本文關(guān)鍵詞： 未折疊蛋白反應(yīng) 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解 p97 乳腺癌干細胞　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的探究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白穩(wěn)態(tài)調(diào)控中的未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response, UPR)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解(endoplasmic reticulum associated degradation, ERAD)在不同來源腫瘤的發(fā)生發(fā)展及乳腺癌干細胞功能調(diào)控中的作用及其分子機制。方法免疫印記及免疫組織化學(xué)的方法分析在正常及應(yīng)激條件下,不同來源腫瘤細胞及腫瘤組織中UPR及ERAD重要分子的蛋白表達及磷酸化激活水平；MTS細胞增殖實驗及流式細胞術(shù)檢測正常及應(yīng)激條件下,UPR的三條信號通路及ERAD的小分子抑制劑對于不同來源腫瘤細胞增殖凋亡的影響；腺病毒感染目的基因過表達、RNA干擾、流式細胞術(shù)、體外培養(yǎng)及體外侵襲實驗分析UPR及ERAD的小分子抑制劑及p97表達水平對于乳腺癌細胞增殖、凋亡、侵襲及乳腺癌干細胞體外功能的影響；裸鼠成瘤模型、流式細胞術(shù)及免疫組織化學(xué)的方法研究UPR及ERAD抑制劑對于乳腺癌干細胞體內(nèi)功能的影響；基因芯片、實時定量PCR、免疫印記及RNA干擾的方法分析UPR及ERAD抑制劑處理乳腺癌細胞后,影響乳腺癌干細胞功能的分子機制。結(jié)果在正常及應(yīng)激條件下,不同來源腫瘤細胞中UPR的重要分子的表達水平及其激活狀態(tài)存在顯著差異。在非應(yīng)激條件下,UPR及ERAD的小分子抑制劑能夠顯著抑制不同來源腫瘤細胞的增殖,但僅有ERAD抑制劑能引起明顯的細胞凋亡,而且UPR及ERAD的小分子抑制劑的敏感性存在差異。p97的蛋白表達水平與乳腺癌細胞的惡性程度、乳腺癌組織中Sox2的蛋白表達水平以及乳腺癌組織及細胞中CD44+/CD24腫瘤干細胞的比例呈正相關(guān)。改變?nèi)橄侔┘毎衟97的本底表達水平,會顯著影響相應(yīng)的乳腺癌干細胞的功能。p97抑制劑處理乳腺癌細胞后,可以顯著降低其細胞中腫瘤干細胞的比例、體外成球能力及體外侵襲能力。p97抑制劑可以顯著抑制由MDA-MB-231細胞所形成的裸鼠移植瘤的生長速度、其中乳腺癌干細胞的活性以及乳腺癌的復(fù)發(fā)。p97抑制劑Eer I與臨床抗腫瘤化療藥物Doxorubicin及Bortezomib聯(lián)合作用,可以顯著抑制乳腺癌細胞的體外及體內(nèi)的增殖、凋亡及乳腺癌干細胞的功能。最后,p97通過抑制C/EBP-δ及促進p53的表達,上調(diào)SKP2及Sox2的表達水平,最終維持了乳腺癌干細胞的功能。結(jié)論UPR三條信號通路及ERAD不同程度地影響普通乳腺癌細胞及乳腺癌干細胞的功能,p97由于在乳腺癌的生長及乳腺癌干細胞的功能中發(fā)揮的重要作用,有望成為抗腫瘤治療的新靶點。
[Abstract]:Objective to investigate the role of unfolded protein response (UPRs) and endoplasmic reticulum associated degradation (ERAD) in the development of tumors from different sources and the regulation of the function of breast cancer stem cells in the steady-state regulation of endoplasmic reticulum (ER) proteins. Molecular mechanisms. Methods Immunoimprinting and immunohistochemical analysis under normal and stress conditions, Protein expression and phosphorylation Activation level of UPR and ERAD in tumor cells and tumor tissues from different sources; Detection of three signal Pathways and small score of ERAD in normal and stressed condition by flow Cytometry. The effect of subinhibitors on proliferation and apoptosis of tumor cells from different sources; Overexpression of target genes in adenovirus infection, flow cytometry, in vitro culture and invasion experiments were used to analyze the effects of small molecular inhibitors and p97 expression of UPR and ERAD on the proliferation and apoptosis of breast cancer cells. Invasion and function of breast cancer stem cells in vitro; tumorigenesis model of nude mice, flow cytometry and immunohistochemical methods to study the effects of UPR and ERAD inhibitors on the function of breast cancer stem cells in vivo; gene chip, The effects of UPR and ERAD inhibitors on the function of breast cancer stem cells were analyzed by real-time quantitative PCR, immunological imprinting and RNA interference. There were significant differences in the expression level and activation status of the important molecules of UPR in tumor cells from different sources. The small molecular inhibitors of UPR and ERAD could significantly inhibit the proliferation of tumor cells from different sources under non-stress conditions. However, only ERAD inhibitors could induce apoptosis, and the sensitivity of small molecular inhibitors of UPR and ERAD was different from the malignant degree of breast cancer cells. The expression level of Sox2 protein in breast cancer tissues and the proportion of CD44 / CD24 tumor stem cells in breast cancer tissues and cells were positively correlated. It has a significant effect on the function of the corresponding breast cancer stem cells. P97 inhibitor can significantly reduce the proportion of tumor stem cells in the breast cancer cells. P97 inhibitor could significantly inhibit the growth rate of xenografts formed by MDA-MB-231 cells in nude mice. The activity of breast cancer stem cells and the combination of breast cancer recurrence. P97 inhibitor Eer I with clinical antitumor chemotherapeutic drugs Doxorubicin and Bortezomib could significantly inhibit the proliferation of breast cancer cells in vitro and in vivo. Apoptosis and the function of breast cancer stem cells. Finally, p97 upregulated the expression of SKP2 and Sox2 by inhibiting the expression of C / EBP- 未 and promoting the expression of p53. Conclusion three signaling pathways of UPR and ERAD affect the function of breast cancer cells and breast cancer stem cells to some extent because of the growth of breast cancer and the function of breast cancer stem cells. To play an important role, It is expected to be a new target for anti-tumor therapy.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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本文編號：1522047