本文關(guān)鍵詞： miRNA-96 SARI 靶基因 非小細(xì)胞肺癌 遷移 侵襲　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的肺癌已成為全球?qū)θ祟惤】低{最大的惡性腫瘤之一,在我國(guó)肺癌的發(fā)病率和死亡率均高居所有惡性腫瘤的首位。手術(shù)治療仍是目前唯一的可能治愈肺癌的手段,但是僅不足一半的患者有機(jī)會(huì)接受根治性手術(shù)治療,術(shù)后5年生存率僅為30-60%。肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是影響患者療效和生存的關(guān)鍵因素,但由于肺癌的發(fā)病和轉(zhuǎn)移機(jī)制目前仍然不清楚,缺乏有效的治療手段。因此,積極探索肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,尋找肺癌治療的新方法,對(duì)提高患者預(yù)后有重要的現(xiàn)實(shí)意義。激活蛋白-1抑制因子(SARI,受干擾素調(diào)節(jié)),是一種受I型干擾素誘導(dǎo)的早期反應(yīng)基因,是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新型抑癌基因,可以選擇性抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)作用。SARI在多種正常組織細(xì)胞中均有表達(dá),而在多種腫瘤中不表達(dá)或表達(dá)量下降。本課題小組的前期研究結(jié)果顯示SARI與肺腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移有明顯的關(guān)系,然而其在肺癌組織中表達(dá)與調(diào)控機(jī)制尚不清楚。微小RNA(mi RNA)是一類內(nèi)源性的單鏈非編碼RNA,可以在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因表達(dá),mi RNA的表達(dá)異常在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)mi RNA-96在多種惡性腫瘤中高表達(dá),并與腫瘤細(xì)胞的分化、增殖、凋亡及侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程相關(guān),呈癌基因的功能。在NSCLC中mi RNA-96的作用機(jī)制仍不明確,最近研究結(jié)果顯示mi RNA-96在NSCLC中表達(dá)升高,在肺癌細(xì)胞系中mi RNA-96表達(dá)亦上調(diào)。本研究旨在明確SARI及mi RNA-96在NSCLC的表達(dá)情況,分析mi RNA-96對(duì)SARI可能的調(diào)控機(jī)制,并探討對(duì)肺癌A549細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響,為闡明NSCLC的轉(zhuǎn)移機(jī)制和尋找新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。研究方法1、利用免疫組化法檢測(cè)SARI蛋白在120例NSCLC患者的石蠟組織標(biāo)本中的表達(dá),分析SARI表達(dá)水平與NSCLC臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。利用RT-PCR方法分析30例NSCLC患者新鮮癌組織與癌旁組織標(biāo)本中SARI m RNA的表達(dá)情況。2、利用q RT-PCR方法檢測(cè)30例NSCLC患者新鮮癌組織與癌旁組織標(biāo)本mi RNA-96的表達(dá),分析其表達(dá)水平與患者臨床病理因素的關(guān)系。進(jìn)一步分析mi RNA-96與SARI在NSCLC中之間的表達(dá)相關(guān)性。3、驗(yàn)證mi RNA-96對(duì)SARI基因的靶向調(diào)控,利用Target Scan,mi Randa和Microcosm Targets等信息學(xué)軟件分析mi RNA-96與SARI基因可能的作用位點(diǎn),熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證mi RNA-96對(duì)SARI的直接負(fù)性調(diào)控。在A549細(xì)胞中抑制mi RNA-96水平后利用RT-PCR和Western blotting法檢測(cè)SARI m RNA和蛋白水平的改變。4、分析mi RNA-96調(diào)控SARI對(duì)A549細(xì)胞遷移侵襲能力的影響,在A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染mi RNA-96 inhibitor后,MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖水平的變化,劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)遷移侵襲能力的變化。利用RAN干擾法抑制SARI的蛋白表達(dá),檢測(cè)細(xì)胞遷移侵襲能力的改變。研究結(jié)果1、免疫組化法檢測(cè)結(jié)果顯示在NSCLC中SARI陽(yáng)性率僅為41.7%(50/120),其中肺腺癌陽(yáng)性率38.9%(21/54),鱗癌陽(yáng)性率為43.9%(29/66)。RT-PCR結(jié)果顯示在癌組織中SARI基因的m RNA相對(duì)表達(dá)水平明顯低于癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)水平(0.17±0.03 vs 0.51±0.11),倍數(shù)變化為0.33,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.028)。在NSCLC中SARI的表達(dá)水平與腫瘤分化程度、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤TNM分期等密切相關(guān)(P0.05);多因素分析結(jié)果顯示僅淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期與SARI的蛋白表達(dá)水平有關(guān)。生存分析結(jié)果顯示SARI蛋白表達(dá)陽(yáng)性者5年生存率明顯高于陰性表達(dá)者(67.5%vs 41.6%,χ2=8.993,P=0.003),SARI表達(dá)是影響本組NSCLC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。2、q RT-PCR檢測(cè)顯示在NSCLC癌組織中mi RNA-96的平均表達(dá)水平為癌旁組織的2.16±0.92倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2-ΔΔCt1,P0.05)。mi RNA-96表達(dá)與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及T分期顯著相關(guān)(P0.05);與患者的性別、年齡、吸煙狀態(tài)、病理類型、腫瘤部位等無(wú)相關(guān)(P0.05)。相關(guān)性分析結(jié)果顯示在NSCLC中mi RNA-96表達(dá)水平與SARI m RNA的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)性,(r2=0.623,P=0.019)。3、生物信息學(xué)分析提示SARI可能是mi RNA-96的靶基因。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示mi RNA-96能夠抑制含有結(jié)合位點(diǎn)的SARI熒光素酶報(bào)告基因的活性,而對(duì)突變體及對(duì)照組質(zhì)粒的熒光強(qiáng)度沒(méi)有影響。在A549細(xì)胞中抑制mi RNA-96表達(dá)后SARI m RNA和蛋白水平均升高。4、抑制A549細(xì)胞中mi RNA-96表達(dá)后細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力均明顯的受到抑制;而用下調(diào)SARI的表達(dá)水平能促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲;共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示mi RNA-96 inhibitor對(duì)腫瘤細(xì)胞的遷移及侵襲的抑制作用可以部分地被SARI si RNA削弱。研究結(jié)論1、在NSCLC組織中SARI表達(dá)下降,其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及預(yù)后相關(guān);抑制SARI的表達(dá)后,細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng),結(jié)果提示SARI在NSCLC的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮抑制作用。2、在NSCLC中mi RNA-96表達(dá)升高,其表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及T分期相關(guān);抑制mi RNA-96表達(dá)后細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力均顯著下降,提示mi RNA對(duì)NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用。3、SARI為mi RNA-96直接調(diào)控的靶基因,mi RNA-96通過(guò)抑制SARI的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1534196