本文關(guān)鍵詞： 癌 非小細(xì)胞肺 過氧化物還原酶 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞運(yùn)動　出處：《腫瘤》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:探討上調(diào)或沉默過氧化物還原酶4(peroxiredoxin 4,Prdx4)蛋白表達(dá)對人肺腺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡和遷移的影響。方法:利用脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒pcDNA3.0-HA-Prdx4(以空載體pcDNA3.0-HA為對照組)和特異性針對人Prdx 4基因的siRNA(Prdx4-siRNA)(以陰性對照-siRNA為對照組)分別轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞;采用實(shí)時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法分別檢測Prdx4 mRNA和蛋白的表達(dá)水平;CCK-8法和免疫熒光技術(shù)分別檢測A549細(xì)胞的增殖和凋亡情況;細(xì)胞劃痕實(shí)驗和Transwell小室法檢測A549細(xì)胞遷移能力的改變。結(jié)果:轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒pcDNA3.0-HA-Prdx4的A549細(xì)胞中Prdx4 mRNA和蛋白的表達(dá)水平明顯上調(diào)(P值均0.05),轉(zhuǎn)入Prdx4-siRNA的A549細(xì)胞中Prdx4 mRNA和蛋白的表達(dá)水平明顯下調(diào)(P值均0.05)。CCK-8檢測結(jié)果顯示,Prdx4過表達(dá)的A549細(xì)胞在24、48和72 h時的D 450 nm值均明顯高于對照組(P值均0.05),并且96 h時的D 450 nm值(2.241±0.068和1.596±0.103)差異更加明顯(P0.01);沉默Prdx4表達(dá)后A549細(xì)胞在48、72和96 h時的D 450 nm值明顯低于對照組(P值均0.01)。免疫熒光結(jié)果顯示,Prdx4過表達(dá)的A549細(xì)胞在順鉑刺激24和48 h后凋亡細(xì)胞數(shù)與對照組相比明顯減少,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05和P0.01);沉默Prdx4表達(dá)的A549細(xì)胞在順鉑刺激24和48 h后,凋亡細(xì)胞數(shù)明顯多于對照組(P0.05和P0.01)。劃痕實(shí)驗結(jié)果顯示,Prdx4過表達(dá)A549細(xì)胞的愈合率明顯高于對照組(P0.01);沉默Prdx4表達(dá)的A549細(xì)胞的愈合率明顯低于對照組(P0.01)。Transwell遷移實(shí)驗結(jié)果顯示,Prdx4過表達(dá)的A549細(xì)胞穿過小室膜的細(xì)胞數(shù)明顯多于對照組(P0.01);沉默Prdx4表達(dá)的A549細(xì)胞穿過小室膜的細(xì)胞數(shù)明顯少于對照組(P0.01)。結(jié)論:Prdx4可促進(jìn)A549細(xì)胞的增殖和遷移并抑制其凋亡,其有可能成為臨床治療肺腺癌的一個潛在靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of up-regulating or silencing the expression of peroxiredoxin 4prdx4) on the proliferation of human lung adenocarcinoma cell line A549. Methods: recombinant plasmid pcDNA3.0-HA-Prdx4 (empty vector pcDNA3.0-HA as control group) and siRNA-Prdx4-siRNA-specific targeting human Prdx4 gene (negative control group) were transfected into A549 cells by liposome transient transfection. The expression level of Prdx4 mRNA and protein was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting. The proliferation and apoptosis of A549 cells were detected by CCK-8 and immunofluorescence techniques respectively. Results: the expression level of Prdx4 mRNA and protein in A549 cells transferred into recombinant plasmid pcDNA3.0-HA-Prdx4 was significantly up-regulated by 0.05 P value, and Prdx4 mRNA and protein in Prdx4-siRNA A549 cells were detected by cell scratch assay and Transwell chamber assay. The results of CCK-8 assay showed that the D450 nm values of A549 cells with overexpression of Prdx4 were significantly higher than those of the control group at 24, 48 and 72 h, and the D450 nm values at 96 h were 2.241 鹵0.068 and 1.596 鹵0.103, respectively. The D450 nm values of A549 cells were significantly lower than those of the control group at 48, 72 and 96 h after the expression of Prdx4 was silenced. The results of immunofluorescence showed that the number of apoptotic cells in A549 cells with overexpression of Prdx4 was significantly lower than that in the control group at 24 and 48 h after stimulation with cisplatin. The difference was statistically significant (P 0.05 and P 0.01), and the expression of Prdx4 was silenced in A549 cells stimulated by cisplatin for 24 h and 48 h. The number of apoptotic cells was significantly higher than that of control group (P 0.05 and P 0.01). The results of scratch test showed that the healing rate of A549 cells with Prdx4 overexpression was significantly higher than that of control group (P 0.01), and the healing rate of A549 cells with silencing Prdx4 expression was significantly lower than that of control group (P 0.01). Transwell migration assay showed that the healing rate of A549 cells was significantly higher than that of control group. The number of cells passing through the ventricular membrane of A549 cells with overexpression of Prdx4 was significantly higher than that of the control group (P0.01A), and the number of cells passing through the membrane of A549 cells with silencing Prdx4 expression was significantly lower than that of the control group (P 0.01). Conclusion: the proliferation and migration of A549 cells can be promoted and the apoptosis of A549 cells can be inhibited by the overexpression of Prdx4. It may be a potential target for clinical treatment of lung adenocarcinoma.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室 廣東省蛋白質(zhì)組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81171958)~~
【分類號】：R734.2

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