本文關(guān)鍵詞： 乳腺癌 15-Lox-1 p-AKT PPARγ　出處：《吉林大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：乳腺癌(breast cancer)作為女性最常見的惡性腫瘤之一,已經(jīng)嚴重威脅女性生命健康。乳腺癌的病程進展快,同時病灶容易轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移后迸發(fā)癥是乳腺癌患者死亡的重要原因。乳腺癌細胞可經(jīng)血液或淋巴道途徑轉(zhuǎn)移到胸膜、肺、骨、肝及腦等部位。對于腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制隨之成為研究者研究腫瘤預防及治療的熱點。在我國,每年約新增20萬例女性乳腺癌患者,其發(fā)病率與死亡率逐年上升,盡管乳腺癌通過手術(shù)治療、化療、放療及內(nèi)分泌和分子靶向治療等手段可以有效地治愈臨床原位癌,但對于已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移乳腺癌患者的總體治療效果及預后并未達到理想狀態(tài)。乳腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機制的研究,是尋找治療對策的關(guān)鍵。本課題的研究在某種程度上推進了腫瘤基因治療的進程。研究者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Akt蛋白(絲氨酸/蘇氨酸激酶--蛋白激酶B)十幾年,并且在近些年來的研究中,這個蛋白的關(guān)注度逐年升高。AKT蛋白具有調(diào)控細胞周期、細胞代謝、細胞存活、基因轉(zhuǎn)錄等多種生物學功能,參與到癌癥、糖尿病等疾病的過程中。過氧化酶體增殖物激活受體(PPARs)屬于核受體超家族成員,包括PPARα、PPARβ和PPARγ三種亞型。目前人們對于PPARγ的研究比較深入,PPARγ被其相應的配體激活后與過氧化物酶體增殖物反應元件(PPRE)結(jié)合,然后調(diào)控靶基因的表達水平,參與調(diào)節(jié)細胞生理過程。研究結(jié)果表明,PPARγ是糖尿病、代謝綜合癥、動脈粥樣硬化等慢性疾病防治的重要靶點。近年的研究發(fā)現(xiàn),各種腫瘤細大部分存在PPARγ的表達,因此研究者們預測PPARγ可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。許多PPARγ的配體可以抑制各種腫瘤細胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移,還有誘導腫瘤細胞凋亡以及抗腫瘤血管生成等作用,因此尋找PPARγ的配體在腫瘤防治過程中有著巨大的價值,它可以通過抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、復發(fā)緩解或者治療腫瘤。15-LOX-1可以將亞油酸、花生四烯酸分別代謝為13-S-HODE、15-HETE。13-S-HODE可以激活PPARγ和PPARβ促進腫瘤細胞生長,而15-HETE可以與PPARγ結(jié)合后激活死亡受體和CASPASE3通路誘導腫瘤的凋亡。13-S-HODE、15-HETE同時也是PPARβ的配體,研究發(fā)現(xiàn)PPARβ是一個腫瘤促進基因,在乳腺癌細胞MCF-7中PPARβ可以促進細胞的增殖,侵襲。研究者們認為5-LOX和血小板型12-LOX都有促癌的作用,8-LOX和15-LOX-2具有抑癌的作用。但是,大量文獻對表明15-LOX-1的功能既有促癌作用又有抑癌作用,結(jié)果不一致,尤其是在乳腺癌中的作用仍然存在著很大的爭議。因此非常有必要確認15-Lox-1在乳腺癌中功能,這將有助于人類進一步加強對腫瘤的治療的進展。本課題主要從體內(nèi)外實驗探究15-Lox-1對乳腺癌細胞侵襲的作用,實驗所用的細胞為人的乳腺癌細胞MCF-7。本文探討了15-Lox-1在乳腺癌中影響腫瘤促進因子AKT和腫瘤抑制因子PPARγ的平衡關(guān)系,檢測了15-Lox-1對乳腺癌細胞體外侵襲的影響,也檢測了15-Lox-1對乳腺癌細胞體內(nèi)遠處轉(zhuǎn)移行為的影響。體外實驗轉(zhuǎn)染15-Lox-1到MCF-7細胞中與轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒的MCF-7形成對照,通過Transwell小室法研究15-Lox-1的上調(diào)對細胞侵襲行為的影響,通過細胞計數(shù)我們確認15-Lox-1上調(diào)促進細胞的生長速度。通過Western Blot(蛋白免疫印跡實驗)我們發(fā)現(xiàn)細胞中STAT3,AKT,磷酸化STAT3和磷酸化AKT發(fā)生變化。同時我們確認了在血清中影響15-lox-1的物質(zhì)是脂質(zhì)豐富的白蛋白。為了證明是15-Lox-1代謝產(chǎn)物起到作用,我們使用15-Lox-1hi-MCF-7細胞上清液處理乳腺癌細胞,發(fā)現(xiàn)上清液中的物質(zhì)同樣的影響了細胞中STAT3,AKT,磷酸化STAT3和磷酸化AKT的表達。為了確定15-Lox-1與磷酸化AKT和PPARγ關(guān)系,我們在體外實驗中使用了15-Lox-1的激動劑和拮抗劑來驗證我們的假設(shè)。最后我們使用抑制劑抑制住15-Lox-1觀察細胞生長。通過以上實驗,我們觀察到乳腺癌細胞中15-Lox-1的表達與遠處轉(zhuǎn)移行為有關(guān),轉(zhuǎn)染15-Lox-1的細胞體外侵襲性增強,體外生長速度加快。我們的結(jié)果表明脂質(zhì)豐富的白蛋白可以激活15-Lox-1,然后產(chǎn)生15-HETE等代謝產(chǎn)物。15-Lox-1在癌癥生物學中的作用有著環(huán)境依賴性。15-Lox-1可以增強磷酸化的STAT3和磷酸化的AKT,所以它是一種腫瘤促進子。但是同時它的代謝產(chǎn)物可以激活PPARγ,這讓15-lox-1成為腫瘤抑制因子。通過抑制15-Lox-1的表達,可以降低15-Lox~(hi)-MCF-7細胞的生長速度并且降低了抗細胞凋亡信號的表達,在低糖環(huán)境下,細胞的生存能力受到抑制。
[Abstract]:Breast cancer is one of the most common malignant tumors in breast cancer , which has seriously threatened the health of female life . In recent years , it has been found that PPAR緯 is an important target for the prevention and treatment of breast cancer . The effects of 15 - Lox - 1 on the invasion of breast cancer cells by 15 - Lox - 1 were investigated .

【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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本文編號：1548633