本文關(guān)鍵詞： A-Raf激酶 MAPK信號(hào)通路 信號(hào)傳導(dǎo)　出處：《生物技術(shù)通報(bào)》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為了觀察A-Raf的突變體A-Raf-S214C對(duì)MAPK(mitogen-activated protein kinase,絲裂原活化蛋白激酶)信號(hào)通路的影響,并探討其誘發(fā)肺癌和朗格漢斯增生癥的可能分子機(jī)制。通過定點(diǎn)突變構(gòu)建pc DNA5-FRT-TO-A-Raf-S214C突變質(zhì)粒,并利用該質(zhì)粒構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)A-Raf-S214C突變體的HEK293細(xì)胞系,之后通過檢測(cè)下游ERK磷酸化程度,確定該突變體對(duì)MAPK信號(hào)通路的影響。結(jié)果顯示,通過實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)A-Raf-S214C突變體的細(xì)胞系,在不同濃度的多西環(huán)素誘導(dǎo)下,其表達(dá)量有所不同。與野生型相比,A-Raf-S214C突變體可明顯增強(qiáng)MAPK信號(hào)通路中下游信號(hào)分子ERK的磷酸化。結(jié)果表明A-Raf-S214C突變體是A-Raf激酶的激活突變體,可以導(dǎo)致MAPK信號(hào)通路下游信號(hào)分子ERK磷酸化明顯增強(qiáng)。
[Abstract]:To investigate the effect of A-Raf mutant A-Raf-S214C on the signal pathway of MAPK(mitogen-activated protein kinase, mitogen-activated protein kinase (MAPK), and to explore the possible molecular mechanism of its induction of lung cancer and Langerhans hyperplasia, the mutant plasmid PC DNA5-FRT-TO-A-Raf-S214C was constructed by site-directed mutation. The HEK293 cell line expressing A-Raf-S214C mutant stably was constructed by using the plasmid. The effect of the mutant on MAPK signaling pathway was determined by detecting the phosphorylation of downstream ERK. The cell lines stably expressing A-Raf-S214C mutant were successfully constructed and induced by different concentrations of doxycycline. Compared with the wild type, the A-Raf-S214C mutants can significantly enhance the phosphorylation of the downstream signaling molecule ERK in the MAPK signaling pathway. The results indicate that the A-Raf-S214C mutant is the activated mutants of A-Raf kinase. ERK phosphorylation of downstream signal molecules in MAPK signaling pathway was significantly increased.
【作者單位】： 昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院云南省高校靶點(diǎn)藥物篩選與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81460253,U1302225) 云南省人才培養(yǎng)項(xiàng)目(KK23201426014)
【分類號(hào)】：R597;R734.2

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本文編號(hào)：1504221