本文關(guān)鍵詞： 槐耳 三陰性乳腺癌 增殖 腫瘤干細胞　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的三陰性乳腺癌(Triple negative breast cancer;TNBC)由于對內(nèi)分泌治療及分子靶向治療不敏感,復(fù)發(fā)后快速進展,臨床治療TNBC面臨巨大挑戰(zhàn)。研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌干細胞在乳腺癌發(fā)生發(fā)展、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療抵抗中起重要作用。近年來,槐耳在腫瘤防治方面的作用引起了關(guān)注,并發(fā)現(xiàn)槐耳可抑制乳腺癌細胞的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移。然而,槐耳對于TNBC的抑制機理尚未完全明了。本研究目的在于探索槐耳對TNBC生物學(xué)行為的影響及其作用機制,為槐耳的臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù),為TNBC的綜合治療提供參考。研究方法和結(jié)果在本研究中,我們擬以槐耳清膏為研究藥物,初步探討槐耳對TNBC的抑制作用及其作用機制,具體包括以下2個部分:第一部分槐耳對原發(fā)性三陰性乳腺癌的抑制作用方法通過MTT比色法實驗檢測槐耳對TNBC細胞株MDA-MB-231細胞活性的影響,并通過Transwell實驗測定槐耳對該細胞侵襲和遷移的影響。使用流式細胞術(shù)檢測槐耳對MDA-MB-231細胞周期及凋亡的影響。最后,通過蛋白印跡法分析槐耳對MDA-MB-231細胞中PI3K/AKT/m TOR通路中相關(guān)蛋白的影響。結(jié)果MTT比色法實驗結(jié)果顯示槐耳以劑量依賴的方式顯著抑制MDA-MB-231細胞的活力,并在10mg/ml的濃度下及作用24小時后能夠起到有效抑制作用。槐耳作用于MDA-MB-231細胞24h、48h及72h的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為6.508±0.648mg/ml、4.207±0.453mg/ml及2.281±0.164mg/ml。同時Transwell實驗結(jié)果顯示槐耳能夠體外抑制MDA-MB-231細胞的遷移。流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn),槐耳能夠誘導(dǎo)MDA-MB-231細胞周期阻滯在G2/M期。另外,經(jīng)槐耳處理的MDA-MB-231細胞晚期凋亡率和早期凋亡率均有所增加,說明槐耳能夠促進三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞的凋亡。機制研究表明,槐耳抑制PI3K/AKT/m TOR通路中相關(guān)蛋白包括PI3K、AKT、p-AKT和m TOR的表達,從而能夠抑制三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞的增殖。第二部分槐耳對三陰性乳腺癌干細胞的影響方法利用MTT比色法實驗檢測槐耳對TNBC懸浮細胞球中細胞活性的影響,并觀察懸浮細胞球體積和數(shù)量的變化。通過克隆形成實驗檢測槐耳對乳腺癌克隆形成能力的影響。另外,通過流式細胞術(shù)檢測槐耳對CD44+/CD24-腫瘤干細胞細胞比例的影響,并利用定量聚合酶鏈反應(yīng)分析槐耳對腫瘤干細胞標(biāo)記物的影響。結(jié)果MTT比色法的結(jié)果表明,槐耳能夠抑制MDA-MB-231懸浮細胞球的細胞活性,并降低懸浮細胞球的數(shù)目和大小。在克隆形成實驗中,我們發(fā)現(xiàn)槐耳可顯著降低乳腺癌的克隆形成能力。流式細胞學(xué)實驗表明,槐耳能夠顯著減少CD44+/CD24-細胞的數(shù)目;與對照組相比,CD44+/CD24-的細胞百分比下降了49.20%(2mg/ml)。此外,槐耳組MDA-MB-231細胞中的常見的腫瘤干細胞標(biāo)記物Oct-4,Nestin和Nanog的m RNA水平也顯著降低。結(jié)論1.槐耳能夠抑制TNBC細胞系MDA-MB-231的細胞活力、侵襲和遷移;2.槐耳能夠抑制PI3K/AKT/m TOR通路,并誘導(dǎo)MDA-MB-231細胞周期阻滯在G2/M期,從而抑制TNBC細胞MDA-MB-231的增殖;3.槐耳明顯抑制MDA-MB-231懸浮細胞球的活力、生長及其克隆形成能力;4.槐耳明顯減少CD44+/CD24-腫瘤干細胞的在腫瘤細胞中的比例。
[Abstract]:In this study , the effect of locust ear on the activity of MDA - MB - 231 cells was investigated by MTT colorimetric assay . 2 . The activity of MDA - MB - 231 in TNBC cell was inhibited and the growth of MDA - MB - 231 cells was inhibited by 3 . The ratio of CD44 + / CD24 - tumor stem cells in tumor cells was significantly reduced by locust ear .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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本文編號：1530632