The proliferative rates of the test group and the control group were 81 鹵13% and 100 鹵11%, respectively. The proliferative rate of the experimental group was lower than that of the control group (0.021), the proliferation rate of the experimental group and the control group was 82 鹵17% and 100 鹵11% respectively after transfection of IGF1R-siRNA for 96 h, and the proliferation rate of the experimental group was lower than that of the control group (0.038%). Compared with the non-siRNA group, the expression of FGF9 protein in the supernatant of the experimental group decreased significantly 72 hours after transfection of the downstream protein FGF-9, p-ERKT, SMAD2 / 3 and p-AKT. The expression of FGF9 protein in the supernatant of the experimental group was significantly lower than that in the control group (533.85 鹵54.64) 蟻 g / mLL, and in the control group (587.34 鹵46.83) 蟻 / mLPU 0.041 and 96h after transfection, the expression of FGF9 protein in the experimental group was still significantly lower than that in the control group. The expression of p-ERK and p-AKT protein were decreased in the experimental group (495.03 鹵59.26) 蟻 g / mLand the control group (605.34 鹵49.28) 蟻 g / mLPt0.018.18 TGFBR1-siRNA transfection 48 h after transfection. Conclusion the expression of p-ERK and p-AKT protein is still decreased after 72 and 96 hours compared with the control group transfected with non-siRNA. Conclusion the expression of p-ERK and p-AKT protein is decreased after 72 and 96 hours compared with the control group transfected with non-siRNA. And IGF-1 signaling pathway involved in the proliferation of nephroblastoma cells. Two signaling pathways may be involved in the regulation of the proliferation of nephroblastoma by common downstream protein AKT. TGFBR1 and IGF1R may be used as targets for the treatment of nephroblastoma.
【作者單位】： 首都兒科研究所生物化學研究室;首都兒科研究所分子免疫研究室;
【基金】：北京市自然科學基金(7042017)
【分類號】：R737.11

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本文編號：1578945