本文關鍵詞： Eca-109細胞 YAP1 RNAi P53基因　出處：《重慶醫(yī)科大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：應用RNAi技術研究Yes相關蛋白1(Yes-associated protein1, YAP1)對Eca-109細胞生物學功能的影響,為進一步研究YAP1在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用以及食管癌基因靶向治療方向提供一定的理論基礎。方法：由上海吉凱基因化學技術有限公司構建包含針對YAPI基因的shRNA慢病毒載體,將食管癌Eca-109細胞分為三組(慢病毒轉染組、空病毒轉染組、空白對照組),再用慢病毒載體、空病毒載體分別轉染至食管癌Eca-109細胞,采用qPCR和蛋白印跡法檢測轉染前后食管癌Eca-109細胞中YAPI mRNA和蛋白以及P53蛋白的表達情況；流式細胞儀檢測細胞周期、凋亡情況；CCK8實驗檢測細胞的增殖情況變化。并對以上結果通過SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。結果：慢病毒轉染組細胞內(nèi)YAP1 mRNA和蛋白表達量低于空白對照組和空病毒轉染組,P53基因表達量高于空白對照組和空病毒轉染組；Eca-109細胞轉染組增值率從第3天開始低于空病毒轉染組及空白對照組(P0.05)；慢病毒轉染組細胞G1期比例較空白對照組和空病毒轉染組增高(P0-05),早期凋亡率明顯增加(P0.05),以上差距均有統(tǒng)計學意義。結論：結果顯示干擾YAP1可成功誘導Eca-109細胞凋亡,降低Eca-109細胞的增殖能力,且YAP1抗凋亡及降低食管癌Eca-109細胞增殖能力的作用可能部分與P53基因相關。干擾YAP1可能成為食管癌基因靶向治療的進一步研究方向。
[Abstract]:Objective: to study the effect of Yes associated protein 1- Yes-associated protein 1 (YAP1) on the biological function of Eca-109 cells by RNAi technique. Methods: the shRNA lentivirus vector containing YAPI gene was constructed by Shanghai Qikai Gene Chemical Technology Co., Ltd. Esophageal carcinoma Eca-109 cells were divided into three groups: lentivirus transfection group, empty virus transfection group and blank control group. QPCR and Western blot were used to detect the expression of YAPI mRNA, protein and p53 protein in esophageal carcinoma Eca-109 cells before and after transfection, and flow cytometry was used to detect the cell cycle. The changes of cell proliferation were detected by CCK8 assay. The results were statistically analyzed by SPSS20.0 software. Results: the expression of YAP1 mRNA and protein in lentivirus transfected group was lower than that in blank control group and empty virus group. The expression of p53 gene in the transfected group was higher than that in the blank control group and the empty virus transfection group, the proliferation rate of the transfected group was lower than that of the empty virus transfection group and the blank control group from the 3rd day, and the ratio of G1 phase of the lentivirus transfection group was higher than that of the blank control group. The rate of early apoptosis was significantly increased in both groups. Conclusion: interference of YAP1 can induce apoptosis of Eca-109 cells successfully. The inhibition of proliferation of Eca-109 cells and the role of YAP1 in inhibiting apoptosis and reducing proliferation of esophageal cancer Eca-109 cells may be partly related to p53 gene. Interfering with YAP1 may be a further research direction for gene targeting therapy of esophageal cancer.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1

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本文編號：1554690