本文關(guān)鍵詞： MCF-乳腺癌細(xì)胞 OTUDB 慢病毒感染 增殖 遷移　出處：《中華腫瘤防治雜志》2017年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的去泛素化酶OTUD7B與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。為了明確OTUD7B在乳腺癌中所發(fā)揮的作用,實(shí)驗(yàn)利用慢病毒構(gòu)建高表達(dá)OTUD7B載體感染MCF-7乳腺癌細(xì)胞后對(duì)其生物學(xué)行為的影響。方法構(gòu)建帶有綠色熒光蛋白標(biāo)簽的人OTUD7B表達(dá)質(zhì)粒的慢病毒(pEGFP-hOTUD7B)及對(duì)照(pEGFP-CI)感染MCF-7乳腺癌細(xì)胞;于熒光倒置顯微鏡下觀察病毒轉(zhuǎn)染效果及應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法及免疫組化法檢測(cè)OTUD7B的表達(dá)水平;MTS法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組(pEGFP-hOTUD7B)、陰性對(duì)照組(pEGFP-CI)和正常對(duì)照組對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果感染病毒后于熒光倒置顯微鏡下觀察病毒感染效率,可見病毒感染成功。應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)病毒感染率并找出最適病毒感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection,MOI),當(dāng)MOI=30時(shí),實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和正常對(duì)照組灰度值分別為3.81±0.08、2.12±0.078和2.05±0.15,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,F=402.03,P0.001。應(yīng)用免疫組化法可見感染OTUD7B表達(dá)水平。MTS法結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和正常對(duì)照組細(xì)胞24hA值分別為0.36±0.08、0.56±0.25和0.69±0.17,F=11.819,P0.001;48hA值分別為0.65±0.17、1.45±0.48和1.82±0.63,F=23.752,P0.001;在72hA值分別為0.73±0.21、1.58±0.63和1.99±0.27,F=35.563,P0.001。細(xì)胞劃痕試驗(yàn)顯示,24h后實(shí)驗(yàn)組組遷移率為(7.7±0.91)%,陰性對(duì)照組和正常對(duì)照組遷移率分別為(13.4±1.52)%和(12.1±1.32)%,F=49.36,P0.001,48h后實(shí)驗(yàn)組遷移率為(12.4±1.29)%,陰性對(duì)照組及正常對(duì)照組遷移率分別為(32.9±1.71)%和(31.8±1.59)%,F=504.50,P0.001。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果提示,實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組及正常對(duì)照組相比明顯使細(xì)胞阻滯在G_0/G_1期,促進(jìn)其凋亡,F_(G_0/G_1)期=425.102,F_S期=135.063,均P0.001。結(jié)論成功構(gòu)建了能夠高表達(dá)OTUD7B的慢病毒載體,明顯抑制了MCF-7乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移,并促進(jìn)了其凋亡。
[Abstract]:Objective to study the role of OTUD7B in breast cancer, which is closely related to the occurrence and development of tumor. The effects of lentivirus on the biological behavior of MCF-7 breast cancer cells infected with high expression OTUD7B vector were studied. Methods Human OTUD7B expression plasmid with green fluorescent protein label was constructed. Lentivirus. MCF-7 breast cancer cells were infected with pEGFP-hOTUD7B and the control group pEGFP-CI. The effect of virus transfection was observed under fluorescence inverted microscope and the expression of OTUD7B was detected by Western blotting and immunohistochemistry. The effects of pEGFP-hOTUD7BX on the proliferation of MCF-7 breast cancer cells were detected by MTS assay. Cell migration ability was detected by cell scratch assay. Results the efficiency of virus infection was observed under fluorescence inverted microscope. The virus infection rate was detected by Western blotting method and the optimum number of viral infection was identified by multiplicity of infective moi). When MOI = 30, the gray values of the experimental group, the negative control group and the normal control group were 3.81 鹵0.08, 2.12 鹵0.078 and 2.05 鹵0.15, respectively. The expression level of OTUD7B was detected by immunohistochemical method. The 24h A values of the negative control group and the normal control group were 0.36 鹵0.08 鹵0.56 鹵0.25 and 0.69 鹵0.17 respectively. The 48 h A values were 0.65 鹵0.17, 1.45 鹵0.48 and 1.82 鹵0.63, respectively (P 0.001). At 72 h, the values of A were 0.73 鹵0.21 鹵1.58 鹵0.63 and 1.99 鹵0.27 respectively. After 24 hours, the migration rate of the experimental group was 7.7 鹵0.91g, that of the negative control group and the normal control group was 13.4 鹵1.52% and 12.1 鹵1.32%, respectively. After 48 hours, the migration rate of the experimental group was 12.4 鹵1.29%. The migration rates of negative control group and normal control group were 32.9 鹵1.71% and 31.8 鹵1.59 respectively. P0.001.The results of flow cytometry showed that compared with the negative control group and the normal control group, the cells in the experimental group were significantly blocked in the G _ 0 / G _ 1 phase, promoting its apoptosis. Conclusion the lentivirus vector with high expression of OTUD7B was successfully constructed in the number of cases (425.102FS, 135.063, P0.001.Conclusion Lentivirus vectors with high expression of OTUD7B were successfully constructed. The proliferation, migration and apoptosis of MCF-7 breast cancer cells were significantly inhibited.
【作者單位】： 河北大學(xué)醫(yī)學(xué)院;河北大學(xué)附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室;河北大學(xué)附屬醫(yī)院乳腺外科;
【分類號(hào)】：R737.9
【正文快照】： 中華腫瘤防治雜志,2017,24(9):596-601Chin J Cancer Prev Treat,2017,24(9):596-601去泛素化酶與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),其中去泛素化酶OTUD7B屬于去泛素化酶家族成員之一。研究發(fā)現(xiàn),OTUD7B被沉默后,腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(tumor necrosis factor receptor-associated f

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本文編號(hào)：1491380