發(fā)布時(shí)間：2018-03-07 09:51

  本文選題：腎母細(xì)胞瘤　切入點(diǎn)：信號(hào)通路　出處：《中華腫瘤防治雜志》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的腎母細(xì)胞瘤是一種高發(fā)的兒童實(shí)體瘤,發(fā)病率占兒童惡性腫瘤8%~10%,多發(fā)生于5歲兒童,有研究表明某些信號(hào)通路可調(diào)控其增殖過程。本研究探討TGF-β和IGF-1信號(hào)通路是否共同參與調(diào)控腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖過程。方法采用siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)將TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA轉(zhuǎn)至腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞株G401,以轉(zhuǎn)染不同siRNA分為TGFBR1-siRNA組和IGF1R-siRNA組,siRNA無關(guān)序列(non-siRNA)轉(zhuǎn)染組作為對照組,每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。MTS方法檢測TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA對細(xì)胞增殖率的影響,蛋白質(zhì)印跡法檢測TGF-β信號(hào)通路TGFBR1及下游蛋白p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表達(dá)情況;蛋白質(zhì)印跡法檢測IGF-1信號(hào)通路IGF1R及下游蛋白p-AKT蛋白表達(dá)情況。ELISA法檢測細(xì)胞上清中FGF9蛋白表達(dá)。結(jié)果抑制TGFBR1和IGF1R72和96h后,細(xì)胞的增殖率受到抑制,對照組增殖率設(shè)為100%。與其相比,轉(zhuǎn)染TGFBR1-siRNA 72h后的實(shí)驗(yàn)組和對照組的增殖率分別為(80±14)%和(100±7)%,實(shí)驗(yàn)組低于對照組,P=0.034;轉(zhuǎn)染IGF1R-siRNA 72h后實(shí)驗(yàn)組和對照組的增值率分別為(85±21)%和(100±7)%,實(shí)驗(yàn)組低于對照組,P=0.028。轉(zhuǎn)染TGFBR1-siRNA 96h后的實(shí)驗(yàn)組和對照組的增殖率分別為(81±13)%和(100±11)%,實(shí)驗(yàn)組低于對照組,P=0.021;轉(zhuǎn)染IGF1R-siRNA 96h后實(shí)驗(yàn)組和對照組的增殖率分別為(82±17)%和(100±11)%,實(shí)驗(yàn)組低于對照組,P=0.038。抑制TGFBR1后,與non-siRNA組相比,下游蛋白FGF-9、p-ERK、SMAD2/3和p-AKT明顯受到抑制。TGFBR1-siRNA轉(zhuǎn)染72h后,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞上清中FGF9蛋白表達(dá)量顯著下降,實(shí)驗(yàn)組為(533.85±54.64)ρg/mL,對照組為(587.34±46.83)ρg/mL,P=0.041;96h后實(shí)驗(yàn)組FGF9蛋白表達(dá)量仍顯著低于對照組,實(shí)驗(yàn)組為(495.03±59.26)ρg/mL,對照組為(605.34±49.28)ρg/mL,P=0.018。TGFBR1-siRNA轉(zhuǎn)染48h后,p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表達(dá)量出現(xiàn)降低;72h后,p-ERK和SMAD2/3蛋白表達(dá)量仍降低。與non-siRNA轉(zhuǎn)染對照組相比,IGF1R-siRNA轉(zhuǎn)染72和96h后,p-AKT蛋白表達(dá)量出現(xiàn)降低。結(jié)論TGF-β和IGF-1信號(hào)通路共同參與腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖,兩條信號(hào)通路可能通過共同的下游蛋白AKT參與對腎母細(xì)胞瘤增殖的調(diào)控,TGFBR1和IGF1R可以作為腎母細(xì)胞瘤治療的靶點(diǎn)深入研究。
[Abstract]:Objective nephroblastoma is a kind of high incidence solid tumor in children. The incidence of nephroblastoma is 8% and 10% of malignant tumors in children, most of which occur in children aged 5 years. Some studies have shown that some signaling pathways can regulate the proliferation process. This study is to investigate whether TGF- 尾 and IGF-1 signaling pathways are involved in the regulation of the proliferation of nephroblastoma cells. Methods TGFBR1-siRNA and IGF1R-siRNA were transferred to the nephroblastoma cells by siRNA transfection experiment. The tumor cell line G401 was divided into two groups: TGFBR1-siRNA group and IGF1R-siRNA group. The effects of TGFBR1-siRNA and IGF1R-siRNA on cell proliferation were detected by six multiple holes. The expression of TGFBR1 and p-ERKN SMAD2 / 3 and p-AKT proteins in TGF- 尾 signaling pathway and downstream proteins were detected by Western blot. IGF-1 signaling pathway IGF1R and downstream protein p-AKT protein expression were detected by Western blot. Elisa method was used to detect the expression of FGF9 protein in the supernatant. Results after inhibiting TGFBR1 and IGF1R72 for 96 h, the cell proliferation rate was inhibited, and the control group proliferation rate was set to 100th. The proliferation rates of the experimental group and the control group were 80 鹵14% and 100 鹵7, respectively, which were lower than those of the control group after 72 hours of transfection of IGF1R-siRNA, and the proliferation rates of the experimental group and the control group were 85 鹵21% and 100 鹵7% respectively after 72 hours of IGF1R-siRNA transfection, and were lower than that of the control group after 96 h of TGFBR1-siRNA transfection. The proliferative rates of the test group and the control group were 81 鹵13% and 100 鹵11%, respectively. The proliferative rate of the experimental group was lower than that of the control group (0.021), the proliferation rate of the experimental group and the control group was 82 鹵17% and 100 鹵11% respectively after transfection of IGF1R-siRNA for 96 h, and the proliferation rate of the experimental group was lower than that of the control group (0.038%). Compared with the non-siRNA group, the expression of FGF9 protein in the supernatant of the experimental group decreased significantly 72 hours after transfection of the downstream protein FGF-9, p-ERKT, SMAD2 / 3 and p-AKT. The expression of FGF9 protein in the supernatant of the experimental group was significantly lower than that in the control group (533.85 鹵54.64) 蟻 g / mLL, and in the control group (587.34 鹵46.83) 蟻 / mLPU 0.041 and 96h after transfection, the expression of FGF9 protein in the experimental group was still significantly lower than that in the control group. The expression of p-ERK and p-AKT protein were decreased in the experimental group (495.03 鹵59.26) 蟻 g / mLand the control group (605.34 鹵49.28) 蟻 g / mLPt0.018.18 TGFBR1-siRNA transfection 48 h after transfection. Conclusion the expression of p-ERK and p-AKT protein is still decreased after 72 and 96 hours compared with the control group transfected with non-siRNA. Conclusion the expression of p-ERK and p-AKT protein is decreased after 72 and 96 hours compared with the control group transfected with non-siRNA. And IGF-1 signaling pathway involved in the proliferation of nephroblastoma cells. Two signaling pathways may be involved in the regulation of the proliferation of nephroblastoma by common downstream protein AKT. TGFBR1 and IGF1R may be used as targets for the treatment of nephroblastoma.
【作者單位】： 首都兒科研究所生物化學(xué)研究室;首都兒科研究所分子免疫研究室;
【基金】：北京市自然科學(xué)基金(7042017)
【分類號(hào)】：R737.11

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本文編號(hào)：1578945