本文關(guān)鍵詞： CCR7乳腺癌 RNA干擾 細胞生長 細胞轉(zhuǎn)移　出處：《昆明醫(yī)科大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： 本實驗利用RNA干擾技術(shù),以乳腺癌細胞為研究對象,下調(diào)乳腺癌細胞系中的CCR7基因的表達,研究CCR7在乳腺癌體外體內(nèi)生長、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中所發(fā)揮的生物學作用。方法：1、常規(guī)培養(yǎng)乳腺癌細胞系MDA-MB-231、4T1-luc、MDA-MB-361、T47D、 MDA-MB-468、MCF-7、MCF10A、184B5、184A1、HCC1806、HCC1937、HCC1580、 MCF10A,用Western blotting方法篩選CCR7高表達的乳腺癌細胞系。2、shRNA沉默CCR7的表達。通過基因設計網(wǎng)站,選擇CCR7-shRNA序列,設計實驗組和對照組。合成shRNA并對CCR7高表達細胞進行轉(zhuǎn)染。用RT-PCR方法檢測CCR7-shRNA的對細胞中CCR7的沉默效果。通過嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達CCR7-shRNA的乳腺癌細胞株。提取實驗組和對照組的mRNA, RT-PCR方法檢測干擾效果。 3、通過SRB實驗來檢測穩(wěn)定沉默CCR7對乳腺癌細胞株增殖能力的影響。4、通過細胞劃痕實驗來檢測穩(wěn)定沉默CCR7對乳腺癌細胞株遷移能力的影響。5、通過Transwell實驗來檢測穩(wěn)定沉默CCR7對乳腺癌細胞株侵襲能力的影響。6、通過小動物活體成像和病理實驗方法來檢測穩(wěn)定沉默CCR7乳腺癌細胞株對BALB/c小鼠體內(nèi)乳腺癌移植瘤生長和轉(zhuǎn)移的影響結(jié)果：1、篩選CCR7高表達的乳腺癌細胞系的Western blot結(jié)果顯示：CCR7在小鼠乳腺癌細胞株4T1-Luc中高表達,在部分乳腺癌細胞株中如MB231、T47D、 MB468、MCF7、HCC1937中有較高水平的表達。但是在正常乳腺細胞株如18485、184A1和MCF10A中幾乎檢測不到CCR7表達。最后我們選取4T1-1uc乳腺癌細胞進行后續(xù)的實驗。2、4T1-luc細胞在經(jīng)過shRNA處理后,通過RT-PCR檢測對4T1-1uc乳腺癌細胞的沉默效應,結(jié)果顯示CCR7-shRNA C#和CCR7-shRNA D#能非常有效地抑制4T1-1uc細胞中內(nèi)源性CCR7的mRNA水平的表達。3、經(jīng)細胞增殖實驗結(jié)果顯示：實驗組4T1-luc-CCR7-shRNA C#和4T1-luc-CCR7-shRNA D#細胞的增殖速度較顯著的低于4T1-luc-ShLacz細胞增殖速度。4、經(jīng)細胞劃痕實驗結(jié)果顯示：對照組4T1-luc-ShLacz細胞劃痕的愈合所需要的時間較明顯快于實驗組4T1-luc-CCR7-shRNA C#和4T1-luc-CCR7-shRNA D#細胞的愈合所需要的時間。5、經(jīng)細胞侵襲實驗結(jié)果顯示：侵襲到下室的實驗組4T1-luc-CCR7-shRNA C#和4T1-luc-CCR7-shRNA D#細胞數(shù)目比對照組4T1-luc-ShLacz細胞顯著降低。6、小鼠乳腺癌移植瘤動物模型及小鼠活體成像結(jié)果顯示：實驗組CCR7-shRNA C#細胞皮下注射的小鼠與對照組ShLacz4T1-luc細胞皮下注射組相比,乳腺癌移植瘤生長和轉(zhuǎn)移明顯受到抑制。結(jié)論：通過RNA干擾技術(shù)可以有效下調(diào)乳腺癌細胞中CCR7基因的表達。CCR7表達的下調(diào)不僅抑制了乳腺癌細胞4T1-1uc體外的增殖、遷移以及侵襲活性,而且在小鼠乳腺癌移植瘤動物模型中乳腺癌移植瘤生長和轉(zhuǎn)移也明顯受到抑制。這對臨床預測乳腺癌轉(zhuǎn)移的早期診斷有一定的意義,并可能成為臨床治療乳腺癌轉(zhuǎn)移的新的靶點。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國華;乳腺癌相關(guān)標志物的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細胞[J];上海生物醫(yī)學工程;2005年04期

8 田富國;郭向陽;張華一;;乳腺癌診治研究新進展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌的臨床研究進展[J];國外醫(yī)學(外科學分冊);2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進展[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2005年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國免疫學會第四屆學術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學術(shù)交流會論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會健;;乳腺癌治療靶標的研究進展[A];北方遺傳資源的保護與利用研討會論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細胞的生長及誘導凋亡的機制研究[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

5 劉愛國;胡冰;;乳腺癌臨床治療進展[A];安徽省抗癌協(xié)會第四次代表大會暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會成立會議、安徽省腫瘤防治進展學術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠景[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學術(shù)會議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進展[A];山西省抗癌協(xié)會第六屆腫瘤學術(shù)交流會論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國腫瘤學術(shù)大會教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽;王兆鉞;阮長耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細胞中的表達研究[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細胞擴散基因被找到[N];科技日報;2007年

3 中國軍事醫(yī)學科學院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國婦女報;2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補可消滅乳腺癌細胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個時期不一樣[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

6 辛君;乳腺癌擴散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細胞生長的分子[N];科技日報;2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日報;2011年

9 王樂　沈基飛;我科學家發(fā)現(xiàn)導致乳腺癌耐藥的新標志物[N];科技日報;2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日報;2011年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學行為及其藥物干預研究[D];武漢大學;2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細胞的分化并影響乳腺癌的預后[D];復旦大學;2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測及其功能論證[D];復旦大學;2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強表皮生長因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學;2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導乳腺癌細胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機制研究[D];東北師范大學;2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細胞樣乳腺癌細胞機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細胞EMT的分子機制研究[D];東北師范大學;2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲θ橄侔﹨f(xié)同殺傷作用的分子機制研究[D];延邊大學;2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對其生物學行為的影響[D];延邊大學;2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點[D];鄭州大學;2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號通路對乳腺癌侵襲性影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 葛廣哲;樹，

本文編號：1547079