發(fā)布時(shí)間：2018-02-28 16:15

  本文關(guān)鍵詞： 原發(fā)性肝癌 索拉非尼耐藥 ABCG2 LRP 免疫組織化學(xué) RT-PCR　出處：《鄭州大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景原發(fā)性肝癌(primary liver cancer,PLC)是預(yù)后較差的惡性腫瘤,以肝細(xì)胞肝癌為主。對(duì)于確診為肝細(xì)胞癌的患者,多采取以手術(shù)切除為主的綜合治療。但部分肝細(xì)胞癌患者確診時(shí)已處于中晚期,缺乏有效的治療手段。研究發(fā)現(xiàn),以索拉非尼為代表的分子靶向抗腫瘤藥物對(duì)部分晚期肝細(xì)胞癌患者有確切的療效[1]。但大量臨床應(yīng)用后發(fā)現(xiàn),部分患者在規(guī)律服用索拉非尼一段時(shí)間后出現(xiàn)了索拉非尼耐藥,以至于治療效果較差,即使合并應(yīng)用其他類型的抗腫瘤細(xì)胞毒性藥物,其治療效果亦不理想。這是肝細(xì)胞癌預(yù)后較差的重要原因之一。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)[2,3],ATP結(jié)合膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G2(ATP-binding cassette G member2,ABCG2)及肺耐藥蛋白(lung resistance protein,LRP)與多種腫瘤組織耐藥相關(guān)。研究同時(shí)發(fā)現(xiàn),ABCG2作為腫瘤干細(xì)胞重要的表型標(biāo)志物,在維持腫瘤干細(xì)胞的干性及在腫瘤干細(xì)胞功能完善方面發(fā)揮重要作用。這進(jìn)一步說(shuō)明ABCG2蛋白在腫瘤細(xì)胞耐藥中可能具有重要作用�；谝陨匣A(chǔ)及臨床研究結(jié)果,本研究課題對(duì)ABCG2及LRP蛋白在索拉非尼耐藥的肝細(xì)胞癌與索拉非尼敏感肝細(xì)胞癌之間表達(dá)的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì),分析這兩種蛋白與肝細(xì)胞癌索拉非尼耐藥的關(guān)系,以探索ABCG2及LRP蛋白在原發(fā)性肝癌出現(xiàn)索拉非尼耐藥所發(fā)揮的作用。目的通過(guò)研究索拉非尼耐藥及索拉非尼敏感肝細(xì)胞癌ABCG2及LRP蛋白表達(dá)的差異,探討它們與肝細(xì)胞癌出現(xiàn)索拉非尼耐藥的關(guān)系,以期為肝細(xì)胞癌患者制定有針對(duì)性和個(gè)體化的治療方案提供理論依據(jù)。方法1.收集2013年6月至2016年8月我院收治的原發(fā)性肝癌患者的臨床資料及石蠟組織標(biāo)本38例,所有患者均經(jīng)手術(shù)切除標(biāo)本病理診斷為肝細(xì)胞癌。所有患者均為單發(fā)腫瘤,術(shù)前均未進(jìn)行放、化療等其他治療;確認(rèn)復(fù)發(fā)且無(wú)法手術(shù)后,均規(guī)律口服索拉非尼(商品名:多吉美,400mg/次,bid)。所有規(guī)律服用索拉非尼的肝細(xì)胞癌患者均根據(jù)RECIST療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)索拉非尼的治療效果。其中索拉非尼耐藥患者13例,索拉非尼敏感患者25例。收集同期收治入院的肝臟海綿狀血管瘤周?chē)８闻K組織標(biāo)本15例。采用免疫組織化學(xué)SP法,檢測(cè)上述三組組織中ABCG2及LRP蛋白的表達(dá)情況,并于高倍顯微鏡下觀察評(píng)分。記錄所有患者肝癌腫塊大小,患者年齡等資料,應(yīng)用相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理收集整理的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。2.索拉非尼溶液誘導(dǎo)培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系SMMC-7721,以獲得索拉非尼耐藥肝癌SMMC-7721細(xì)胞系,并用RT-PCR方法定量檢測(cè)耐藥細(xì)胞系與原始細(xì)胞系中ABCG2 m RNA及LRP m RNA表達(dá)的差異。結(jié)果1.索拉非尼耐藥組、索拉非尼敏感組及正常肝臟組織組的一般臨床資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。ABCG2蛋白在索拉非尼耐藥組、索拉非尼敏感組以及正常肝臟組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為84.6%、44.0%、13.3%,三組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。索拉非尼耐藥組與索拉非尼敏感組比較,正常組織組與肝癌組比較,p值分別為0.036、0.003,均P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.LRP蛋白在索拉非尼耐藥組、索拉非尼敏感組以及正常肝臟組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為76.9%、36.0%、20.0%,三組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。索拉非尼耐藥組與索拉非尼敏感組比較,正常組織組與肝癌組比較,P值分別為0.038、0.046,均P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.對(duì)于索拉非尼耐藥的肝細(xì)胞癌患者,ABCG2與LRP的關(guān)聯(lián)分析顯示,χ2=7.89,經(jīng)檢驗(yàn)p0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明兩種蛋白在索拉非尼耐藥的肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)有關(guān)聯(lián)。進(jìn)一步計(jì)算關(guān)聯(lián)系數(shù)r=0.614。4.對(duì)照組SMMC-7721細(xì)胞系及索拉非尼誘導(dǎo)培養(yǎng)的SMMC-7721細(xì)胞系的IC50值分別為1.54μmol/ml、18.8μmol/ml,后者是前者的12.2倍,耐藥性成倍增加,說(shuō)明我們成功誘導(dǎo)出索拉非尼耐藥SMMC-7721細(xì)胞系。5.ABCG2 m RNA在耐藥細(xì)胞系及對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量分別為0.927±0.315、0.157±0.071,經(jīng)檢驗(yàn),t=4.13,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;LRP m RNA在耐藥細(xì)胞系及對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量分別為0.870±0.220、0.110±0.066,經(jīng)檢驗(yàn),t=5.73,P0.01,差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過(guò)繪圖比較發(fā)現(xiàn),索拉非尼耐藥SMMC-7721細(xì)胞系與對(duì)照組SMMC-7721細(xì)胞系相比,差異明顯,耐藥組ABCG2 m RNA及LRP m RNA的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組。結(jié)論1.ABCG2、LRP的高表達(dá)可能是原發(fā)性肝癌對(duì)索拉非尼耐藥的重要原因之一,有可能成為判斷肝細(xì)胞癌患者應(yīng)用索拉非尼敏感與否的指標(biāo)。2.ABCG2、LRP蛋白在索拉非尼耐藥患者中的表達(dá)有明顯關(guān)聯(lián)性,它們可能在促進(jìn)肝癌出現(xiàn)索拉非尼耐藥方面有協(xié)同作用。
[Abstract]:Primary liver cancer ( PLC ) is a malignant tumor with poor prognosis , mainly hepatocellular carcinoma . In recent years , we found that ABCG2 plays an important role in the development of multidrug resistance in hepatocellular carcinoma . It has been found that ABCG2 plays an important role in the development of multidrug resistance in hepatocellular carcinoma . The expression of ABCG2 and LRP in normal liver tissues was detected by immunohistochemical SP method . The results showed that the positive rates of ABCG2 and LRP were significantly different between the two groups ( P < 0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1548017