本文關(guān)鍵詞： 肺癌 細(xì)胞免疫治療 腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞 細(xì)胞因子 預(yù)后　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景與目的:肺癌在全世界惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率中均高居首位。盡管手術(shù)、化療、放療等傳統(tǒng)治療方法有所改進(jìn)及分子靶向藥物的應(yīng)用,患者的5年生存率僅有17%,尋找肺癌治療的新策略成為當(dāng)今研究的焦點(diǎn)。既往學(xué)者們認(rèn)為肺癌是一種免疫原性較弱的腫瘤。近年來(lái),隨著程序性死亡蛋白-1(programmed cell death protein-1,PD-1)、其配體PD-L1及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4,CTLA-4)等免疫檢查點(diǎn)分子的發(fā)現(xiàn),肺癌免疫治療取得新的突破,提示免疫治療將開(kāi)啟肺癌治療的新時(shí)代。研究表明,肺癌患者的免疫狀態(tài)與其預(yù)后密切相關(guān)。肺癌細(xì)胞存在MHC-I類(lèi)分子的表達(dá)下調(diào)、PD-L1的表達(dá)上調(diào),繼而逃避T細(xì)胞的免疫監(jiān)視,導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸的發(fā)生。肺癌細(xì)胞出現(xiàn)主要組織相容性復(fù)合體I相關(guān)分子A(major histocompatibility complex class I-related chain A,MICA)及主要組織相容性復(fù)合體I相關(guān)分子B(major histocompatibility complex class I-related chain B,MICB)的表達(dá)上調(diào),MICA、MICB可從腫瘤細(xì)胞中脫落,形成血清可溶性MICA(soluble MICA,s MICA)、血清可溶性MICB(soluble MICB,s MICB),抑制免疫細(xì)胞功能。此外,肺癌發(fā)生時(shí),腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)成分發(fā)生改變。另外,腫瘤細(xì)胞及免疫細(xì)胞可釋放一些細(xì)胞因子,抑制機(jī)體免疫應(yīng)答。免疫治療可有效打破機(jī)體免疫抑制發(fā)揮抗腫瘤作用。研究表明,肺癌患者存在免疫細(xì)胞的功能異常,因此應(yīng)用體外活化擴(kuò)增淋巴細(xì)胞的細(xì)胞免疫治療(cellular immunotherapy,CIT)可能改善患者預(yù)后。目前少數(shù)研究表明應(yīng)用CIT可能改善肺癌患者的預(yù)后,但CIT具體應(yīng)用時(shí)間、與化療的聯(lián)合治療模式仍需進(jìn)一步探討。此外,目前尚缺乏評(píng)判CIT對(duì)免疫狀態(tài)影響的相關(guān)指標(biāo)。我們通過(guò)以下實(shí)驗(yàn)對(duì)肺癌患者免疫狀態(tài)及CIT治療肺癌的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)方法:1、收集我院病理學(xué)診斷為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的患者的組織標(biāo)本,通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)肺癌組織中肺癌表面分子MHC-I類(lèi)分子、PD-L1、MICA/B及腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8+淋巴細(xì)胞的表達(dá),并分析肺癌表面分子及腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8+淋巴細(xì)胞與患者臨床特征及預(yù)后的相關(guān)性。2.收集我院初治肺癌患者的血清標(biāo)本,通過(guò)Luminex方法檢測(cè)血清中細(xì)胞因子如IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α等的含量,通過(guò)ELISA法檢測(cè)血清中s MICA、s MICB的含量,分析血清中細(xì)胞因子及s MICA、s MICB的含量與患者臨床特征及預(yù)后的相關(guān)性。3.通過(guò)流式細(xì)胞術(shù),檢測(cè)順鉑處理A549及H446細(xì)胞后,A549及H446細(xì)胞表面NKG2D配體(MICA、MICB)、CD226配體(CD112、CD155)及TRAIL受體(DR4、DR5)等表面分子表達(dá)的變化,探討順鉑增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性可能的機(jī)制。通過(guò)鈣黃綠素釋放法,明確順鉑聯(lián)合NK細(xì)胞對(duì)A549及H446細(xì)胞是否存在協(xié)同殺傷效應(yīng)。4.回顧性分析我院CIT與化療聯(lián)合及單純化療的NSCLC患者的臨床數(shù)據(jù),對(duì)兩組患者的無(wú)進(jìn)展生存期(progression free survival,PFS)及總體生存期(overall survival,OS)進(jìn)行評(píng)估,明確CIT與化療聯(lián)合與單純化療相比是否改善NSCLC患者的預(yù)后。并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CIT患者CIT前后外周血淋巴細(xì)胞比例的變化,通過(guò)Luminex法檢測(cè)CIT治療前后血清中細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α等的含量變化,尋找評(píng)判CIT對(duì)免疫狀態(tài)影響的相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果:1、肺癌組織存在MHC-I類(lèi)分子表達(dá)下調(diào);COX回歸分析顯示MHC-I類(lèi)分子的表達(dá)與患者性別、吸煙指數(shù)、病理類(lèi)型、TNM分期及腫瘤分化程度相關(guān),男性患者、吸煙指數(shù)≥400、鱗癌患者M(jìn)HC-I類(lèi)分子下調(diào)明顯,且TNM分期越晚、腫瘤分化程度越差,其MHC-I類(lèi)分子表達(dá)下調(diào)越明顯;MHC-I類(lèi)分子高表達(dá)組的PFS及OS均優(yōu)于MHC-I低表達(dá)組(P0.05)。肺癌組織存在PD-L1表達(dá)上調(diào);PD-L1表達(dá)水平與患者吸煙指數(shù)及病理類(lèi)型相關(guān),吸煙指數(shù)≥400及鱗癌患者其PD-L1表達(dá)水平增高;PD-L1低表達(dá)組的PFS優(yōu)于PD-L1高表達(dá)組(P0.05),PD-L1低表達(dá)組OS較PD-L1高表達(dá)組有延長(zhǎng)趨勢(shì),但差異無(wú)顯著性(P0.05)。肺癌組織中存在MICA/B的表達(dá)上調(diào);MICA/B表達(dá)水平與患者臨床特征及預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)性。肺癌基質(zhì)及癌巢中存在CD8+細(xì)胞浸潤(rùn),且基質(zhì)中CD8+細(xì)胞數(shù)高于癌巢中細(xì)胞數(shù);基質(zhì)與癌巢中CD8+細(xì)胞數(shù)與患者病理類(lèi)型相關(guān),鱗癌患者基質(zhì)與癌巢中CD8+細(xì)胞高于腺癌中CD8+細(xì)胞數(shù);基質(zhì)中CD8+細(xì)胞高表達(dá)組的PFS優(yōu)于低表達(dá)組(P0.05),其OS也有延長(zhǎng)趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);癌巢中CD8+細(xì)胞高表達(dá)組與低表達(dá)組的PFS及OS無(wú)明顯差異(P0.05)。2、肺癌患者存在TNF-α及IFN-γ水平下調(diào),IL-6水平上調(diào),且差異有顯著性(P0.05);肺癌患者IL-2有降低趨勢(shì),IL-10有增加趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。COX多因素回歸分析,各細(xì)胞因子的表達(dá)水平與患者臨床特征及預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)性(P0.05)。肺癌患者s MICA水平高于健康志愿者(P0.05),肺癌患者s MICB水平較健康志愿者有升高趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)�；颊遱 MICA及s MICB水平與患者臨床特征無(wú)相關(guān)性。s MICA低水平患者的PFS較高水平患者明顯延長(zhǎng)(P0.05)。而s MICB表達(dá)水平與患者預(yù)后無(wú)相關(guān)性(P0.05)。3、順鉑可上調(diào)肺癌細(xì)胞表面MICA、MICB、CD112、CD155、DR4、DR5的表達(dá),且與順鉑處理時(shí)間呈時(shí)間依賴(lài)性。順鉑聯(lián)合NK細(xì)胞對(duì)A549及H446細(xì)胞均有協(xié)同殺傷作用,且殺傷活性與順鉑預(yù)處理時(shí)間呈時(shí)間依賴(lài)性。4、CIT與化療聯(lián)合組與單純化療組相比PFS與OS明顯延長(zhǎng)(P0.05)。亞組分析顯示I-IIIA期患者,CIT與化療聯(lián)合組與單純化療組相比PFS無(wú)明顯差異(P0.05),其OS有延長(zhǎng)趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。IIIB-IV期患者CIT與化療聯(lián)合治療組與單純化療組相比PFS與OS均明顯延長(zhǎng)(P0.05)。CIT治療后患者外周血中CD3+CD8+T細(xì)胞明顯增加,Treg細(xì)胞明顯減少,差異有顯著性(P0.05),CD3+CD4+、CD3-CD56+、CD3+CD56+細(xì)胞無(wú)明顯差異。CIT治療前后血清中細(xì)胞因子水平無(wú)明顯變化(P0.05)。結(jié)論:1、肺癌細(xì)胞存在MHC-I類(lèi)分子的表達(dá)下調(diào)、PD-L1及MICA/B分子的表達(dá)上調(diào),MHC-I類(lèi)分子的表達(dá)下調(diào)及PD-L1的表達(dá)上調(diào)與患者不良預(yù)后相關(guān)。MICA/B的表達(dá)與患者預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)性。肺癌基質(zhì)及癌巢中存在CD8+細(xì)胞表達(dá),基質(zhì)中CD8+細(xì)胞數(shù)高于癌巢中細(xì)胞數(shù)�；|(zhì)中CD8+細(xì)胞的表達(dá)與預(yù)后相關(guān),而癌巢中CD8+細(xì)胞的表達(dá)與預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)性。2、肺癌患者TNF-α及IFN-γ水平較健康志愿者明顯降低,IL-6水平較健康志愿者明顯升高,但各細(xì)胞因子表達(dá)水平與預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)性。肺癌患者s MICA水平較健康人表達(dá)增高,且s MICA高表達(dá)與肺癌預(yù)后不良有關(guān)。3、順鉑可通過(guò)促進(jìn)肺癌細(xì)胞表面MICA、MICB、CD112、CD155、DR4、DR5的表達(dá),與NK細(xì)胞產(chǎn)生協(xié)同殺傷作用。4、CIT與化療聯(lián)合可改善肺癌患者預(yù)后。CIT后外周血中CD3+CD8+細(xì)胞增加,Treg細(xì)胞減少,CD3+CD8+及Treg細(xì)胞可作為判斷CIT對(duì)免疫狀態(tài)影響的指標(biāo)。本研究中我們發(fā)現(xiàn)肺癌患者免疫狀態(tài)與預(yù)后有相關(guān)性,細(xì)胞免疫治療與化療聯(lián)合可改善肺癌患者預(yù)后。本研究結(jié)果將為CIT與化療聯(lián)合在臨床患者中的應(yīng)用提供理論依據(jù)�；熍cCIT聯(lián)合可能將成為肺癌患者的新治療模式。
[Abstract]:In recent years , with programmed cell death protein - 1 ( PD - 1 ) , its ligand PD - L1 and cytotoxic T - lymphocyte - associated antigen - 4 ( MICA ) , the expression of MHC - I molecule was down - regulated . TIL)鎴愬垎鍙戠敓鏀瑰彉.鍙﹀,鑲跨槫緇嗚優(yōu)鍙?qiáng)鍏嶇柅缁嗚優(yōu)鍙噴鏀句福?

本文編號(hào)：1511474