發(fā)布時(shí)間：2018-03-06 10:07

  本文選題：納米載體　切入點(diǎn)：普魯蘭多糖　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,且有逐年上升趨勢(shì)�；熓侵委煾伟┑某Ｓ梅椒ㄖ�,然而大部分肝癌易對(duì)化療藥物產(chǎn)生多藥耐藥性,從而嚴(yán)重限制了其在臨床上的應(yīng)用。因此,探索有效的肝癌治療策略意義重大。普魯蘭多糖是一種由出芽短梗霉發(fā)酵產(chǎn)生的水溶性多糖,具有許多優(yōu)良的生物學(xué)性質(zhì),還是肝癌細(xì)胞表面去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)的天然配體,可以用作肝癌靶向載體材料。本研究構(gòu)建了兩種基于普魯蘭多糖的肝癌靶向納米共載體系,用于不同作用機(jī)制的抗腫瘤藥物或基因與化療藥物的有效共載,以期聯(lián)合多種治療方法實(shí)現(xiàn)對(duì)肝癌的高效作用。研究方法:第一部分:合成p H敏感的普魯蘭多糖衍生物URPA;將抗腫瘤藥物甲氨蝶呤(MTX)以酯鍵與URPA偶聯(lián),形成高分子前藥MTX-URPA;采用紅外光譜(IR)與核磁共振氫譜(1H NMR)對(duì)URPA與MTX-URPA進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)表征。利用自組裝技術(shù)制備MTX-URPA前藥型納米粒;將抗血管生成藥物康普瑞汀(CA4)物理包埋于MTX-URPA納米粒;采用透射電鏡(TEM)觀察納米粒的形貌;采用動(dòng)態(tài)激光散射法檢測(cè)其粒徑;采用Zeta電位測(cè)定儀考察其表面荷電性質(zhì);采用紫外分光光度法(UV)考察納米粒的載藥能力。利用MTT法檢測(cè)載藥納米粒對(duì)肝癌Hep G2細(xì)胞的毒性,并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其在細(xì)胞中的攝取量。構(gòu)建裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,采用高效液相色譜法(HPLC)考察尾靜脈注射給藥后荷瘤小鼠體內(nèi)MTX與CA4的血藥濃度與組織分布及其腫瘤生長(zhǎng)情況與腫瘤組織中血管密度,綜合評(píng)價(jià)該納米共載體系的抗腫瘤活性。第二部分:通過(guò)邁克爾加成反應(yīng)合成聚氨基酯PBAE。以綠色熒光蛋白質(zhì)粒(p EGFP)為模型基因,制備PBAE/p EGFP納米復(fù)合物;采用瓊脂糖凝膠電泳考察兩者的復(fù)合情況,確定最佳PBAE/p EGFP質(zhì)量比。將MTX通過(guò)酯鍵與普魯蘭多糖偶聯(lián)形成高分子前藥MTX-PL,采用IR與1H NMR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)表征,采用UV法檢測(cè)前藥分子中MTX的含量。將MTX-PL吸附包裹于PBAE/p EGFP納米復(fù)合物的表面,形成親水多糖外殼,制備納米共載體系。采用TEM觀察納米體系的形貌;采用動(dòng)態(tài)激光散射法檢測(cè)其粒徑與粒徑分布;利用Zeta電位測(cè)定儀考察其表面荷電性質(zhì)。采用激光共聚焦顯微鏡與流式細(xì)胞術(shù)考察納米共載體系對(duì)Hep G2細(xì)胞的親和性以及p EGFP在細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率;采用CCK-8試劑盒檢測(cè)納米共載體系的細(xì)胞毒性;通過(guò)小動(dòng)物活體成像技術(shù)觀察納米共載體系在Hep G2荷瘤小鼠體內(nèi)的分布,評(píng)價(jià)其對(duì)肝癌的靶向作用。結(jié)果:第一部分:成功合成了URPA,其中尿刊�；〈葹�5.2%。URPA具有顯著的p H敏感性,響應(yīng)p H值為6.5。MTX高效偶聯(lián)于URPA多糖骨架,形成高分子前藥MTX-URPA;MTX的含量約為17.8%。成功制備了球狀形態(tài)的MTX-URPA納米粒,平均粒徑為187.1 nm;該納米粒表現(xiàn)出對(duì)肝癌Hep G2細(xì)胞的高親和性。CA4被包載于MTX-URPA納米粒中,表現(xiàn)出顯著的p H敏感體外釋藥特征。體外及動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均顯示該納米共載體系能夠?qū)崿F(xiàn)兩種治療劑的有序釋放,并有效蓄積于肝癌PLC/PRF/5荷瘤小鼠的腫瘤病灶,還具有顯著增強(qiáng)的抑瘤效應(yīng)與腫瘤血管生成抑制作用,有利于對(duì)肝癌的靶向聯(lián)合治療。第二部分:成功合成了PBAE與MTX-PL,并對(duì)其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征;MTX-PL分子中MTX的含量約為15.2%。PBAE表現(xiàn)出對(duì)p EGFP高效的復(fù)合壓縮能力;制備PBAE/p EGFP納米復(fù)合物的最佳質(zhì)量比為50/1。MTX-PL成功包覆于基因納米復(fù)合物的表面,形成具有“核殼結(jié)構(gòu)”的MTX-PL/PBAE/p EGFP納米粒,從而實(shí)現(xiàn)了基因與化療藥物的有效共載。共載納米粒的平均粒徑為172.9 nm,分布較均勻,表面呈電中性。通過(guò)納米共載體系的攜載,實(shí)現(xiàn)了p EGFP在Hep G2細(xì)胞中的高效轉(zhuǎn)染以及對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的顯著抑制。尾靜脈注射給藥后24 h,MTX-PL/PBAE/p EGFP納米粒主要分布于Hep G2荷瘤小鼠的腫瘤組織,具有較好的肝癌靶向性。結(jié)論:本研究設(shè)計(jì)并構(gòu)建了兩種基于普魯蘭多糖的肝癌靶向納米藥物或基因/藥物共載體系。一種是攜載血管生成抑制劑與化療藥物的納米共載體系,實(shí)現(xiàn)了對(duì)兩種不同作用機(jī)制藥物的肝癌靶向遞送以及高效的抗肝癌協(xié)同作用。另一種是攜載基因(模型)與化療藥物的納米共載體系,實(shí)現(xiàn)了基因與藥物的高效共載、細(xì)胞水平的協(xié)同作用以及動(dòng)物體內(nèi)的肝癌靶向遞送。這兩種納米共載體系的構(gòu)建有利于對(duì)肝癌的聯(lián)合治療,為解決臨床肝癌治療難題提供了新的策略。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉麗;吳發(fā)勝;鄧鑫;梁健;;納米藥物在肝癌靶向治療中的研究現(xiàn)狀[J];中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志;2014年02期

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本文編號(hào)：1574387