本文關鍵詞： 結直腸癌 COX-2 HER-2 miRNA125　出處：《安徽醫(yī)科大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的在探討環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)與人表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor type- 2, HER-2)在結直腸癌組織中的表達、相互關系及臨床意義的基礎上,研究miRNA125對RKO細胞生物學行為和COX-2與HER-2的表達的影響及相關作用機制。方法運用免疫組化法檢測1026例手術切除的結直腸癌組織中的COX-2與HER-2的表達。實時定量PCR檢測結直腸癌中miRNA125的表達,用不同濃度的miRNA125mimic及inhibitor處理結腸癌細胞株(RKO細胞),MTT檢測細胞的增殖能力；Western blot檢測PCNA表達,細胞劃痕實驗檢測miRNA125 對 RKO細胞的遷移能力影響；用Hoechst染色、Caspase3活性及BrdU法檢測miRNA125對RKO細胞凋亡的影響；Real time PCR和Western blot檢測miRNA125對RKO細胞相關炎性因子COX-2與HER-2 mRNA和蛋白表達水平；Western blot檢測miRNA125對RKO細胞MAPK信號通路相關蛋白ERK、p38、JNK磷酸化水平；為進一步研究miRNA125影響RKO細胞的作用機制,采用熒光素酶報告基因?qū)嶒炦M一步驗證miRNA125作用靶標。結果COX-2和HER-2在結直腸癌中的陽性表達率分別為77.97%(800/1026)和46.20%(474/1026), COX-2與HER-2表達之間存在相關性(P0.05)。在腫瘤體積5cm時,COX-2與HER-2的陽性表達率分別為81.48%(308/378)和57.94%(219/378)；在侵及漿膜結直腸癌組中,COX-2和HER-2陽性表達率分別為80.53%(612/760)和49.21%(374/760)。在伴有淋巴結轉移的結直腸癌中,COX-2與HER-2的陽性表達率分別為85.04%(506/595)和54.62%(325/595),轉移組與非轉移組相比較,有顯著性差異。(P0.05)；在C+D期結直腸癌組織中,COX-2與HER-2的陽性表達率分別為82.80%(443/535)和57.94%(310/535),在組織分化程度方面,低分化組COX-2與HER-2的陽性表達率分別為74.49%(210/282)和52.84%(149/282) (P0.05)。在有無遠處轉移方面,遠處轉移組COX-2與HER-2的陽性表達率分別為82.27%(116/141)和53.90%(76/141)(P0.05),說明COX-2與HER-2表達間有協(xié)同作用。而兩者陽性表達率與性別、發(fā)病年齡以及腫瘤生長部位等臨床病理因素無關(P0.05)。相對正常組織在結直腸癌組織中miRNA125表達明顯降低。轉染miR125 mimics后,RKO細胞吸光度值、PCNA明顯低于對照組；轉染miR125 inhibitor后,RKO細胞吸光度值、PCNA明顯高于對照組；劃痕實驗結果表明上調(diào)miR125 mimic對RKO細胞運動遷移能力有抑制作用,而上調(diào)miR125 inhibitor對RKO細胞運動遷移能力有促進作用；Hoechst染色、Caspase3活性及BrdU法表明miR125 mimic能顯著增加RKO細胞凋亡miR125 inhibitor RKO細胞凋亡明顯降低；Real time PCR與Western blot檢測結果顯示：miR125 mimic能顯著降低RKO細胞COX-2及HER-2的表達,miR125inhibitor組顯著升高RKO細胞COX-2及HER-2的表達；Western blot檢測結果顯示miR125 mimic能顯著降低RKO細胞ERK、p38、JNK磷酸化水平,miR125inhibitor組顯著升高RKO細胞ERK、p38、JNK磷酸化水平。將分別含有靶基因VEGF野生型3’-UTR和突變型3’-UTR的熒光酶報告基因質(zhì)粒分別轉染細胞,結果發(fā)現(xiàn),相對與野生型報告質(zhì)粒,突變型報告質(zhì)粒轉染后熒光酶活性明顯增強；將miRNA125 inhibitor、mimic及對照克隆到野生型3’-UTR的基因報告質(zhì)粒共轉染之后,結果發(fā)現(xiàn),miRNA125 inhibitor對熒光酶的活性有明顯的促進作用；將miRNA125inhibitor、mimic及對照克隆到突變型3’-UTR的基因報告質(zhì)粒共轉染之后,結果發(fā)現(xiàn),將miRNA125結合位點突變的突變型基因報告質(zhì)粒與miRNA125 inhibitor或mimics共轉染之后,對熒光素酶活性幾乎沒有影響。結論COX-2蛋白與HER-2的表達均是反映結直腸癌侵襲、轉移的重要標記物,共同影響和調(diào)節(jié)結直腸癌侵襲和轉移。miRNA125抑制結直腸癌細胞的增殖,降低結直腸癌細胞的遷移能力,且能促進結直腸癌細胞的凋亡,表明miRNA125在結直腸癌中抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。miRNA125直接靶向VEGF, VEGF影響MAPK相關信號轉導通路,而MAPK相關信號轉導通路的改變對結腸癌細胞中相關炎性因子(包括COX-2和HER-2)的表達以及生物學行為產(chǎn)生影響,進而對結腸癌發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生作用。
[Abstract]:The expression of COX - 2 and HER - 2 in colorectal cancer was investigated by immunohistochemistry . The positive rates of COX - 2 and HER - 2 in colorectal cancer were 80.53 % ( 612 / 760 ) and 49.21 % ( 374 / 760 ) , respectively . The positive rates of COX - 2 and HER - 2 were 85.04 % ( 506 / 595 ) and 54.62 % ( 325 / 595 ) respectively . The expression of COX - 2 and HER - 2 in RKO cells was significantly lower than that of control group . The results showed that miR125 inhibitor significantly decreased the expression of COX - 2 and HER - 2 in RKO cells . The results showed that miR125 inhibitor significantly decreased the expression of COX - 2 and HER - 2 in RKO cells . Conclusion The expression of COX - 2 protein and HER - 2 is an important marker for the invasion and metastasis of colorectal cancer . Conclusion The expression of COX - 2 protein and HER - 2 is an important marker for the invasion and metastasis of colorectal cancer .

【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34

【參考文獻】

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本文編號：1509686